血清总胆固醇酶试剂法测定法作业指导书.doc

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1、血血清清总总胆胆固固醇醇酶酶试试剂剂法法 测测定定法法 作业指导书作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 胆固醇酯酶 (CHE)、胆固醇氧化酶 (CHO)、过氧化 物酶(POD)、Trinder 反应偶联比色终点法。反应式如 下： CHE 胆固醇酯 + H2O 胆固醇脂肪酸 CHO 胆固醇 O2 4-胆甾烯酮 H2O2 POD 2H2O2 + 4-氨基安替比林 + 苯酚 醌亚胺 (显色) + 4H2O 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备： 12 小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA 抗凝血浆。 3 3. . 标标本本存存放放： 血清稳定性： 2025保存可稳定 1 周；4

2、8保存可稳定 1 周；-20保存可稳定 3 个 月。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂 申能总胆固醇试剂盒（货号：112 1307170 1 试剂 870ml） 6.1.1 试剂组成 Goods 缓冲液 pH6.7 50mmol/L 酚 5mmol/L 4-氨基安替比林 0.3mmol/L 胆固醇酯酶 (CHE) 200U/L 胆固醇氧化酶 (CHO) 50U/L 过氧化物酶 (POD) 3000U/L 6.1.2 试剂准备 试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮

3、存：试剂保存于28，若 无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防 腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的 预防措施使用试剂 6.2 校准品：使用 DiaSys 公司提供的 TruCal U 校准 品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和 质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操

4、操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见AU1000 生化分析仪项目测定 参数.SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU1000 生化分析仪操作规程 . SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal U 复合校准品总胆固醇校准 值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报

5、告可靠检测结果。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 （mmol/L） 合适范围： 5.2mmol/L 高度危险临界值： 5.26.2mmol/L 高度危险范围： 6.2mmol/L 1 13 3. . 临临床床意意义义： 胆固醇由体细胞合成和来自对食物的 吸收 1 1 ，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前体。 血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运 胆固醇。脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白（HDL） ， 低密度脂蛋白（ LDL） ，极低密度脂蛋白（ VLDL）和乳 糜微粒。 LDL 参与将胆固醇运送至外周细胞，而HDL 负责从细胞中吸收胆固醇。四种形式的脂蛋白与冠状动 脉粥

6、样硬化有着明确的关系。低密度脂蛋白胆固醇 （LDL-C）作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化斑块，与 冠心病 (CHD)以及相关的死亡率有着非常密切的关系。 即使总胆固醇在正常范围内，LDL-C 浓度的升高也预 示了高度危险。 HDL-C 具有抵御斑块形成的作用，它 与冠心病的发生呈负相关。事实上，低HDL-C 值是独 立的危险因子。进行个体总胆固醇的检测只是起过筛作 用，如果要对危险作较好的评估，必须另外进行 HDL-C 和 LDL-C 检测。 近年来，通过控制饮食、改变生活方式的治疗、和/ 或使用各种药物治疗 (特别他汀类药物 HMG CoA 还原 酶抑制剂 )临床试验，说明了降低总胆固醇和LD

7、L-C 水平可极大地减少CHD 的危险。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围： 0.0819.4mmol/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 批内精密 度 n=20 x (mmol/L ) s (mmol/L ) CV (%) 批间精密 度 n=20 x (mmol/L ) s (mmol/L ) CV (%) 样品 1 2.790.0461.65 样品 1 2.690.0311.15 样品 2 6.100.0370.

8、61 样品 2 5.460.0661.21 样品 3 6.570.0410.62 样品 3 6.340.0590.93 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试 剂盒(x)，同时对 78 个样品进行 CHOL 检测，将检测 结果作方法学比较，其统计结果如下： y=1.00 x+0.065mmol/L；r =0.995。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.08mmol/L。 14.5 病人结果可报告范围： 0.0819.4mmol/L。 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理： 本法对胆固醇的检测范围为 0.0819.4mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将

9、样品用 9g/L 氯化钠溶液 作 1+4 稀释，重新测定，结果 乘以 5。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理： 高度危险范围 6.2mmol/L。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法对胆固醇的检测范围为 0.0819.4mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将 样品用 9g/L 氯化钠溶液作 1+4 稀释，重新测定，结果 乘以 5。 17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度 2840mol/L，胆红素浓度 342mol/L，血红蛋白浓 度2.00g/L，甘油三酯浓度 22.6mmol/L 时没有观察 到干扰。 1 18 8. . 补补救救措措施施：

10、当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1.Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids, lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.809-61. 2.Recommendation of the Second Joint Task Fo

11、rce of European and other Societies on Coronary Prevention. Prevention of coronary heart disease in clinical practice. Eur Heart J 1998;19:1434-503. 3.Artiss JD, Zak B. Measurement of cholesterol concentration. In: Rifai N, Warnick GR , Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington

12、: AACC Press, 1997:99-114. 4.Deeg R, Ziegenhorn J. Kinetic enzymatic method for automated determination of total cholesterol in serum. Clin Chem 1983;29:1798-802. 5.Schaefer EJ, McNamara J. Overview of the diagnosis and treatment of lipid disorder. In Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997:25-48 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。