实验课件实验.ppt

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1、动物生理学实验课的要求动物生理学实验课的要求遵守学习纪律，准时上、下课。遵守学习纪律，准时上、下课。人员及分组，组长负责制人员及分组，组长负责制.必须严肃认真地进行实验操作、观察实验结果。必须严肃认真地进行实验操作、观察实验结果。各组的仪器和用品，由本组使用，不得与别组调换，以免各组的仪器和用品，由本组使用，不得与别组调换，以免混乱。混乱。爱护公共财物，注意节约各种实验用品。爱护公共财物，注意节约各种实验用品。实验结果存在固定的盘上，每组上课时记住带一张盘，实实验结果存在固定的盘上，每组上课时记住带一张盘，实验结束后立即将结果拷出。切勿在电脑上设置密码，带的验结束后立即将结果拷出。切勿在电脑上

2、设置密码，带的盘要干净，免得电脑被感染病毒。盘要干净，免得电脑被感染病毒。保持实验室清洁整齐，随时清除污物。保持实验室清洁整齐，随时清除污物。实验前必须仔细预习实验指导，了解实验的目的要求、基实验前必须仔细预习实验指导，了解实验的目的要求、基本原理以及简要的操作步骤。本原理以及简要的操作步骤。实验报告实验报告动物生理学实验动物生理学实验基本操作技术基本操作技术一、常用手术器械一、常用手术器械1.蛙类实验手术器械：2.哺乳动物手术器械：止血钳止血钳手术刀手术刀手术剪和手术镊手术剪和手术镊二、手术器械的消毒方法煮沸消毒法：水沸煮沸消毒法：水沸35min后，将器械放入消毒锅内，后，将器械放入消毒锅内

3、，等第二次水沸后等第二次水沸后15min。高压蒸汽灭菌法：高压灭菌锅，蒸汽压高压蒸汽灭菌法：高压灭菌锅，蒸汽压1520lb/in2，温度，温度121.6126.6 C，30min左右。不宜于橡胶制左右。不宜于橡胶制品和锐利器械的灭菌。品和锐利器械的灭菌。化学药品消毒法：常用消毒剂有：化学药品消毒法：常用消毒剂有：LJ-强化戊二醛、强化戊二醛、70%乙醇（不适于金属器械的消毒）、乙醇（不适于金属器械的消毒）、0.1%新洁尔新洁尔灭、酶皂溶液、甲醛溶液等，金属器械应浸泡灭、酶皂溶液、甲醛溶液等，金属器械应浸泡30min以上。以上。（见下表）（见下表）烧灼灭菌法，适用于金属器械烧灼灭菌法，适用于金属

4、器械三、常用实验动物青蛙和蟾蜍青蛙和蟾蜍家兔家兔大白鼠和小白鼠大白鼠和小白鼠鱼类鱼类鸟类等鸟类等实验动物的抓取固定方法蟾蜍蟾蜍蛙类抓取方法宜用左手将蛙类抓取方法宜用左手将动物背部贴紧手掌固定，动物背部贴紧手掌固定，以中指、无名指、小指压以中指、无名指、小指压住其左腹侧和后肢，拇指住其左腹侧和后肢，拇指和食指分别压住左、右前和食指分别压住左、右前肢、右手进行操作。肢、右手进行操作。在抓取是蟾蜍时，注意勿在抓取是蟾蜍时，注意勿挤压其两则耳部突起之毒挤压其两则耳部突起之毒腺，以免毒液射进眼中。腺，以免毒液射进眼中。实验如需长时间观察，可实验如需长时间观察，可破坏其脑脊髓（观察神经破坏其脑脊髓（观察神

5、经系统反应时不应破坏脑脊系统反应时不应破坏脑脊髓）或麻醉后用大头针固髓）或麻醉后用大头针固定在蛙板上。依实验需要定在蛙板上。依实验需要采取俯卧位或仰卧位固定。采取俯卧位或仰卧位固定。家兔家兔抓取：实验家兔多数抓取：实验家兔多数饲养在笼内，所以抓饲养在笼内，所以抓取较为方便，一般以取较为方便，一般以右手抓住兔颈部的毛右手抓住兔颈部的毛皮提起，然后左手托皮提起，然后左手托其臀部或腹部，让其其臀部或腹部，让其体重重量的大部分集体重重量的大部分集中在左手上，这样就中在左手上，这样就避免了抓取过程中的避免了抓取过程中的动物损伤。不能采用动物损伤。不能采用抓双耳或抓提腹部。抓双耳或抓提腹部。1、2、3均为

