血尿液淀粉酶AMS两点法测定作业指导书.doc

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1、血血尿尿液液淀淀粉粉酶酶 A AM MS S 两两点点法法测测定定 作作业业指指导导书书 1 1. . 实实验验原原理理 Vitros AMS 试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合 物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。 将一滴 10ul 的患者样品滴于干片上，样品就被分 布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。分布层含有反 应所需的染色淀粉底物（与支链淀粉共价化合），样 品中的淀粉酶催化该染色淀粉水解成更小的有色糖。随 后这些有色糖进入下面的试剂层。分别在孵育2.3 分 钟和 5 分钟时用反射仪测定试剂层中有色糖的反射强度， 两次读数间的差值与样品中的淀粉酶活性成正比。 测定方式：两点法 波长： 54

2、0nm 测试时间和温度： 37约 5 分钟 反应过程： 淀粉酶 染色支链淀粉 有色糖 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 样品类型：血清；肝素锂 /钠抗凝血浆。定时收集 的，稀释后的尿样。 2.3 标本采集与处理： 2.3.1 血清和血浆样品 血浆中淀粉酶活性约比血清中高20U/L。不能使 用钙螯合物作抗凝剂，如草酸，枸橼酸和EDTA。样 品采集后 4 小时内要离心标本，吸出血清。处理样品时 要将其当成生物污染品。 2.3.2 尿液样品 定时或随时采集的尿液，特别要注意 的是：含有冰醋酸，浓盐酸或者防腐剂中有乙二羟化四 甲铵和氧化汞的样品不能测淀粉酶。尿液样品在测试前

3、 要冷藏在 28。处理样品时要将其当成生物污染品。 3 3. . 标标本本的的存存放放 ：血清、血浆、尿液室温下最多7 天； 48冷藏最多 1 个月；样品不可冷冻保存。 4 4. . 标标本本的的运运输输 ：样品要放在带盖的容器内以防污染和 蒸发。 5 5. . 标标本本拒拒收收的的标标准准 ：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要 求，标本放置时间过长。 6 6. . 试试验验材材料料： 6.1 测试 AMS 所需的物品包括： Vitros 化学定标物 Kit3；Vitros 特制质控液； Vitros 7%BSA 稀释液。 强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测 试项目名称，试剂标签代码，有效

4、期限和储藏温度。 6.1.1 试剂组成：干片成分： 反应成份是染色支链淀 粉。其它成份有染色剂，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂， 稳定剂和媒染剂。干片标记：试剂盒外包装上标明了测 试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。 6.1.2 试剂准备 从冰箱中取出干片盒，在将干片盒 打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到 室温状态 1828。因此从冰箱中取出的试剂盒至少 要在室温下要放置60 分钟，而冷藏的试剂盒至少要在 室温下放置 30 分钟。去除内包装后立即将干片盒放入 仪器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24 小时之内必须将其装入仪器中。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 未开封的

5、干片盒：存储在 -18或低于该范围。 在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间 不能超过 2 周，否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不 超过 2 个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下 情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2 小时；再次 装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确， Vitros AMS 干片可保质到包装盒上标明的有效期限。 参见 VITROS 250 干化学分析仪试剂稳定性及贮存. SOP 文件。 6.1.4 变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。 6.1.5 注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损， 不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。 6.2 校准品：用

6、Vitros 化学定标物 Kit 3。血清、血 浆、尿液都用相同的定标液，不过各自的SAVs 值不 同。有关标 准液的配制，使用及保存 的配制，保存和 稳定的详情，可参阅VITROS250 干化学分析仪校准品 和质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品：使用 Vitros 特制的质控物品；若使用其 它的一些质控物品，当与别的AMS 测试方法比较时就 会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的质 控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂 的质控物品；猪或牛血清质控品的淀粉酶值会偏低，还 会因测试方法不同而变化；酶的活性可能会由于酶源， 稀释温度和复溶活化时间不同而发生变化;乙烯乙二

