【高中生物】微生物的基本培养技术课件 2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、微 生 物的 基 本培 养 技 术人教版高中生物 选择性必修3第2节 第1课时第1章发酵工程 概述培养基的配制方法和微生物纯培养的基本操作要求，进行酵母菌的纯培养(重、难点)。家庭自制成功率低 葡萄酒、泡菜发霉变质食用自制酸奶导致肠胃不适屡见不鲜制作过程中有杂菌混入应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，并控制发酵条件，避免杂菌进入。情境导入原因 原因解决思路 解决思路微生物：难以用肉眼观察的微小生物的统称。微生物的类群和实验室培养条件无细胞结构 原核细胞 真核细胞真菌、原生生物等1.微生物的类群病毒：SARS病毒、新冠病毒、噬菌体等毒细菌、放线菌等难以用肉眼观察的微小生物的统称。

2、微生物的类群和实验室培养条件n 确保其它微生物无法混入无菌技术2.实验室培养微生物条件n 提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件 培养基微生物：培 养 基 的 配 制人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质培养基，用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。1.1 培养基的概念、种类培养基种类 划分标准 特点 用途不加凝固剂加凝固剂，如琼脂常用于工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物的分离与鉴定、活菌计数、保藏菌种液体培养基半固体培养基固体培养基物理性质琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。1培养基的概念2培养基的种类组分 含量 提供的主要营养物质牛肉膏

3、 5g 碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨 10g 氮源和维生素等NaCl 5g 无机盐H2O 定容至1000mL 水1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养结构称取去皮的马铃薯200g，切成小块，加水1000mL，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、1520g琼脂，用蒸馏水定容至1000mL。酵母菌纯培养培养基的配方分析讨论培养酵母菌的培养基和牛肉膏蛋白胨培养基组成成分的异同点1.按物理性质划分上述两种培养基的种类：培养酵母菌的培养基是固体培养基，而牛肉膏蛋白胨培养基是液体培养基。2.上述两种培养基的营养构成。都含有水、碳源、氮源、无机盐和维生素等，其中培养酵

4、母菌的培养基中主要由糖类提供碳源，蛋白质提供氮源，牛肉膏蛋白胨培养基中主要由牛肉膏提供碳源，主要由蛋白胨提供氮源。一边阅读，一边完成学案上的表格活动1 培养酵母菌的培养基和牛肉膏蛋白胨培养基组成成分的异同点碳源无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物氮源无机氮源：N2、NH4、NO3-、NH3等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源水无机盐1.2 培养基的营养构成培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的1基本成分表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分

5、 含量 提供的主要营养牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨 10g 氮源和维生素等NaCl 5g 无机盐H2O 定容至1000ml 水例如:在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素；在培养霉菌时，一般需要将培养基调至酸性；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性；在培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等1.2培养基的营养构成2微生物对 pH、特殊营养物质、氧气的需求1.下表是某微生物培养基的成分，请分析该培养基可用来培养哪种微生物？若除去，此培养基可用来培养圆褐固氮菌吗？编号 成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4

6、CaCl2H2O含量/g 0.4 4.0 0.5 0.5 100 mL此培养基可用来培养自养型微生物。圆褐固氮菌虽可以固氮，但其同化作用类型为异养型，培养基中必须提供有机碳源，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌。2培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？不一定。例如，培养自养型微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。一边阅读，一边完成学案上的表格活动2 概述培养基的种类和营养构成几种微生物的营养和能量来源 无 菌 技 术（1）防止培养物被污染（2）防止感染实验操作者2.无菌技术是指使用较为温和的物理、化

7、学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。n 消毒：n 灭菌：1目的2类型u知识拓展芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体(不是繁殖体)，叫作芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜(如温度、水分适宜)的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。芽孢和孢子项目 主要方法 应用范围消毒 巴氏消毒法 消毒30 min或 处

8、理30 s1 min、啤酒、果酒和酱油等不耐高温的液体煮沸消毒法100 煮沸 min 家庭餐具等生活用品紫外线消毒30 W紫外灯照射 min(损伤细菌的DNA)化学药物消毒 擦拭实验者双手水源牛奶6265 8090 5630体积分数为70%75%的酒精氯水接种室、接种箱或超净工作台一边阅读，一边完成学案上的表格活动3 消毒和灭菌的主要方法及应用范围项目 主要方法 应用范围灭菌灼烧灭菌直接在酒精灯火焰的 层灼烧干热灭菌干热灭菌箱中，的热空气中维持。高压蒸汽灭菌(湿热灭菌)充分燃烧接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其他金属用具、试管口或瓶口等160170 23 h100 kPa、121 的条件下

9、，维持1530 min培养基等耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等一边阅读，一边完成学案上的表格活动3 消毒和灭菌的主要方法及应用范围 微 生 物 的 纯 培 养（1）培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体成为培养物；（2）纯培养物、纯培养：由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。配制培养基、灭菌、接种、分离和培养3.微生物的纯培养1概念2纯培养的步骤：概念：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成 肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。特征：功能：鉴定菌种的重要依据大小、形

