《实验实验》PPT课件.ppt

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1、动物生理学物生理学实验课的要求的要求遵守学遵守学习纪律，准律，准时上、下上、下课。人人员及分及分组，组长负责制制.必必须严肃认真地真地进行行实验操作、操作、观察察实验结果。果。各各组的的仪器和用品，由本器和用品，由本组使用，不得与使用，不得与别组调换，以免，以免混乱。混乱。爱护公共公共财物，注意物，注意节约各种各种实验用品。用品。实验结果存在固定的果存在固定的盘上，每上，每组上上课时记住住带一一张盘，实验结束后立即将束后立即将结果拷出。切勿在果拷出。切勿在电脑上上设置密置密码，带的的盘要干要干净，免得，免得电脑被感染病毒。被感染病毒。保持保持实验室清室清洁整整齐，随，随时清除清除污物。物。实验

2、前必前必须仔仔细预习实验指指导，了解，了解实验的目的要求、基的目的要求、基本原理以及本原理以及简要的操作步要的操作步骤。实验报告告动物生理学物生理学实验基本操作技基本操作技术一、常用手术器械一、常用手术器械1.蛙类实验手术器械：2.哺乳动物手术器械：止血钳止血钳手术刀手术刀手术剪和手术镊手术剪和手术镊二、手术器械的消毒方法煮沸消毒法：水沸煮沸消毒法：水沸35min后，将器械放入消毒后，将器械放入消毒锅内，内，等第二次水沸后等第二次水沸后15min。高高压蒸汽蒸汽灭菌法：高菌法：高压灭菌菌锅，蒸汽，蒸汽压1520lb/in2，温度，温度121.6126.6 C，30min左右。不宜于橡胶制左右。

3、不宜于橡胶制品和品和锐利器械的利器械的灭菌。菌。化学化学药品消毒法：常用消毒品消毒法：常用消毒剂有：有：LJ-强化戊二化戊二醛、70%乙醇（不适于金属器械的消毒）、乙醇（不适于金属器械的消毒）、0.1%新新洁尔灭、酶皂溶液、甲皂溶液、甲醛溶液等，金属器械溶液等，金属器械应浸泡浸泡30min以上。以上。（见下表）下表）烧灼灼灭菌法，适用于金属器械菌法，适用于金属器械三、常用实验动物青蛙和蟾蜍青蛙和蟾蜍家兔家兔大白鼠和小白鼠大白鼠和小白鼠鱼类鸟类等等实验动物的抓取固定方法蟾蜍蟾蜍蛙蛙类抓取方法宜用左手将抓取方法宜用左手将动物背部物背部贴紧手掌固定，手掌固定，以中指、无名指、小指以中指、无名指、小指

4、压住其左腹住其左腹侧和后肢，拇指和后肢，拇指和食指分和食指分别压住左、右前住左、右前肢、右手肢、右手进行操作。行操作。在抓取是蟾蜍在抓取是蟾蜍时，注意勿，注意勿挤压其两其两则耳部突起之毒耳部突起之毒腺，以免毒液射腺，以免毒液射进眼中。眼中。实验如需如需长时间观察，可察，可破坏其破坏其脑脊髓（脊髓（观察神察神经系系统反反应时不不应破坏破坏脑脊脊髓）或麻醉后用大髓）或麻醉后用大头针固固定在蛙板上。依定在蛙板上。依实验需要需要采取俯卧位或仰卧位固定。采取俯卧位或仰卧位固定。家兔家兔抓取：抓取：实验家兔多数家兔多数饲养在养在笼内，所以抓内，所以抓取取较为方便，一般以方便，一般以右手抓住兔右手抓住兔颈部

5、的毛部的毛皮提起，然后左手托皮提起，然后左手托其臀部或腹部，其臀部或腹部，让其其体重重量的大部分集体重重量的大部分集中在左手上，中在左手上，这样就就避免了抓取避免了抓取过程中的程中的动物物损伤。不能采用。不能采用抓双耳或抓提腹部。抓双耳或抓提腹部。1、2、3均为不正确的抓取方均为不正确的抓取方法（法（1可损伤两肾，可损伤两肾，2可造可造成皮下出血，成皮下出血，3可伤两耳），可伤两耳），4、5为正确的抓取方法。颈后为正确的抓取方法。颈后部的皮厚可以抓，并用手托兔部的皮厚可以抓，并用手托兔体。体。台式固定：做血台式固定：做血压测量、呼吸等量、呼吸等实验和手和手术时，则需将兔需将兔固定在兔台上（固定

