血清高密度脂蛋白胆固醇免疫抑制酶试剂测定法作业指导书.doc

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1、血清高密度脂蛋白胆固醇免疫抑制酶试剂测定法作业指导血清高密度脂蛋白胆固醇免疫抑制酶试剂测定法作业指导 书书 1 1. . 实实验验原原理理 以往高密度脂蛋白胆固醇的测定采用沉淀法 3 3 。 本试剂盒采用第三代均相法，不必离心步骤即可检测高 密度脂蛋白胆固醇。使用抗人脂蛋白抗体与低密度脂蛋 白(LDL)、极低密度脂蛋白 (VLDL)和乳糜微粒形成抗原 抗体复合物，只有剩下的高密度脂蛋白胆固醇可以被胆 固醇酶法试剂检测 4 4 。 LDL,VLDL,乳糜微粒 抗原抗体复合物 + HDL HDL-C+H2O+O2 4-胆甾烯酮 +脂肪酸 + H2O2 H2O2 + F-DAOS + 4-氨基安替比

2、林 蓝色复合物 + H2O 注：F-DAOS 为 N-乙基-N-(2-羟基-3-丙磺基 )-3,5-二 甲氧基 -4-氟苯胺 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备： 12 小时禁食。 抗人-脂蛋白抗体 CHECHO POD 2.2 类型：血清，肝素抗凝血浆。 3 3. . 标标本本存存放放： 稳定性： 46保存可稳定 4 天；- 20保存至少可稳定 2 周。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂 申能 HDL-C 测定试剂盒（货号： 141 35217170 1 试

3、剂 1 664ml试剂 2 616ml） 6.1.1 试剂组成 试剂 1（R1）： Goods 缓冲液 pH 7.0 26mmol/L 4-氨基安替比林 0.60mmol/L 过氧化物酶 (POD) 1600U/L 抗坏血酸氧化酶 1800U/L 羊抗人 b-脂蛋白抗体 适量 试剂 2（R2）： Goods 缓冲液 pH 7.0 26mmol/L 胆固醇酯酶 (CHE) 800U/L 胆固醇氧化酶 (CHO) 4000U/L F-DAOS 0.16mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于28，若 无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放

4、于 仪器的冰箱中可以稳定30 天。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防 腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的 预防措施使用试剂 6.2 校准品：使用 DiaSys 公司提供的 TruCal HDL/LDL 校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化 检验校准品和质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8

5、.1 项目基本参数：参见AU1000 生化分析仪项目测定 参数.SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU1000 生化分析仪操作规程 . SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal HDL/LDL 校准品 HDL-C 校 准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接 报告可

6、靠的检测结果。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 5 5 ：0.9mmol/L。 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 1 1, ,2 2 ： ：胆固醇由体细胞合成和来自对食物 的吸收 1 1 ，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前 体。血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它 转运胆固醇。脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白 （HDL） ，低密度脂蛋白（ LDL） ，极低密度脂蛋白 （VLDL）和乳糜微粒。 LDL 参与将胆固醇运送至外周 细胞，而 HDL 负责从细胞中吸收胆固醇。

7、四种形式的脂 蛋白与冠状动脉粥样硬化有着明确的关系。低密度脂蛋 白胆固醇（ LDL-C）作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化 斑块，与冠心病 (CHD)以及相关的死亡率有着非常密切 的关系。即使总胆固醇在正常范围内，LDL-C 浓度的 升高也预示了高度危险。 HDL-C 具有抵御斑块形成的 作用，它与冠心病的发生呈负相关。事实上，低 HDL-C 值是独立的危险因子。进行个体总胆固醇的检测 只是起过筛作用，如果要对危险作较好的评估，必须另 外进行 HDL-C 和 LDL-C 检测。 近年来，通过控制饮食、改变生活方式的治疗、和/ 或使用各种药物治疗 (特别他汀类药物 HMG CoA 还原 酶抑制剂 )

8、临床试验，说明了降低总胆固醇和LDL-C 水平可极大地减少CHD 的危险。 流行病学研究观测到男性HDL-C 浓度小于 0.9mmol/L、女性小于 1.0mmol/L，又出现空腹甘油三 酯浓度大于 2mmol/L 时，预示 冠心病的高度危险 2。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围： 0.034.7mmol/L 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 批内精密 度 n=20 x (mmol/L ) s (mmol/L ) CV

9、 (%) 批间精密 度 n=20 x (mmol/L ) s (mmol/L ) CV (%) 样品 1 0.530.0040.81 样品 1 1.140.0211.88 样品 2 1.450.0100.73 样品 3 3.230.0260.82 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试 剂盒(x)，同时对 60 个样品进行 HDL-C 检测，将检测 结果作方法学比较，其统计结果如下： y=0.97x+0.03mmol/L；r=0.994。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.03mmol/L。 14.5 病人结果可报告范围： 0.034.7mmol/L。 1 15 5. .

10、超超出出范范围围结结果果处处理理： 本试剂盒对 高密度脂蛋白胆 固醇检测范围为 0.034.7mmol/L。当样品测定值超 过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液作 1+2 稀释， 重新测定，结果乘以3。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理： 无。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本试剂盒对高密度脂蛋白胆固醇检测范围限为 4.7mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用 9g/L 氯化钠溶液作 1+2 稀释，重新测定，结果乘以 3。 17.2 干扰物质 ：当样品中抗坏血酸浓度 2840mol/L，胆红素浓度 684mol/L，血红蛋白浓度 5.00

11、g/L，甘油三酯浓度 13.6mmol/L 时没有观察到 干扰。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1.Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids, lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P

12、.809-61. 2.Recommendation of the Second Joint Task Force of European and other Societies on Coronary Prevention. Prevention of coronary heart disease in clinical practice. Eur Heart J 1998;19:1434-503. 3.Wiebe DA, Warnick GR. Measurement of high- density lipoprotein cholesterol. In: Rifai N, Warnick

13、 GR , Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997:127-44. 4.Nauck M, Maerz W, Wieland H. New immunoseparation-base homogenous assay for HDL-cholesterol compared with three homogenous and two heterogeneous methods for HDL- cholesterol. Clin Chem 1998;44:1443-51. 5. Schaefer EJ, McNamara J. Overview of the diagnosis and treatment of lipid disorder. In Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997:25-48 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。