梅毒螺旋体特异性抗体检测作业指导书.doc

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1、梅毒螺旋体特异性抗体检测作业指导书1. 实验原理梅毒的病原是苍白螺旋体（TP），感染后患者血清学反应较复杂，可产生2种抗体，一种是非梅毒螺旋体抗体；另一种是TP特异性抗体。前者在疾病活动期可检出，但治疗后很快下降，一般用RPR等检测。后者在治疗后相当长时间内都可检测到。Syphagen-TPHA是一种检测TP抗体的特异、灵敏的间接血球凝集试验。适用于梅毒确诊检查。2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：空腹采血2.2 标本种类：血清或EDTA抗凝血浆 2.3 标本要求：检测标本可以是血清，对于大范围筛选实验，也可用含EDTA的血浆。如果出现可疑结果，用血清标本来确证。用含抗凝剂（EDTA）的

2、试管收集血液，离心收集血浆，在24小时内检测。3. 标本储存：血清于2-8可存放48小时，在-20可存放4周；血浆则用含抗凝剂（EDTA）的试管收集血液，离心收集血浆，在24小时内检测。 4. 标本运输：室温运输。5. 标本拒收标准：溶血、脂血或污染标本。6. 试剂6.1 试剂名称：Syphagen-TPHA试剂6.2 试剂生产厂家：西班牙BIOKIT公司6.3 包装规格：200人份 6.4 试剂盒组成：6.4.1 实验细胞：Antigen Reagent 15ml6.4.2 对照细胞:Control Reagent 15ml6.4.3 稀释液：Dilution Solution 50ml6.

3、4.4 阳性对照:Positive Control 2.5ml6.4.5 阴性对照:Negative Control 2.5ml用前将试剂回复至室温，致敏及对照红细胞在用前彻底悬浮。6.5 试剂储存条件及有效期存放于2-8，不同批号的试剂不得混用。7. 操作步骤7.1 定性检测7.1.1 每人份需4个孔，其中2个用于样品稀释。在第1个孔中加25ul（1滴）稀释液，在第2孔中100ul（4滴）稀释液，在第3、4孔中加25ul（1滴）稀释液。7.1.2 在第1孔中加25ul标本。7.1.3 按以下步骤稀释标本：在第1孔加入25ul标本后，混匀后取25ul加入第2孔，混匀后取25ul加入第3孔，混匀

4、后取25ul丢弃。7.1.4 在第4孔加25ul（1滴）试验细胞；在第3孔加25ul对照细胞。7.1.5 轻轻摇晃混匀后，加盖静置，室温60分钟后观察结果。7.1.6 对照的使用：试剂盒所配阴、阳对照已经按1：20稀释，使用时在第3、4孔直接加入25ul即可，不用加稀释液。7.2 定量检测7.2.1 以定性稀释标本的第2孔为原标本（每人份需8个孔），在第1-8孔中加25ul稀释液。7.2.2 自定性稀释标本第2孔中取25ul加入第1孔，混匀后取25ul加入第2孔，倍比稀释至第8孔，最后从第8孔中取25ul丢弃。7.2.3 每孔中加入25ul致敏红细胞。7.2.4 轻轻摇匀，加盖于室温静置60分

5、钟。7.2.5 观察结果。7.2.6 对照的使用：本试剂盒所配阴、阳对照已经1：20稀释，所以最终稀释度是1：80。直接在第1孔中加50ul，混匀后取25ul加入第2孔混匀。8. 结果判断与分析通过与阴阳血清比较，判读结果。根据凝集情况，记录为4+，3+，2+，1+，或。最终结果，应根据病人的临床症状判定。8.1 4+：完全覆盖底部8.2 3+：部分覆盖底部8.3 2+：外部有一红圈8.4 1+：外部有一颜色更深的红圈8.5 ：中部有一较大的孔8.6 ：中部有一较小的孔阳性：4+1+ 临界： 阴性：-8.7 定量检测：效价近似等于发生凝集的最高稀释度。9. 临床意义：如结果为阳性，说明有梅毒抗

6、体，曾经受到梅毒的感染；如果结果为阴性说明不含梅毒抗体；如果出现临界结果，说明梅毒抗体水平低，处于梅毒早期阶段，或者是预后残留有抗体，并应进一步检查。10. 操作性能：快速简便、特异性强、灵敏度高11. 方法局限性：严重溶血或脂血标本会影响结果判断12. 参考文献：中国人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）.1997,43213. 其它：如没有进行定性检测试验，在进行定量试验时，需要按定性试验步骤所示在第1-4孔对标本进行稀释。在第5-11孔中加入25ul稀释液；混匀后从第4孔取25ul加入第5孔，依次进行倍比稀释直到第11孔，最后自第11孔中取25ul丢弃。在第3孔加非致敏红细胞25ul，在第4-11孔加致敏红细胞25ul。以下步骤按定量实验进行.