6、不正确的抓取方均为不正确的抓取方法（法（1可损伤两肾，可损伤两肾，2可造可造成皮下出血，成皮下出血，3可伤两耳），可伤两耳），4、5为正确的抓取方法。颈后为正确的抓取方法。颈后部的皮厚可以抓，并用手托兔部的皮厚可以抓，并用手托兔体。体。台式固定：做血压测量、呼吸等实验和手术时，则需将兔台式固定：做血压测量、呼吸等实验和手术时，则需将兔固定在兔台上（图固定在兔台上（图11-7），四肢用粗棉绳活结绑住，拉直），四肢用粗棉绳活结绑住，拉直四肢，将绳绑在兔台四周的固定木块上，头以固定夹固定四肢，将绳绑在兔台四周的固定木块上，头以固定夹固定或用一根粗棉绳挑过兔门齿绑在兔台铁柱上。或用一根粗棉绳挑过兔门齿

7、绑在兔台铁柱上。几种常用生理盐溶液的配制 生理性溶液为代体液，用于维持离体的组织、器官及细胞的正常生命生理性溶液为代体液，用于维持离体的组织、器官及细胞的正常生命活动。它必须具备下列条件：活动。它必须具备下列条件：渗透压与组织也相等；渗透压与组织也相等；应含有组织、应含有组织、器官维持正常机能所必需的比例适宜的各种盐类离子；器官维持正常机能所必需的比例适宜的各种盐类离子；酸碱度应与酸碱度应与血浆相同，并具有充分的缓冲能力；血浆相同，并具有充分的缓冲能力；应含有氧气和营养物质。应含有氧气和营养物质。动物实验中常用的生理盐溶液有生理盐水、任氏（动物实验中常用的生理盐溶液有生理盐水、任氏（Ringe

8、r）溶液、乐）溶液、乐氏（氏（Locke）溶液和台氏（）溶液和台氏（Tyrode）溶液四种，其成分各异，如下表所）溶液四种，其成分各异，如下表所示。示。各种生理盐溶液的用途：生理盐水：即与血清等渗之生理盐水：即与血清等渗之NaCl溶液，在冷血溶液，在冷血动物应用动物应用0.6%-0.65%，在温血动物应用，在温血动物应用0.85%-0.9%。任氏溶液：用于青蛙及其他冷血动物。任氏溶液：用于青蛙及其他冷血动物。乐氏溶液：用于温血动物之心脏、子宫及其它乐氏溶液：用于温血动物之心脏、子宫及其它离体脏器。用作灌注液者须于用前通入氧气泡离体脏器。用作灌注液者须于用前通入氧气泡15分钟。低钙乐氏液（含无水

9、氯化钙分钟。低钙乐氏液（含无水氯化钙0.05g）用于离体小肠及豚鼠的离体支气管灌注。用于离体小肠及豚鼠的离体支气管灌注。台氏溶液：用于温血动物之离体小肠。台氏溶液：用于温血动物之离体小肠。动物的麻醉在急、慢性动物实验中，手术前均应将动物麻醉，以减轻在急、慢性动物实验中，手术前均应将动物麻醉，以减轻或消除动物的痛苦，保持安静状态或消除动物的痛苦，保持安静状态,从而保证实验顺利进从而保证实验顺利进行。由于麻醉药品的作用特点不同，动物的药物耐受性行。由于麻醉药品的作用特点不同，动物的药物耐受性有种属或个体间差异及实验内容及要求不同，因此正确有种属或个体间差异及实验内容及要求不同，因此正确选择麻醉药品

