总花色苷含量测定.pdf

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1、总花色苷含量测定分光光度法总花色苷含量测定分光光度法1、综合国内外资料,主要有以下几种计算吸光值 A 的方法1:(1)当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时,需消除叶绿素吸收含量的影响;此时,计算公式为:A=(Amax-A620)-0.1(A650-A620)A=(Amax-A620)-0.1(A650-A620)(2)含有其它干扰物质时花色苷总量的测定:a)直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质,花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。计算公式为:A=Amax A=Amax直接法吸收光谱测定:用分光光度计于 250-800nm 下全波

2、长扫描,得到花色苷在 0.1%盐酸80%乙醇中的可见光区最大吸收波长,在此最大波长下测定各样品的吸光值 A。b)pH 示差法:在加工或储藏过程中,会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。这类花色苷总量的测定,通常用 pH 示差法8。计算公式为:A=(Amax-A700)pH1.0-(Amax-A700)pH4.5 A=(Amax-A700)pH1.0-(Amax-A700)pH4.5 pH 示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在max 下的吸光度在分光光度计的线性范围内;然后制备两个样品稀释液,其中一个用氯化钾缓冲液(0.025M,pH1.0)稀释,另一个用醋酸

3、钠缓冲液(0.4M,pH4.5)稀释,将稀释液平衡 15min后,用蒸馏水做空白,分别测定两种样品稀释液在max 和 700nm 处的吸光值 A。2、花色苷总含量的测定2：通过波长扫描,确定花色苷在可见区的最大吸收波长为max。利用花色苷的结构特性,当 pH 为 1.0 时在max 处有最大吸收峰,而当 pH为 4.5 时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在max 处无吸收峰,用示差法计算溶液中总花色苷含量。计算公式为:C(mg/g)=(A0-A1)C(mg/g)=(A0-A1)V V n n M/(M/(m)m)式中:A0、A1 分别为 pH1.0、pH4.5 时花色苷在max 处的吸光值V 提

4、取液总体积(mL)n 稀释倍数M cy-3-glu(矢车菊-3-葡萄糖苷)的相对分子质量(449.4)cy-3-glu 的消光系数(29600)m 样品质量(g)3、花色苷含量 TAcy 的计算公式为(以天竺葵色素-3-葡萄糖苷计)3:TAcy(mg/hg)=(TAcy(mg/hg)=(A 433 10 V）A 433 10 V）(22 400 m22 400 m)100100 A=(OD500nm-OD700nm)pH1.0-(OD500nm-OD700nm)pH4.5 A=(OD500nm-OD700nm)pH1.0-(OD500nm-OD700nm)pH4.5式中:V 提取液的总体积(m

5、L)m 取样量(g)22 400 天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔消光系数433 天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔分子量。4、花色苷含量测定4样品处理:将各品种的干燥样品粉碎(40 目)后,准确称取 0.5 g 用 10 mL 65%的酸性乙醇提取 24 h,提取 3 次,然后将 3 次提取液混合抽滤,真空旋转挥发回收乙醇,用蒸馏水定容到 100 mL,摇匀,静止备用。测定方法:含量测定用 pH 示差法,按照下面公式计算,测定 3 次取其平均值。C(mg/L)=(ODC(mg/L)=(OD M M DFDF 1000)/1000)/1 1式中:OD 为吸光度,DF 为稀释倍数,M 为分子量,=26

6、900。花色苷5：将提取液稀释合适倍数，用1cm 比色杯测其吸光值，参照Fuleki6的计算方法转换成总花色苷浓度，公式如下：C/(mg/mL)=(C/(mg/mL)=(AMW DF 1000AMW DF 1000)/()/(1)1)式中：A 为吸光值；MW 为分子量（以矢车菊素-3-葡萄糖苷为标准7，449.4）；DF 为稀释倍数；为消光系数，26900 L.cm-1.mg-1。参考文献参考文献1 霍琳琳,苏平,吕英华,分光光度法测定桑葚总花色苷含量的研究J.酿酒,2005 年7月,第32卷第 4 期.2 李颖畅,孟宪军,张琦,于娜，蓝莓果主要物质含量及处理方式对其花色苷的影响J.食品工业科

7、技,Vol.29,N o.05,2008.3 盛小娜,王璋,不同预处理方式对速冻草莓花色苷含量的影响J.冷饮与速冻食品工业,2006年 12 月第 12 卷第 4 期.4 王振江,肖更生，廖森泰等，不同品种桑椹的抗氧化作用与其花色苷含量的相关性研究J.蚕业科学，2006，32(3).5 吕英华，苏平，那宇，李辉,桑椹色素体外抗氧化能力研究J.浙江大学学报(农业与生命科学版)33(1)：102107，2006 Fuleki T，Francis F J Quantitative methods for anthocyanins 1 Extraction anddetermine-ation of

8、total anthocyanin in cranberriesDFood Sei，1968.33：72-787 Suh H J，Noh D 0，Kang C S，eta1Thermal kinetics of color degradation of mulberryfruit extract DNahrung Food200347(2)：1321358 Ronald E1Wrolstad,Steven J1Schwartz,M Giusti1Handbook of Food Analytical ChemistryWater,Proteins,Enzymes,lipids,and Carbohy2 dratesM1Wiley US,20051