细胞电融合.ppt

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1、细胞电融合细胞电融合细胞电融合细胞电融合目的要求目的要求 使学生在了解电融合原理的基使学生在了解电融合原理的基础上，学会掌握各种细胞悬液的础上，学会掌握各种细胞悬液的制备及电融合过程的操作方法。制备及电融合过程的操作方法。实验原理实验原理游离的动物细胞或原生质体，置于电融合室中，游离的动物细胞或原生质体，置于电融合室中，在高频交流电场的作用下，细胞被极化，成为在高频交流电场的作用下，细胞被极化，成为偶极子，造成细胞之间相互连接，如果施加的偶极子，造成细胞之间相互连接，如果施加的高频交流电压（既正弦波的高频交流电压（既正弦波的P-PP-P值）过高或作用值）过高或作用时间过长，则细胞连接成串珠状，

2、应适当控制时间过长，则细胞连接成串珠状，应适当控制以上条件，尽量是两细胞处于点接触状态；然以上条件，尽量是两细胞处于点接触状态；然后施加方波脉冲予以刺激，由于电脉冲的瞬间后施加方波脉冲予以刺激，由于电脉冲的瞬间作用，可击破两细胞接触点部位的质膜，此时作用，可击破两细胞接触点部位的质膜，此时质膜脂类分子发生重组，同时由于细胞表面的质膜脂类分子发生重组，同时由于细胞表面的张力作用，使两细胞融合逐步完成。张力作用，使两细胞融合逐步完成。实验用品实验用品l 器材：器材：JCF-1JCF-1型细胞电融合仪、细型细胞电融合仪、细胞融合池、普通离心机、倒置显微胞融合池、普通离心机、倒置显微镜（或研究用显微镜

3、）刻度离心管、镜（或研究用显微镜）刻度离心管、刻度吸管、小烧杯（刻度吸管、小烧杯（1010mlml）等。等。l 试剂：试剂：甘露醇、蔗糖、氯化钠甘露醇、蔗糖、氯化钠等。等。材料：鸡血。材料：鸡血。实验方法实验方法一、一、动物细胞的制备动物细胞的制备 用灭菌的注射器先吸入用灭菌的注射器先吸入AlsverAlsver液液(葡萄糖葡萄糖2.052.05g g，枸橼酸钠枸橼酸钠0.80.8g g，NaClNaCl 0.42g 0.42g，加加重蒸水重蒸水100100ml)1mlml)1ml，再从鸡的翼下静脉取再从鸡的翼下静脉取血血0.50.51 1mlml，取出后放入刻度离心管中，取出后放入刻度离心管

4、中，再加入再加入2323mlml Alsver Alsver液，使总量为液，使总量为4545mlml，混匀并封口，置于混匀并封口，置于44冰箱内可冰箱内可供一周内使用。供一周内使用。实验方法实验方法二、细胞电融合二、细胞电融合(1)(1)连接电源线插头至电源线插座。连接电源线插头至电源线插座。(2)(2)插入融合小室电极至电源线插座，将含有一定密度的动物细插入融合小室电极至电源线插座，将含有一定密度的动物细胞融合液加入融合小室内，将融合小室板放置倒置显微镜下，调胞融合液加入融合小室内，将融合小室板放置倒置显微镜下，调正光距至细胞清晰。正光距至细胞清晰。(3)(3)按下电源开关。按下电源开关。(

5、4)(4)用粗、中、细调调节成串脉冲所需频率用粗、中、细调调节成串脉冲所需频率300400300400KHzKHz，然后然后调节所需成串脉冲电压调节所需成串脉冲电压30403040V V。(5)(5)调节融合脉冲脉宽，调节融合脉冲所需个数，选择好闸门时调节融合脉冲脉宽，调节融合脉冲所需个数，选择好闸门时间间(一般为一般为“中中”)”)(6)(6)调节融合脉冲电压至调节融合脉冲电压至120300120300V V。(7)(7)同时按下成串脉冲及融合脉冲开关，此时在倒置显微镜中可同时按下成串脉冲及融合脉冲开关，此时在倒置显微镜中可观察到细胞移动并排列成串状。观察到细胞移动并排列成串状。按下脉冲触发开关，可观察到细胞被电脉冲击穿，并与相邻的细按下脉冲触发开关，可观察到细胞被电脉冲击穿，并与相邻的细胞发生融合。此时实验完成。取下融合小室，关闭电源。胞发生融合。此时实验完成。取下融合小室，关闭电源。观观 察察思考题思考题1 1、说明细胞电融合的原理。、说明细胞电融合的原理。2 2、细胞电融合是应注意什么？、细胞电融合是应注意什么？