10、的种类、用药剂量及给药途径十分重要。选择麻醉药品的种类、用药剂量及给药途径十分重要。理想的麻醉药品应当是对动物麻醉完善，其毒性和对生理想的麻醉药品应当是对动物麻醉完善，其毒性和对生理功能干扰最小，使用方便。理功能干扰最小，使用方便。1常用麻醉剂的种类和用法常用麻醉剂的种类和用法局部麻醉剂：局部麻醉剂：0.5%-1.0%盐酸普鲁卡因或盐酸普鲁卡因或2%盐酸可卡因盐酸可卡因用作皮肤或黏膜表面麻醉。用作皮肤或黏膜表面麻醉。全身麻醉剂：发挥性的乙醚，非挥发性的巴比妥类、氨全身麻醉剂：发挥性的乙醚，非挥发性的巴比妥类、氨基甲酸乙酯等，在生理学实验中，多采用全身麻醉剂。基甲酸乙酯等，在生理学实验中，多采用

11、全身麻醉剂。2.麻醉前的准备工作麻醉前的准备工作熟悉麻醉药品的特点熟悉麻醉药品的特点 根据实验内容合根据实验内容合理选用麻醉药。理选用麻醉药。麻醉前应核对药物名称；检查药品有无变质或麻醉前应核对药物名称；检查药品有无变质或过期失效。过期失效。狗、猫等手术前应禁食狗、猫等手术前应禁食12小时，以减轻呕吐反小时，以减轻呕吐反应。应。需在全麻下进行手术的慢性实验动物，可适当需在全麻下进行手术的慢性实验动物，可适当给予麻醉辅助药。例如，皮下注射吗啡镇静止给予麻醉辅助药。例如，皮下注射吗啡镇静止痛，注射阿托品减少呼吸道分泌物的产生等。痛，注射阿托品减少呼吸道分泌物的产生等。3.给药方法1）全身性麻醉：）

12、全身性麻醉：吸入麻醉：乙醚吸入麻醉：乙醚注射麻醉：常用乌拉坦、戊巴比妥钠及氯醛糖等。主要给药途注射麻醉：常用乌拉坦、戊巴比妥钠及氯醛糖等。主要给药途径有：静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、皮下淋巴径有：静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、皮下淋巴囊注射等囊注射等2）局部麻醉：）局部麻醉：表面麻醉：表面麻醉：药物通过点眼、喷雾或涂布作用于粘膜表面，转而药物通过点眼、喷雾或涂布作用于粘膜表面，转而透过粘膜接触粘膜下神经末梢而发挥作用。该药物除具有麻醉透过粘膜接触粘膜下神经末梢而发挥作用。该药物除具有麻醉作用外，还有较强的穿透力，如的卡因、利多卡因；作用外，还有较强的穿透力，如的卡因、利多

13、卡因；浸润麻醉：浸润麻醉：用注射的方法将药物送到神经纤维旁。此类药物只用注射的方法将药物送到神经纤维旁。此类药物只需有局部麻醉作用，不一定要求有强大的穿透力，如普鲁卡因需有局部麻醉作用，不一定要求有强大的穿透力，如普鲁卡因(对氨苯甲酸酯对氨苯甲酸酯)、可卡因、利多卡因（其效力是普鲁卡因的、可卡因、利多卡因（其效力是普鲁卡因的2倍）倍）。用作局部麻醉的药物的浓度一般为。用作局部麻醉的药物的浓度一般为1%2%，通常用，通常用0.5%1%.4.麻醉效果的观察呼吸：深慢而平稳呼吸：深慢而平稳角膜反射：明显迟钝角膜反射：明显迟钝肌张力：全身肌肉松弛肌张力：全身肌肉松弛皮肤夹捏反射消失。皮肤夹捏反射消失。

14、5.兔耳缘静脉注射时的注意事项麻醉前应正确选用麻醉药品、用药剂量及给药麻醉前应正确选用麻醉药品、用药剂量及给药途径；途径；进行静脉麻醉时，先将总用药量的三分之一快进行静脉麻醉时，先将总用药量的三分之一快速注入，使动物迅速渡过兴奋期，余下的三分速注入，使动物迅速渡过兴奋期，余下的三分之二量则应缓慢注射，并密切观察动物麻醉状之二量则应缓慢注射，并密切观察动物麻醉状态及反应，以便准确判断麻醉深度；态及反应，以便准确判断麻醉深度；如麻醉较浅，动物出现挣扎或呼吸急促等，需如麻醉较浅，动物出现挣扎或呼吸急促等，需补充麻醉药以维持适当的麻醉。一次补充药量补充麻醉药以维持适当的麻醉。一次补充药量不宜超过原总用

