[续断中总皂苷的含量测定技术]三七皂苷的含量测定.docx

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1、续断中总皂苷的含量测定技术三七皂苷的含量测定 TQ46 A1672-3873（2011）03-0308-01 目的测定全国不同产地续断药材中总皂苷的含量，为全面评价续断药材质量供应依据。 续断 总皂苷 含量测定 续断为川产道地药材之一，来源于川续断科川续断属植物川续断Dipsacus asperoides CYCheng et TMAi的干燥根。具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏的功效，临床上主要用于腰膝酸软，风湿痹痛，跌扑损伤等。据报道续断补肝肾、强筋骨、续折伤的主要活性成分是三萜皂苷类成分，现已分别鉴定出22种三萜皂苷。随着对续断探讨的不断深化，特殊是在软组织损伤、腰膝酸软、腰椎骨质增生等

2、方面的广泛应用，使其需求量大增。为了评价续断质量的优劣，本试验以齐墩果酸为指标，采纳紫外分光光度法测定续断中总皂苷的含量，从而为全面评价续断药材质量供应依据，为合理开发利用续断药材资源供应科学依据。 一、仪器与材料 1 、 仪器UV-1100紫外-可见分光光度仪(上海天美科学仪器有限公司)，KQ-3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），万分之一电子天平(德国赛多利斯BP-121S)，十万分之一电子天平(日本岛津LIBROR AEG-45S)。 2 、样品与试剂续断采自和购自全国9个省、市37个药材样品，均经成都中医药高校鉴定教研室卫莹芳教授鉴定为川续断Dipsacus aspero

3、ides CYCheng et TMAi的干燥根；齐墩果酸比照品(批号：110709-200505，购自中国药品生物制品检定所)；甲醇、乙醇、冰乙酸、高氯酸、香草醛等试剂均为分析纯。 二、 方法与结果 1、 测定方法依据本文以齐墩果酸为比照品测定续断药材中总皂苷的含量,通过总皂苷和齐墩果酸皂苷元与香草醛-高氯酸反应在可见区都能获得稳定的特征汲取峰。 2 、 比照品溶液的配制称取齐墩果酸比照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含0.141 mg的溶液，即得。 3 、 显色方法及测定波长的选择精密吸取齐墩果酸比照品溶液0.5 ml至具塞试管中,水浴挥干溶剂, 以空白试剂为比照，加入新配制的5%香草醛

4、冰醋酸0.2 ml，高氯酸0.8 ml, 密塞摇匀,于60水浴中加热20 min，马上取出，冰水浴冷却后加入冰醋酸5 ml，摇匀。于200800 nm 波长范围内进行扫描,选取最大汲取波长548 nm为测定波长。 4 、 标准曲线的制备分别精密吸取上述比照品溶液0.1，0.2，0.3，0.5，0.7，0.9,1.2 ml至具塞试管中，随行试剂做空白比照，参照“3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，以吸光度(Y)为纵坐标,比照品含量(mg)(X)为横坐标，绘制标准曲线，并计算回来方程得:Y=5.726 2X+0.004 5，r0.999 8。 5 、 样品溶液的制备取

5、续断样品粉末(过3号筛）约1.0 g，精密称定，加入20倍量50%乙醇，超声提取2次，30 min/次，滤过，滤液置50 ml容量瓶中，加入50乙醇至刻度，摇匀，即得。 6 、 精密度试验精密吸取齐墩果酸比照品溶液适量于具塞试管中，平行6份，参照“3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，测量结果分别为0.621，0.626，0.634，0.627，0.625，0.618，平均0.625，RSD为0.88%，表明精密度较好。 7 、 稳定性试验精密吸样品溶液适量于具塞试管中，参照“3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，显色后不同时间测定其吸光度改变，放置5，10，15，

6、30，45，60，90，120，150 min后，分别测定其吸光度，测定结果分别为0.637，0.640，0.636，0.632，0.625，0.622，0.616，0.613，0.604，平均0.625，RSD为1.97%，结果表明此显色反应在5150 min内稳定。 8 、 重复性试验取同一批续断样品6份，每份约1.0 g，精密称定，照样品溶液制备方法制备,精密吸取各样品溶液适量，参照“3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度，测定结果分别为0.601，0.598，0.603，0.607，0.593，0.614，平均0.603，RSD为1.21%。结果表明该方法重复

7、性较好。 9 、 加样回收率试验取已知含量的续断样品5份,每份0.25 g,精密称定,分别加入肯定量的齐墩果酸比照品,照样品溶液制备方法制备,精密吸取各样品溶液适量 , 参照“3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，在548 nm处测定吸光度。加样回收率为100.32 % ,RSD为1.78%。 10 、 样品中总皂苷的含量测定精密吸取各样品溶液适量于具塞磨口试管中, 参照“3”项下自“水浴挥干溶剂”起依法操作，随行试剂做空白,在548 nm处测定样品液的吸光度值，计算不同产地续断样品中总皂苷的含量。 三、探讨 采纳香草醛-高氯酸显色法测定续断中总皂苷的含量，在显色反应过程中吸光度会随水浴温度和

8、加热时间的变更而改变，因此本试验通过考察不同的显色温度（50，55，60，65，70）、显色时间（5，10，15，20，25，30 min），确定水浴温度60，加热显色时间20 min。 总皂苷是续断补肝肾、强筋骨、续折伤的主要活性成分。本文探讨了续断总皂苷的制备方法，对提取方式、提取溶剂、溶剂用量、提取时间、提取次数进行考察，最终确定提取条件为：20倍量的50%乙醇,超声提取2次，60 min/次。方法学探讨结果表明,该含量测定方法精确度高、重复性好(RSD为1.21%) ,加样回收率为100.32%，RSD为1.78%。因此本法可作为续断中总皂苷的含量测定方法。 全国9个省、市37个产地样

9、品中续断总皂苷含量在2.20%19.91%，湖北鹤峰野生续断的总皂苷类有效成分均高于其他地区，达19.91%，购于成都荷花池药市的含量最低，只有2.20%，建议续断药材总皂苷含量不得低于8.4%。 不同加工方法的续断以不发汗的总皂苷含量最高。不同采收期的以秋季霜降时续断倒苗后采收其总皂苷含量为高，续断是否须要发汗处理值得进一步探讨。 参考文献： 1、晏媛，郑萍续断的药理学探讨进展J中医药探讨，2002，18（5）：53 2、国家药典委员会中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2005：231. 作者单位：哈药集团医药有限公司药品分公司 哈尔滨市 150008 注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文