健胃消食片中橙皮苷的含量测定方案.pdf

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1、健胃消食片中橙皮苷的含量测定方案 一一、设计背景设计背景 中国经济的快速发展为我们提供了强而有力的生活质量保证，饮食的多样化为我们提供了更加多的选择，同时人们也开始出现很多饮食方面的巨大问题。从上个世纪 90 年代开始，“洋”休闲文化大举进入我国，历经 10 多年来的变化，休闲食品市场上发生了的巨大变化使得人们更注重合理又健康的养生，认为是药三分毒，所以大多数的人们对药没有太多的好感。其中，健胃消食片（如下图 1）是一种老百姓常用的中成药，口味酸甜适中，能解决一般的腹胀等消化不良的问题，又有一定的保健作用，因此很受大家喜欢。健胃消食片的组方为山楂、陈皮、山药、太子参、麦芽（炒）以及辅料制成。方

2、中陈皮有理气和胃的作用，山药有健脾和胃的功效，山楂、麦芽（炒）为佐药，本品临床上主要用于健胃消食、脾胃虚弱所致的食积症，也可用于脘腹胀满、暖腐酸臭、脾胃虚弱等引起的消化不良和厌食症，因此更加赢得大家的喜爱。本品是 2020 年版中华人民共和国药典一部中收载的品种。又因陈皮是健胃消食片组方中的主要药材，橙皮苷是陈皮的有效成分，能够很好地作为控制产品的质量指标。所以我们选择橙皮苷作为健胃消食片的含量测定对象，为本品的质量控制标准提供参考。图 1 健胃消食片 二二、设计依据设计依据 根据查阅的文献资料得知，健胃消食片中橙皮苷的含量测定方法大部分采用高效液相色谱法，此方法具有高效快速、准确的优点。经查

3、询 2020 年版中国药典一部可知，考虑到陈皮为健胃消食片的主药，橙皮苷为陈皮的有效成分，能够很好的作为质量控制指标。用高效液相色谱法（HPLC）可以有效快速检测出陈皮中橙皮苷的含量。如陈皮中橙皮苷的含量，可以用甲醇0.5%冰醋酸溶液（40：60）作为流动相（流动相中加入冰醋酸能改善分离度，对色谱柱的腐蚀程度较轻），以十八烷基硅烷键合硅胶作为固定相；检测波长为 283nm。方法中理论板数按橙皮苷峰计算应不得少于 2000，与相邻色谱峰能完全分离。三三、设计方案设计方案 1.仪器与材料（1）仪器 十万分之一电子天平（cp225D，天平赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）、高效液相色谱仪（water

4、s e2695，沃特世科技（上海）有限公司）、抽滤瓶（14311434，广州市典锐化玻实验仪器有限公司、水浴加热锅（HH-4 恒温水浴锅，金昌实验仪器源头厂家）。（2）材料 橙皮苷对照品（来源：中国食品药品检定研究院，纯度:96.2%），健胃消食片供试品是由实习公司提供（公司：湖南华纳大股份有限公司；规格：0.8g*32 片），甲醇（霍韦尔贸易（上海）有限公司，色谱纯)，冰醋酸（霍韦尔贸易（上海）有限公司，色谱纯），微孔滤膜（盐城市科源电子仪器有限公司，有机相和水相：甲醇有机系、冰醋酸水系），水为娃哈哈水，其他用到的试剂均为分析纯。2.测定方法 （1）供试品溶液的制备 取同一批次的健胃消食片

5、20 片，精密称定，同时再计算出它的平均片重。研细，称取研细的粉末约 2g，精密称定。平行称定两份健胃消食片的粉末，分别置于锥形瓶中，分别精密加入甲醇 20ml，分别称定重量。将两份样品溶液均置于水浴中加热回流 1 小时（注意要用毛巾包住瓶口，防止冷凝水倒流，流入瓶中，从而影响实验结果），放冷，再分别称定重量，加入适量甲醇补足回流过程中减失的重量，两份样品均摇匀，过滤，取续滤液，分别精密量取续滤液 5ml，分别置于 10ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别用微孔滤膜（0.45m）滤过，取续滤液，即得两份供试品溶液，备用。（2）阴性对照溶液的制备 除不加陈皮以外，按健胃消食片组方制备不含陈皮

6、的阴性样品，研细，称取研细的粉末约 2g，精密称定。平行称定两份健胃消食片阴性样品的粉末，分别置于锥形瓶中，分别精密加入甲醇 20ml，分别称定重量。按上述“（1）供试品溶液的制备”项下的方法平行制备阴性对照溶液两份，备用。（3）对照品溶液的制备 取橙皮苷对照品约 12.5mg，精密称定，置于 100ml 量瓶中，加适量甲醇使对照品完全溶解，并加甲醇稀释至刻度线，摇匀，即得橙皮苷对照品储备液。精密量取上述对照品储备液 3ml，置于 25ml 量瓶中（平行配制两份），分别用甲醇稀释至刻度线，摇匀，即得对照品溶液（每 1ml 溶液中含橙皮苷约 15g)，备用。（4）流动相的制备 取甲醇 1000m

