血清α淀粉酶AMS测定作业指导书.doc

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1、血血清清 淀淀粉粉酶酶 A AM MS S 测测定定作作业业指指导导书书 1 1. . 实实验验原原理理 AMS 测定采用酶动态比色测定法。所用底物为 4,6-亚乙基 -,D-麦芽七糖苷 -对硝基苯酚（ EPSG7） 。 样品中 淀粉酶分解底物EPSG7，生成对硝基苯酚 （PNP） ，在 405nm 处比色，吸光度的上升速率与样品 中-淀粉酶的活力成正比。 2 亚乙基G5 2 G2PNP 5EPS-G75H2O -淀粉酶 2 亚乙基G4 2 G3PNP 亚乙基G3 G4PNP - 葡萄糖苷酶 2G2PNP2G3PNPG4PNP14H2O 5PNP14G （反应式中 PNP：对硝基苯酚；G：葡萄

2、糖） 2 2. . 标标本本采采集集与与处处理理： 2.1 病人准备：无特殊要求。 2.2 标本类型：血清、肝素或EDTA 处理的血浆、尿 液。 2.3 血清分离 血清或血浆应在收集后尽快分离出来。 未酸化的尿液，随机或限时收取。 3 3. . 标标本本存存放放： 不要用嘴吸取标本或对标本吹气，以免 唾液污染标本唾液中的淀粉酶使结果升高。血清淀粉酶 在 2025稳定一个星期，避免微生物降解作用；在 28时稳定一个月。尿液样品在28可稳定 10 天，在 1525可稳定 2 天。对于尿液，酸性pH 值 可使淀粉酶的稳定性减弱，因此，储存前pH 值应调 至大约 7.0。 4 4. . 标标本本运运输

3、输： 常温条件下运输 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 细菌污染、溶血的不能做测定。 6 6. . 实实验验材材料料 ： 6.1 AMS 测定试剂盒 （试剂 1 664 ml 试剂 2 616 ml） 6.1.1 试剂组成 试剂 1： GOODS 缓冲液 pH 7.1 100mmol/L 氯化钠 50mmol/L 氯化镁 10mmol/L -葡萄糖苷酶 23KU/L 试剂 2： EPSG7 3mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于 28，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为24 个月。 6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，

4、表明有细菌污染则 试剂不能使用。 6.1.5 注意事项：唾液和皮肤中含有-淀粉酶，应避 免用嘴吸取试剂，避免皮肤接触试剂。试剂中含叠氮钠， 避免接触皮肤及粘膜。 6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP 文 件 6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP 文 件 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU2700 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700 生化分析仪项目测定参数 .SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700 生化分析仪操作规程 .SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判

5、断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 无需手工计算，在37每个标本的结 果仪器自动以 U/L 报告。手工测定计算方法为： - -淀淀粉粉酶酶 ( (U U/ /L L) ) = = A A/ / m mi in nF F 反应总体积（ ml）1000 F = 毫摩尔消光系数 样品体积（ ml）比色杯 光径 注：1000IU/ml 到 U/

6、L 的转换系数 PNP 在 405 nm 处的毫摩尔消光系数： 9.90 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 血清或血浆 16-108U/L 随机尿液 100-1200U/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义： -淀粉酶是将淀粉降解为麦芽糖的水 解酶类。人体内的 -淀粉酶来源于多种器官：胰淀粉 酶由胰腺产生并释放到肠道中，唾液淀粉酶由唾液腺合 成并分泌到唾液中。血液中的淀粉酶由肾脏清除并经尿 液排泄。因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶 活性的升高。 检测血清、尿液中 -淀粉酶

7、活力主要用于诊断胰 腺功能紊乱和监测并发症的发展。急性胰腺炎发作病人 在腹痛开始后的几小时内，血液淀粉酶活力升高，约12 小时后达到峰值；并至少在5 天后活力回复至参考范 围内。由于多种非胰腺疾病如腮腺炎、肾功能不全等也 会引起 -淀粉酶的升高，所以 -淀粉酶对胰腺功能 紊乱的诊断特异性不高。因此，为了确诊急性胰腺炎， 还应进行脂肪酶检测 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围： 32400U/L 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法 7，AU2700 批内不精密度小于 5%，总不精密度 小于 10%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCC

8、LS 的规则。 批内精密 度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 批间精密 度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 样品 1 1842.001.08 样品 1 1801.821.01 样品 2 3982.670.67 样品 2 3833.740.97 样品 3 8414.960.59 样品 3 8177.480.92 14.3 方法学比较： 本公司的试剂盒 (y)与某商品化试剂盒 (x)，同时对 100 个样品进行 AMY 活力检测，将检测结果作方法学比 较，其统计结果如下： y=1.00 x+1.00U/L；r=0.998。 14.4 灵敏度：本试剂的

9、检测限为3U/L。 14.5 病人结果可报告范围： 32400U/L 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理： 本法线性上限为 2400U/L。 如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9氯化钠 溶液作 1：10 稀释，重新测定，结果乘以11。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理 当血清 AMS300U/L 时，在 经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法线性上限为 2400U/L。如样品测定值超过上 限时，应将样品用0.9氯化钠溶液作 1：10 稀释， 重新测定，结果乘以11。 17.2 干扰物

10、质： 当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L， 胆红素浓度684mol/L，甘油三酯浓度11.3mmol/L 时没有 观察到干扰。即使极低浓度的血红蛋白都会对检测产生干 扰。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献： 1. Friedman,R.B. and Young,D.S.Effects of Diseases on Clinical Laboratory Tests,2nd Edition,AACC Press,Washington,DC,1989. 2. Blair,H.E.,Genzyme,US

11、Patent Pending. 3. Tietz,N.W.(Ed), Clincial Guide to Laboratory Tests,2nd Edition,W.B. Saunders,1990. 4. Henry,R.J.,Cannon,D.C.and Winkelman,J.W.,Clinical Chemistry,Principles 1974. 5. NCCLS,Interference Testing in Clincial Chemistry,EP7-P,1986. 6. Young,D.S.,Effects of Drugs on Clincial Laboratory Tests,4th Edition,AACC Press,1995. 7. NCCLS,Evaluation Protocol EP5-T2,1992. 8. Rauscher,E. et al.,Fresenius Z, Analyt. Chem.,324,304;1986. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。