6、在兔台上（图11-7），四肢用粗棉），四肢用粗棉绳活活结绑住，拉直住，拉直四肢，将四肢，将绳绑在兔台四周的固定木在兔台四周的固定木块上，上，头以固定以固定夹固定固定或用一根粗棉或用一根粗棉绳挑挑过兔兔门齿绑在兔台在兔台铁柱上。柱上。几种常用生理盐溶液的配制生理性溶液生理性溶液为代体液，用于代体液，用于维持离体的持离体的组织、器官及、器官及细胞的正常生命胞的正常生命活活动。它必。它必须具具备下列条件：下列条件：渗透渗透压与与组织也相等；也相等；应含有含有组织、器官器官维持正常机能所必需的比例适宜的各种持正常机能所必需的比例适宜的各种盐类离子；离子；酸碱度酸碱度应与与血血浆相同，并具有充分的相同，

7、并具有充分的缓冲能力；冲能力；应含有氧气和含有氧气和营养物养物质。动物物实验中常用的生理中常用的生理盐溶液有生理溶液有生理盐水、任氏（水、任氏（Ringer）溶液、）溶液、乐氏（氏（Locke）溶液和台氏（）溶液和台氏（Tyrode）溶液四种，其成分各异，如下表所）溶液四种，其成分各异，如下表所示。示。各种生理盐溶液的用途：生理生理盐水：即与血清等渗之水：即与血清等渗之NaCl溶液，在冷血溶液，在冷血动物物应用用0.6%-0.65%，在温血，在温血动物物应用用0.85%-0.9%。任氏溶液：用于青蛙及其他冷血任氏溶液：用于青蛙及其他冷血动物。物。乐氏溶液：用于温血氏溶液：用于温血动物之心物之心

8、脏、子、子宫及其它及其它离体离体脏器。用作灌注液者器。用作灌注液者须于用前通入氧气泡于用前通入氧气泡15分分钟。低。低钙乐氏液（含无水氏液（含无水氯化化钙0.05g）用于离体小用于离体小肠及豚鼠的离体支气管灌注。及豚鼠的离体支气管灌注。台氏溶液：用于温血台氏溶液：用于温血动物之离体小物之离体小肠。动物的麻醉在急、慢性在急、慢性动物物实验中，手中，手术前均前均应将将动物麻醉，以减物麻醉，以减轻或消除或消除动物的痛苦，保持安静状物的痛苦，保持安静状态,从而保从而保证实验顺利利进行。由于麻醉行。由于麻醉药品的作用特点不同，品的作用特点不同，动物的物的药物耐受性物耐受性有种属或个体有种属或个体间差异及

9、差异及实验内容及要求不同，因此正确内容及要求不同，因此正确选择麻醉麻醉药品的种品的种类、用、用药剂量及量及给药途径十分重要。途径十分重要。理想的麻醉理想的麻醉药品品应当是当是对动物麻醉完善，其毒性和物麻醉完善，其毒性和对生生理功能干理功能干扰最小，使用方便。最小，使用方便。1常用麻醉常用麻醉剂的种的种类和用法和用法局部麻醉局部麻醉剂：0.5%-1.0%盐酸普酸普鲁卡因或卡因或2%盐酸可卡因酸可卡因用作皮肤或黏膜表面麻醉。用作皮肤或黏膜表面麻醉。全身麻醉全身麻醉剂：发挥性的乙性的乙醚，非，非挥发性的巴比妥性的巴比妥类、氨、氨基甲酸乙基甲酸乙酯等，在生理学等，在生理学实验中，多采用全身麻醉中，多采

