血清总胆汁酸循环酶法测定法作业指导书.doc

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1、血血清清总总胆胆汁汁酸酸循循环环酶酶法法 测测定定法法 作业指导书作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 胆汁酸会被 3-羟甾醇脱氢（ 3-HSD）以及 -硫 代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性 地氧化，生成 3-酮类固醇以及 -硫代烟酰胺脲嘌呤二 核苷酸还原型（ Thio-NADH） 。此外生成的 3-酮类固 醇在 3-羟甾醇脱氢（ 3-HSD）及-硫代烟酰胺脲嘌 呤二核苷酸还原型（ Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸 及-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD） 。 如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单 位时间内生成的 -硫代烟酰胺脲嘌呤二

2、核苷酸还原型 （Thio-NADH）在 405nm 处的吸光度变化，以求得胆汁 酸的浓度。 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会升 高，应注意采血时间。 2.2 类型：血清、肝素或EDTA 处理的血浆。应使用新 鲜标本。标本必须避光保存。 3 3. . 标标本本存存放放 4保存可稳定 7 天，-20保存可稳定 3 个月。 4 4. . 标标本本运运输输 常温条件下避光保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准 细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂 南京波因特总胆汁酸测定试剂盒（试剂 1：260ml 试剂 2：220ml）

3、 6.1.1 试剂组成 试剂 1（R1）： -硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD) 2mmol/L Tris 缓冲液 30mmol/L 试剂 2（R2）： 脲嘌呤二核苷酸氧化型 (NAD) 2mmol/L 3a-羟甾醇脱氢酶 (3a-HSD) 5U/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28， 若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻，试剂2 必须避光保存。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应 采

4、取必要的预防措施使用试剂 6.2 校准品：使用南京波因特公司提供的TBA 校准品 对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质 控品.SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 : : 8.1 项目基本参数：参见AU1000 生化分析仪项目测定 参数.SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU1000 生化分析仪操作规程 . SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血

5、清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以南京波因特公司提供的TBA 校准品 校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告 可靠的检测结果，以mol/L 报告。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 2,3： ：成年人： 10mol/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1

6、 线性范围： 1.0690mol/L。 14.2 精密度： 批内 精密度 n=20 x (mol/ L) s (mol/ L) CV (%) 天间 精密度 n=20 x (mol/ L) s (mol/ L) CV (%) 样品 1 7.00.223.14 样品 1 7.20.32 4.4 4 样品 2 20.80.432.07 样品 2 22.40.62 2.7 7 样品 3 50.40.881.75 样品 3 52.41.01 1.9 3 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试 剂盒(x)，同时对 79 个样品进行 TBA 检测，将检测结 果作方法学比较，其统计结果如下：

7、y=0.999x+0.19mol/L；r=0.999。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1.06mol/L。 14.5 病人结果可报告范围： 1.0690mol/L。 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理 本法的检测范围为 1.0690mol/L。当样品测定值超过上限时，应将样 品用 9g/L 氯化钠溶液作 1+1 稀释，重新测定，结果乘 以 2。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法的检测范围为1.0690mol/L。当样品测 定值超过上限时，应将样品用9 g/L 氯化钠溶液作 1+1 稀释，重新测定

8、，结果乘以2。 17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度100mg/L， 胆红素 50mg/L，血红蛋白 5g/L，乳糜度 3000 度 时没有观察到干扰。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1. Jung K,Bohm M. Enzyme,23:201(1978) 2. Hafkenscheid J C M, Dijit C C M. Clin Chem,25(1):55(1979) 3. Tietz N W. Fundamentals of clinical chemistry, W. B. Sau

9、nders Co.,p674(1982) 4. Tsunoda T, Eto T, Furukawa M, Nakata T, Kusano T,Lin Y, Tashiro K, Watabe S, Tsuchiya R. Clear and colorless fluid observed during percutaneous transhepatic gallbladder drainage. Gastroenterol Jpn 1990; 25: 619-24. 5. Keller, h.: klinisch-chemische labordiagnostik fur die praxis, 2nd edition, georg thieme verlag, stuttgart, 1991: 246. 6. Scientific Tables Geigy, partial volume body fluids. Basel: Ciba-Geigy 1977; 8: 136-43. 7. Kruis W, Paumgartner G. Bile acid depletion syndrome. Dt Arztebl 1982; 79: 33-6 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。