10、状、隆起程度、颜色等。平板划线法、稀释涂布平板法(2)菌落：(1)原理：微生物群分散或稀释单个细胞单个菌落繁殖(3)获得单菌落的方法：3.微生物的纯培养3酵母菌的纯培养配制培养基 灭菌 倒平板(4)步骤.制备培养基3.微生物的纯培养倒平板注意事项：温度：50左右（可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。）操作：在酒精灯火焰附近冷凝后平板倒置3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10-20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖1.拔出锥形瓶的棉塞2.将瓶口迅速通过火焰4.等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置（既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止

11、皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。）注意：在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。任务：观看视频1.归纳对接种环灭菌的注意事项。（1）方法（2）灭菌的时间点2.归纳划线的注意事项，并说明原因。.接种和分离酵母菌3.微生物的纯培养第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌45123注意事项：每次划线前、最后一次划线后接种环进行灭菌；灼烧接种环后，要待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次；划线时，最后一区不

12、要与第一区相连，划线时用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。划线后,培养皿倒置培养。一边阅读，一边完成学案上的表格活动4 总结平板划线法的操作注意事项思考:为什么要同时放入未接种的平板？作对照，通过观察未接种平板是否有菌落存在以确定培养基是否被污染或灭菌是否彻底。完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28左右(培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异)的恒温培养箱中培养24-48 h。.培养酵母菌3.微生物的纯培养1.配制培养基的注意事项(1)如果需要调节培养基的pH，应该在定容完成后，灭菌之前进行操作。(2)培养基灭菌后要冷却到50 左右时开始倒平板。

13、其原因是琼脂是一种多糖，在98 以上熔化，在44 以下凝固，倒平板时高于50 会烫手，低于50 时，若不及时操作，琼脂会凝固。(3)倒平板时，要使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。2.实验结果的分析(1)培养未接种的培养基的目的是检测培养基是否被杂菌污染(或检查培养基制备是否合格)。未接种的培养基表面若有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染。(2)在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小上相似，酵母菌菌落一般表面光滑，多呈乳白色。(3)若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯，混入其他

14、杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。1.下列有关微生物营养物质的叙述中，正确的是 A.培养基的无机成分中，只能为微生物提供水和无机盐B.微生物的培养都需要提供碳源、氮源、水、无机盐，缺一不可C.牛肉膏蛋白胨培养基属于固体培养基，营养全面D.牛肉膏能为微生物提供特殊营养物质解析无机物种类繁多、功能多样，如CO2和N2能作为某些微生物的碳源和氮源，A错误；不同的微生物所需的条件不同，如培养自生固氮菌时不需要加入氮源，B错误；固体培养基是含有凝固剂的培养基，牛肉膏蛋白胨培养基不一定添加凝固剂，C错误；牛肉膏提供的主要营养有碳源、氮源、磷酸盐和维生素，能提供特殊营养物质维生素，D正确。2.(2022四

15、川射洪中学高二期中)下列关于某培养基配方的判断，错误的是 成分KNO3NaH2PO4FeSO4MgSO47H2O葡萄糖 水 青霉素含量4 g 3 g 0.01 g 0.48 g 30 g 1 000 mL 0.1万单位A.该培养基可以让微生物和营养物质充分接触B.该培养基可以用于对菌落进行计数C.该培养基上的生物为异养型微生物D.用该培养基培养细菌时，应将培养基的pH调至中性或弱碱性解析该培养基没有加凝固剂，按理化性质划分属于液体培养基，不能用于菌落计数，B错误。3.(2022河北石家庄高二期末)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的污染。下列有关无菌技术的叙述，正确的是 A.操作者的双手清洁后

16、，用体积分数为95%的酒精擦拭消毒B.煮沸消毒法中100 煮沸56 min可以杀死微生物细胞和所有芽孢、孢子C.接种室、接种箱使用前可用紫外线照射进行消毒D.培养基、培养皿等均须采用干热灭菌法灭菌解析操作者的双手清洁后，用体积分数为70%的酒精擦拭消毒，过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止其进入细菌体内，达不到消毒的目的，A错误；煮沸消毒法可以杀死微生物细胞和一部分芽孢、孢子，B错误；培养皿等玻璃器皿可采用干热灭菌法灭菌，培养基需要用湿热灭菌法灭菌，D错误。4.如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是 A.在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进

17、行灭菌B.划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上C.接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的D.在该操作过程中需要灼烧接种环5次解析在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，但不对培养基进行灭菌，A错误；进行划线操作时，左手将培养皿的皿盖打开一条缝隙，右手将蘸有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，B错误；在该操作过程中需要灼烧接种环6次，D错误。5.下列有关平板划线操作的叙述，正确的是 A.用接种环蘸取菌液后需要立即塞上棉塞B.待灼烧灭菌的接种环冷却后再进行划线C.划线结束后要形成首尾相连的环形圈D.每次划线都要在菌液中蘸取一环菌液解析用接种环蘸取菌液后，要将试管口再次通过火焰灭菌后再塞上棉塞，A错误；待灼烧灭菌的接种环冷却后再进行划线，B正确；最后一次划线不能和第一次划线相连，C错误；只在第一次划线时蘸取一环菌液，后续的划线不需要再蘸取菌液，D错误。