温州医学院 临床免疫学检验系列 (7).ppt

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1、实验二沉淀反应、凝集反应,概述,沉淀反应和凝集反应是两类经典的免疫学反应沉淀反应（precipitation）：是指可溶性抗原与相应抗体在电解质存在的条件下发生特异性结合，在两者比例合适时形成肉眼可见的沉淀现象。凝集反应（agglutination）：是指颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合后，在电解质参与下出现肉眼可见的凝集现象。,液体,半固体,环状沉淀反应絮状沉淀反应免疫比浊法,单向琼脂扩散双向琼脂扩散免疫电泳火箭电泳对流免疫电泳免疫固定电泳,介质,直接凝集反应,间接凝集反应,玻片法试管法,正向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集抑制试验,凝集反应,实验目的,本次实验以双向免疫扩散试验和直接

2、凝集试验（试管法）为例，来验证沉淀反应和凝集反应这两类经典免疫学试验的基本原理，通过实验熟悉其操作过程及临床应用。,一、双向免疫扩散试验,实验原理,指可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂介质中相互扩散，彼此相遇后发生特异性结合，在比例适当处形成肉眼可见的沉淀线。根据沉淀线的有无、形状和位置对抗原或抗体进行定性分析，也可用于抗体的半定量检测,两孔模式,三孔模式,梅花孔模式,试剂：IgG（抗原）、巴比妥缓冲液、1.5琼脂（巴比妥缓冲液配制）器材：载玻片、移液管、打孔器、微量进样器、湿盒、恒温水浴箱标本：待测血清,实验材料,制板用移液管吸取44.5ml左右溶化的琼脂，将其加到水平放置的载玻片上，待冷凝。

3、打孔打梅花孔，孔间距为0.70.8cm。,实验步骤,1,倍比稀释待测血清（方法见下表）加样用微量进样器在各孔加样品10l，其中中央孔加IgG抗原，周围6孔分别加不同稀释度的待测血清将载玻片放入37湿盒中，1824h后观察结果,操作示意图,1,2,3,4,5,6,抗原和抗体孔之间出现肉眼可见的白色沉淀线。将出现白色沉淀线的最高血清稀释度作为待测血清的IgG抗体效价。,实验结果,载玻片要清洁，边缘无破损。浇制琼脂板时要均匀、无气泡。加样孔要打得圆整光滑，边缘不能破裂。加样时应尽量避免气泡或加到孔外，以保证结果的准确性。微量进样器每加一个样品之后需清洗。,注意事项,二、直接凝集试验（试管法）,实验原

4、理,在一定电解质条件下，将已知的颗粒性抗原定量地与一系列倍比稀释的待测血清等量混合，静置一定时间后，根据各管的凝集程度，判断待测血清的抗体效价。此方法常用于抗体的半定量检测。,实验材料,试剂：1SRBC、生理盐水、器材：加样枪、加样头、试管、恒温水浴箱标本：待测血清,实验步骤,血清放于65水浴箱5min以灭活补体。取试管9只，排列于试管架上，依次编号。按表格稀释血清和加样（l）。,各管摇匀，置3710min后离心500rpm23min，观察结果。,实验结果,先看9号对照管，轻摇动，应为不凝集，红细胞均匀的分散在液体中。再看18号实验管，轻摇动，在稍微静置一会儿。+液体澄清，全部的絮状碎片沉于管底+液体轻度混浊，绝大多数絮状碎片沉于管底+液体半混浊，约半数絮状碎片沉于管底+液体混浊，仅少数细小的絮状碎片沉于管底-表现与对照管相同结果判断：能产生明显凝集现象(+）的最高血清稀释度为待测血清的抗体（溶血素）效价。,注意事项,待测血清检测前需进行补体灭活加样时应将样品全部加到试管底部SRBC在使用前需混匀观察结果时应先看对照管，为不凝集,