7、l，0.5%冰醋酸溶液 1000ml，分别抽滤，分别取续滤液，即得。（0.5%冰醋酸溶液：取 5ml 冰醋酸加水稀释至 1000ml，即得）（5）色谱条件 色谱柱：C18柱（长 150mm，内径 4.6mm，填料粒径 5m），色谱柱编号为 Hplc-Z1904001；流动相：甲醇0.5%冰醋酸溶液（40：60）（可根据分离程度调整甲醇比例）；流速：1.0ml/min；检测波长：283nm；柱温：35；进样量：20l。（6）仪器操作步骤 准备开机（流动相使用前必须过 0.45m 的滤膜过滤）；把流动相放入溶剂瓶中（A瓶为水相，B 瓶为有机相）；待仪器自我检测完毕后，设置相关参数（检测波长、流动相

8、比例、流速、柱温、进样量）；洗针（如果供试品是水溶性的，可以用纯化水作为洗针剂，如果样品极性较小，可以用甲醇作为洗针剂，可根据实验要求，自行选择或调整水和有机溶剂的比例）；初始流动相平衡色谱柱约 30min 左右，监视基线，待压力线和信号线平整，准备实验；将制备好的阴性样品溶液、对照品溶液和供试品溶液分别放置于样品架，新建分析序列，编辑样品信息并复核；所有样品分析完后，关闭检测器，取出进样小瓶，用干净抹布擦拭仪器、在线过滤器及泵头（包括单向阀）外表面，清理实验台。外标法计算橙皮苷的含量公式如下：注：对照品溶液浓度单位为 mg/ml；V 是指溶液的初配体积，为 20ml；稀释倍数 D 为2。（7

9、）专属性考察 分别精密移取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液适量，按照上述色谱条件的方法进行测定，阴性样品溶液色谱图中应无橙皮苷的色谱峰，且附近无干扰。供试品溶液及对照品溶液的色谱图中，橙皮苷的色谱峰与相邻色谱峰的分离应达到基线分离，样品测定无干扰，橙皮苷的理论塔板数均应该大于 2000。（8）线性关系考察 精密称取橙皮苷对照品储备液各 1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，置于 25ml的量瓶中，加甲醇稀释到刻度线，即得系列浓度的橙皮苷对照品溶液。按照上述色谱条件进样分析，分别记录橙皮苷的色谱峰面积，以橙皮苷的浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得

10、回归方程及相关系数，相关系数应大于 0.999。（9）精密度实验 精密移取“（3）对照品溶液的制备”项下的橙皮苷对照品溶液，按照上述色谱条件进行测定，重复 6 次，分别记录橙皮苷的峰面积。算出平均峰面积及其相对标准偏差（RSD），其应 RSD 值应小于等于 2.0%。（10）加样回收率试验 取重量差异项下的本品，研细，取 9 份，每份约 2g，精密称定，分别精密加入橙皮苷对照品储备液适量，按（1）项下方法制备供试品溶液，按照上述色谱条件进样分析，分别记录橙皮苷的加样回收率，加样回收率应在 95%105%之间，RSD 应不大于 2.0%。（11）重复性试验 取同一批次的供试品细粉六份，每份约 2

11、g，精密称定，按（1）项下供试品溶液的制备方法制备重复性试验用溶液，按上述色谱条件的方法进行测定，橙皮苷的峰面积 RSD均应小于等于 2.0%。（12）稳定性试验 取供试品约 2g，精密称定，按照（1）项下的操作制备稳定性试验用溶液，按照上述色谱条件，分别于室温放置的 0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h 精密移取该供试品溶液 20L 进样，测定结果，橙皮苷峰面积的 RSD 应不大于 2.0%，则表明供试品溶液在室温放置下 12h 内稳定。（13）样品的测定 取三批次的供试品，按（1）项下的操作制备供试品溶液，每批次样品平行制备两份，分别按上述色谱条件测定，计算健胃消食片中橙皮苷的含量

12、结果。四四、预期效果预期效果 按照以上实施方案配制溶液、设定色谱条件、进行系统适用性试验、方法学考察和测定，检测本品测定结果应为每片中含有陈皮以橙皮苷（C28H34O15）计，应不得少于 0.20mg。健胃消食片中的主要成分复杂，高效液相色谱法操作相对简单、分析检测速度快、分析专属性较强、测定结果重现性好，本方案旨在建立健胃消食片中橙皮苷的含量测定方案，为其质量标准的提高提供一定的参考依据。五五、参考资料参考资料 1张志博，斐莹，刘伟，等.健胃消食片中橙皮苷含量测定J.实用中医内科杂志，2011，25(4)：31-32.2叶鹏.HPLC 法测定健胃消食片中橙皮苷的含量测定J.当代医学，2010，16(26)：154-155.3康雪莱，张勇.高效液相色谱法测定健胃消食片的有关物质J.中国疗养医学，2006,15(2):153-154.4国家药典委员会.中华人民共和国药典（第一部）M.北京：中国医药科技出版社，2020.1474.