15、药量的五分之一；不宜超过原总用药量的五分之一；麻醉过程中，应随时保持呼吸道通畅，并注意麻醉过程中，应随时保持呼吸道通畅，并注意保温；保温；手术中，若遇到出血，常用的止血方法有手术中，若遇到出血，常用的止血方法有:钳夹止血法，压迫止血法，结扎止血法，钳夹止血法，压迫止血法，结扎止血法，烧烙止血法烧烙止血法兔的采（取）血方法有耳中央动脉取血，兔的采（取）血方法有耳中央动脉取血，股动脉取血，耳缘静脉取血，心脏穿刺取股动脉取血，耳缘静脉取血，心脏穿刺取血血。实验一实验一 生理机能系统的使用生理机能系统的使用血型测定血型测定一、生理机能系统的使用开机顺序：贵重仪器先关后开开机顺序：贵重仪器先关后开熟悉系

16、统操作熟悉系统操作仪器使用仪器使用二、血型测定实验原理：实验原理：一、血型一、血型 血型血型：指的是：指的是红细胞膜红细胞膜上特异性抗原的类型。上特异性抗原的类型。所以，所谓的血型，主要指所以，所谓的血型，主要指红细胞血型红细胞血型。红细胞凝集红细胞凝集：红细胞凝集反应是一种抗原：红细胞凝集反应是一种抗原抗体反应，它是免疫反抗体反应，它是免疫反应的一种形式。应的一种形式。凝集原（凝集原（agglutinogen）：红细胞膜上存在着特异的抗原）：红细胞膜上存在着特异的抗原凝集素（凝集素（agglutinogen）：血液中与红细胞膜上的凝集原起反应的特）：血液中与红细胞膜上的凝集原起反应的特异抗体

17、异抗体血型的分类血型的分类:目前已知人类的目前已知人类的RBC除除ABO血型血型系统外系统外,还有还有Rh、P等等23个血型系统。个血型系统。ABO血型是根据红细胞表面存在血型是根据红细胞表面存在的凝集原（的凝集原（A或或B）决定的，分为）决定的，分为A、B、AB、O四型。四型。1.1.输血型相合的血液输血型相合的血液,最好成分输血最好成分输血;2.2.输血前必须进行血型输血前必须进行血型交叉配血试验交叉配血试验二、输血的原则二、输血的原则给给血血者者受受血血者者红细胞红细胞血清血清红细胞红细胞血清血清主侧次侧*两侧均不凝两侧均不凝:配血配血相合相合,可以输血可以输血;*主侧凝集主侧凝集,配血

18、不配血不合合,绝对不能输！绝对不能输！*主侧不凝次侧凝集主侧不凝次侧凝集,配血基本相合，紧配血基本相合，紧急时考虑少量输。急时考虑少量输。总结：输血的原则总结：输血的原则1 1、准备输血时，首先必须鉴定血型、准备输血时，首先必须鉴定血型2 2、保证供血者与受血者、保证供血者与受血者ABOABO血型相合，且必须进行交血型相合，且必须进行交叉配血试验叉配血试验 配血相合：可进行输血配血相合：可进行输血 配血不合：不可输血配血不合：不可输血 基本相合：原则同基本相合：原则同O O型血输给其他血型者或型血输给其他血型者或ABAB型血型血接受其他型血接受其他型血3 3、紧急情况无同型血：少量、缓慢、紧密

19、观察。、紧急情况无同型血：少量、缓慢、紧密观察。实验方法取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明净，在玻片两端用腊笔标明A及及B，并分别，并分别各滴入各滴入A及及B标准血清一滴。标准血清一滴。取血：采左手无名指血。取血：采左手无名指血。70%酒精消毒酒精消毒风风干干用一次性针头扎手指用一次性针头扎手指滴血（血量：滴血（血量：血清约为血清约为1:1用牙签迅速混匀（切勿将两用牙签迅速混匀（切勿将两种血清混到一起）种血清混到一起）观察结果。观察结果。ABO血血型型的的鉴鉴定定实验结果的观察实验结果的观察实验报告：主要写结果及其分析，实验中遇到的问题及解决方法，思考题。预习下次实验：血细胞计数血细胞计数思考题在无标准A及B血清的情况下，已知某人为A型血，能否用他的血将其他人的血型检查出来？在ABO血型中，同型血互输也要做交叉配血试验吗？为什么？