7、醇作稳定剂质控物品不能使用。 有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器 美国强生厂家 VITROS250 全自动干式生化分析仪。 具体测试程序请参阅操作手册的介绍。 8 8. . 操操作作步步骤骤： 将试剂复温后直接放入仪器，样品编程， 仪器 5 分后自动打印结果。具体测试程序请参阅 VITROS250 操作手册 .SOP。具体定标程序：参阅操作手 册的相关章节内容。何时进行定标：在维护和保 养时更换了仪器的重要部件。质控结果持续超出 线性范围内时，详情参阅操作手册。管理条例上 指定的时间，在美国， CL

8、IA 要求至少每 6 个月定标一 次。 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 操作建议： 将质控物质当成生物污染 品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至 少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检 查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的 有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控 检测（ IQCT）的内容。在每一批标本中都应把质控血清 作为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限， 3S 为 失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生 化室室内质控操作规程 .SOP 文件。 1 11 1. . 计计算

9、算方方法法： 以用 Vitros 化学定标物校准仪器后， 在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结 果，以 U/L 报告。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 国际单位 (U/L) 血清 30-110 血浆 比血清高约 20 尿液(随机尿样 ) 32-641 1 岁以下儿童比成人低。 此参考范围是测试98 位健康成人，然后取靶值附 近 95%的结果计算所得。参考值因性别、年龄、饮食和 地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实 验室应建立自己的参考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义： 淀粉酶是淀粉分解和消化酶，由胰腺 和唾液腺产生。急性胰腺炎，胰腺溃疡或假（性）囊肿

10、， 胰腺创伤，淀粉样变，胆总管阻塞和胸部手术后，会使 淀粉酶增加。流行性腮腺炎和肾功能不全也可能导致淀 粉酶活性升高。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围：血清 /尿液： 30-1200U/L。 14.2 精密度：在 Vitros 250 生化仪上用质控液来测 精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周 围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理 等方面发生变化都会影响结果的重复性。 日间精 密度 血血清清 x (U/L) s (U/L ) CV (%) 室间精密 度 n=20 天 x (U/L ) s (U/L ) CV (%) 样品 1 n=79 822.

11、3 样品 1 822.73.3 样品 2 n=78 4504.6 样品 2 4508.11.8 日间精 密度 尿尿液液 x (U/L) s (U/L ) CV (%) 室间精密 度 n=22 天 x (U/L ) s (U/L ) CV (%) 样品 1 n=88 500.7 样品 1 501.12.2 样品 2 n=84 1211.6 样品 2 1211.61.3 *日间精密度是将 2 至 3 份相同的样品在一天中运 行两次，然后对测试结果进行统计计算。 *室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次， 然后对测试结果进行统计计算。14.3 方法学比较： 用 Vitros700 仪器和对硝基苯

12、酚法参考方法分别测试相 同血清样品，对比结果显示Vitros 方法的准确度良好。 用 Vitros250 仪器与 Vitros700 仪器测试相同的血清 /尿液样品，对比结果显示Vitros250 方法的准确度 良好，血清： Y=0.99X+5.4（r=1.0，N=85，检测范围 20-1039U/L） ；尿液： Y=1.01X+7.6（r=0.998，N=39，检测范围 25- 1103U/L） 。 14.4 灵敏度：本试剂的检测下限为血清、尿液均为 30U/L。 14.5 特异性：经测试，以下物质对Vitros AMS 干片 法均无干扰（偏差 300U/L 时，在 经过复查等确认手段处理后

13、应及时向临床主管医生汇报。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法线性上限血清、尿液为1200U/L。血清和血 浆：如果是脂血标本或淀粉酶的活性超出系统的测试线 性范围，可按下列步骤进行稀释：淀粉酶活性低的脂血 标本用 Vitros 特制稀释液或生理盐水配制的2%牛血 清白蛋白（ PH7.4）进行稀释。说明：用Vitros 特制 稀释液时先按 1：1 的比例稀释样品，结果乘以2。 重新测试。 17.2 干扰物质：不确定。有些药物和患者的自身状况 也会影响 AMS 的测试值。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 仪器出了故障可联系仪器厂家，进行 紧急修理，如一时不能修好，用OLYMPUS AU1000 生 化分析仪测定病人标本。 1 19 9. . 参参考考文文献献 强生厂家提供的方法学手册 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处理 .SOP 文件处理。