【课件】微生物的基本培养技术课件 2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、二 微生物的选择培养和计数科学实例科学实例寻找寻找耐高温的耐高温的DNA聚合酶聚合酶被广泛用于体外扩增被广泛用于体外扩增DNA片段的片段的聚合酶链式反应（聚合酶链式反应（PCR）思路：思路：耐高温的酶耐高温的酶耐高温耐高温生物体生物体高温环境高温环境（eg热泉、火山口等）热泉、火山口等）寻找寻找寻找寻找美国黄石公园热泉美国黄石公园热泉启示：启示：根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。（eg耐寒微生物、石油分解菌、耐寒微生物、石油分解菌、尿素分解菌、纤维素分解菌等）尿素分解菌、纤维素分解菌等）实验室筛选的原理：实验室筛选的原理：人为人

2、为提供提供有利于目的菌生长的有利于目的菌生长的条件条件（包括（包括营养营养、温度温度和和PH）等，）等，同时抑制或阻止其他微生物同时抑制或阻止其他微生物生长。生长。科学实例科学实例选择培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基伊红伊红-美蓝指示剂美蓝指示剂刚果红指示剂刚果红指示剂选择培养基配方的设计选择培养基配方的设计CO(NH2)2脲酶脲酶 +H2O+CO22NH3讨论：讨论：1.在选择培养基中，以在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。细菌才能生长发育繁殖。2.除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的除以尿素作为唯一氮源外，

3、该培养基的其他营养成分其他营养成分与普通与普通培养基培养基基本相同基本相同。如何确定选择培养基有选择作用如何确定选择培养基有选择作用？实验思路：实验思路：设置设置基础培养基基础培养基（egeg牛肉膏蛋白胨培养基）或牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基完全培养基作为作为对照对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数均，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数均多于多于该该选择培养基选择培养基，则该选择培养基，则该选择培养基具有选择性具有选择性。微生物的选择培养土壤取样土壤取样 注意：注意：一一般般要要铲铲去去表表层层土土，取取距距地地面面38cm的土壤层；的土壤层；取取土土样样的的工工具具和和纸纸袋

4、袋在在使使用用前前都都需需要要灭菌灭菌。1 mL1 mL1 mL1 mL1 mL1 mL9 mL 无菌水无菌水90mL无菌水无菌水10g梯度稀释菌液梯度稀释菌液101102103104105106107滴加菌液滴加菌液涂布器灭菌涂布器灭菌注意：注意：将将涂涂布布器器从从酒酒精精中中取取出出时时，要要让让多多余余的的酒酒精精在在烧烧杯杯中中滴滴尽尽，然后再放在火焰上灼烧；然后再放在火焰上灼烧；不要将不要将过热过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。以免引燃酒精。培养与观察培养与观察 待待涂涂布布的的菌菌液液被被培培养养基基吸吸收收后后，将将平平板板倒倒置置，

5、放放入入3037的的恒恒温温培培养养箱箱中中培培养养12d。在在涂涂布布有有合合适适浓浓度度菌菌液液的的平平板板上上就可以观察到分离的就可以观察到分离的单菌落单菌落。注意：实验前最好将培养皿做好标记，注意：实验前最好将培养皿做好标记，eg组别、日期、稀释度等组别、日期、稀释度等稀释涂布平板法微生物的数量测定1.稀释涂布平板法稀释涂布平板法活菌计数法活菌计数法 当样品的当样品的稀释度足够高稀释度足够高时，培养基表面生长的时，培养基表面生长的一个单菌落一个单菌落，来源于样品稀释液中的来源于样品稀释液中的一个活菌一个活菌。通过统计平板上的。通过统计平板上的菌落数菌落数，就能推测出样品中就能推测出样品

6、中大约含有多少活菌大约含有多少活菌。(1)原理原理(2)统计原则统计原则 一般选择菌落数为一般选择菌落数为30300的平板计数。的平板计数。在同一稀释度下，应在同一稀释度下，应至少至少对对3个个平板进行重复计数，然后求出平板进行重复计数，然后求出平均值平均值。(3)计算计算1.稀释涂布平板法稀释涂布平板法活菌计数法活菌计数法请计算：请计算：4号试管的结号试管的结果表明每克土壤中的活果表明每克土壤中的活菌数约为菌数约为 。1.1108(4)结果分析结果分析统计的菌落数活菌的实际数目统计的菌落数活菌的实际数目原因：当两个或多个细胞连在一起时，原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个

7、菌落。平板上观察到的只是一个菌落。1.稀释涂布平板法稀释涂布平板法活菌计数法活菌计数法2.显微镜显微镜直接直接计数法计数法 利用特定的利用特定的细菌计数板细菌计数板或或血细胞计数板血细胞计数板，在显微镜下观察、，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。(1)原理原理对细菌等对细菌等较小的细胞较小的细胞进行观察和计数进行观察和计数较厚较厚，常用于，常用于相对较大相对较大的酵母菌细胞、霉的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。菌孢子等的计数。2.显微镜显微镜直接直接计数法计数法(2)优点优点快速、直观快速、直观(3)缺点缺点统计结果一般是

8、活菌数和死菌数的总和统计结果一般是活菌数和死菌数的总和偏大偏大不适于对运动细菌的计数不适于对运动细菌的计数归纳拓展导归纳拓展导P77探究探究实践实践土壤中分解尿素的细菌的分离和计数土壤中分解尿素的细菌的分离和计数5.进一步探究进一步探究CO(NH2)2脲酶脲酶 +H2O+CO22NH3呈碱性，遇酚红指示剂呈呈碱性，遇酚红指示剂呈红色红色方法方法：在培养基中加入：在培养基中加入酚红指示剂酚红指示剂，尿素分解菌周围会形成红色圈尿素分解菌周围会形成红色圈。刚果红指示剂刚果红指示剂纤维素纤维素 +刚果红刚果红红色复合物红色复合物纤维素酶纤维素酶纤维二糖、葡萄糖等纤维二糖、葡萄糖等方法方法：在培养基中加入：在培养基中加入刚果红指示刚果红指示剂剂，纤维素分解菌周围有透明圈纤维素分解菌周围有透明圈。不与刚果红反应不与刚果红反应即不形成红色复合物即不形成红色复合物