血清乳酸脱氢酶同功酶化学抑制法测定作业指导书.doc

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1、血血清清乳乳酸酸脱脱氢氢酶酶同同功功酶酶化化学学抑抑制制法法测测定定作业指导书作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 L-乳酸 + NAD+ 丙酮酸 + NADH + H+ 反应体系中加有抑制物，能抑制 LDH2、LDH3、LDH4和 LDH5的活性，测定结果为 LDH1。 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。草酸盐对 LDH 有抑制作用，不宜用草酸盐抗凝血浆做标本。 3 3. . 标标本本存存放放： 血清标本存放 4,2-3 天酶活力无显 著降低。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒

2、拒收收标标准准： 标本溶血、细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 LDH 6.1 试剂 宁波慈城 LDH1测定试剂盒（试剂1 90ml+ 试剂 2 10ml） 6.1.1 试剂组成 试剂 1（R1）： L-乳酸 50mmol/L 硫氰酸胍 210 mmol/L N-甲基-右旋糖酐缓冲液 pH9.3 325mmol/L 试剂 2（R2）： NAD+ 10mmol/L 6.1.2 试剂准备 试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 ：试剂保存于 4，若无污 染，可稳定 1 年。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示 当试剂有看得见的微生物生长，有 浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明

3、试剂已变质， 不能继续使用。 6.1.5 注意事项 试剂中含叠氮钠（ 0.95g/L）为防 腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的 预防措施使用试剂。 6.2 校准品 具体参见生化检验校准品和质控品. SOP 文件。 6.3 质控品 具体参见生化检验校准品和质控品. SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见AU1000 生化分析仪项目测定 参数.SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU1000 生化分析仪操作规程 . SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析

4、1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 不使用校准品进行LDH1活力检测，可 以直接使用 A/min 均值乘以计算因子得到结果，但 是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算 LDH1活力的计算因子见下表： A/min因子=LDH1活 力U/L，因子： 3333。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 1 U/L LDH 总活力 100-240，LDH1179

5、6，LDH1应总活 力的 40%。 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 ：乳酸脱氢酶（ LDH）由五种不同的同工 酶组成，催化 L-乳酸与丙酮酸的相互转换。LDH 存在 于人体所有组织的细胞质中，在肝、心和骨骼肌中含量 较高，在红细胞、胰腺、肾和胃中含量较低。在多种病 理情况下出现 LDH 活力的升高，如心肌梗死、癌症、 肝脏疾病、血液疾病或肌肉疾病。由于LDH 缺乏器官 特异性，因此在鉴别诊断时，有必要作LDH 同工酶和 其它酶类的测定，如碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶和 天门冬氨酸氨基转

6、移酶。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围： 0-1000U/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。批内 1.5%，批间 3.0%。 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与同类试剂比 较(x)，同时对 20 个样品进行 LDH1检测，将检测结果 作方法学比较，其统计结果如下：y=0.998x- 0.70U/L；r=0.9990。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为5U/L。 14.5 病人结果可报告范围： 5-100

7、0U/L。 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理 当样品测定值超过上限 1000U/L 时，应将样品用 9g/L 氯化钠溶液作稀释，重 新测定。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法对 LDH1 活力检测的最大 1000U/L。当样品 测定值超过上限 1000U/L 时，应将样品用 9g/L 氯化 钠溶液作稀释，重新测定。 17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度 1704mol/L，胆红素浓度 684mol/L，甘油三酯浓 度22.6mmol/L 时没有观察到干扰。血红蛋白浓度 0.5g/L 会影响检测结果。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1.中华医学会检验学会， LD 测定推荐方法（讨论稿） ，临床检验信息导报， 1997，4：10. 2.Onigbinde TA, et al. Clin Chem, 1990,36:1819. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。