10、用全身麻醉剂。2.麻醉前的准麻醉前的准备工作工作熟悉麻醉熟悉麻醉药品的特点品的特点根据根据实验内容合理内容合理选用用麻醉麻醉药。麻醉前麻醉前应核核对药物名称；物名称；检查药品有无品有无变质或或过期失效。期失效。狗、猫等手狗、猫等手术前前应禁食禁食12小小时，以减，以减轻呕吐反呕吐反应。需在全麻下需在全麻下进行手行手术的慢性的慢性实验动物，可适当物，可适当给予麻醉予麻醉辅助助药。例如，皮下注射。例如，皮下注射吗啡啡镇静止静止痛，注射阿托品减少呼吸道分泌物的痛，注射阿托品减少呼吸道分泌物的产生等。生等。3.给药方法1）全身性麻醉：）全身性麻醉：吸入麻醉：乙吸入麻醉：乙醚注射麻醉：常用注射麻醉：常用

11、乌拉坦、戊巴比妥拉坦、戊巴比妥钠及及氯醛糖等。主要糖等。主要给药途途径有：静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、皮下淋巴径有：静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、皮下淋巴囊注射等囊注射等2）局部麻醉：）局部麻醉：表面麻醉：表面麻醉：药物通物通过点眼、点眼、喷雾或涂布作用于粘膜表面，或涂布作用于粘膜表面，转而而透透过粘膜接触粘膜下神粘膜接触粘膜下神经末梢而末梢而发挥作用。作用。该药物除具有麻醉物除具有麻醉作用外，作用外，还有有较强的穿透力，如的卡因、利多卡因；的穿透力，如的卡因、利多卡因；浸浸润麻醉：麻醉：用注射的方法将用注射的方法将药物送到神物送到神经纤维旁。此旁。此类药物只物只需有局部

12、麻醉作用，不一定要求有需有局部麻醉作用，不一定要求有强大的穿透力，如普大的穿透力，如普鲁卡因卡因(对氨苯甲酸氨苯甲酸酯)、可卡因、利多卡因（其效力是普、可卡因、利多卡因（其效力是普鲁卡因的卡因的2倍）倍）。用作局部麻醉的。用作局部麻醉的药物的物的浓度一般度一般为1%2%，通常用，通常用0.5%1%.4.麻醉效果的观察呼吸：深慢而平呼吸：深慢而平稳角膜反射：明角膜反射：明显迟钝肌肌张力：全身肌肉松弛力：全身肌肉松弛皮肤皮肤夹捏反射消失。捏反射消失。5.兔耳缘静脉注射时的注意事项麻醉前麻醉前应正确正确选用麻醉用麻醉药品、用品、用药剂量及量及给药途径；途径；进行静脉麻醉行静脉麻醉时，先将，先将总用用

13、药量的三分之一快量的三分之一快速注入，使速注入，使动物迅速渡物迅速渡过兴奋期，余下的三分期，余下的三分之二量之二量则应缓慢注射，并密切慢注射，并密切观察察动物麻醉状物麻醉状态及反及反应，以便准确判断麻醉深度；，以便准确判断麻醉深度；如麻醉如麻醉较浅，浅，动物出物出现挣扎或呼吸急促等，需扎或呼吸急促等，需补充麻醉充麻醉药以以维持适当的麻醉。一次持适当的麻醉。一次补充充药量量不宜超不宜超过原原总用用药量的五分之一；量的五分之一；麻醉麻醉过程中，程中，应随随时保持呼吸道通保持呼吸道通畅，并注意，并注意保温；保温；手手术中，若遇到出血，常用的止血方法有中，若遇到出血，常用的止血方法有:钳夹止血法，止血

14、法，压迫止血法，迫止血法，结扎止血法，扎止血法，烧烙止血法烙止血法兔的采（取）血方法有耳中央兔的采（取）血方法有耳中央动脉取血，脉取血，股股动脉取血，耳脉取血，耳缘静脉取血，心静脉取血，心脏穿刺取穿刺取血血。实验一实验一生理机能系统的使用生理机能系统的使用血型测定血型测定一、生理机能系统的使用开机开机顺序：序：贵重重仪器先关后开器先关后开熟悉系熟悉系统操作操作仪器使用器使用二、血型测定实验原理：原理：一、血型一、血型血型血型：指的是：指的是红细胞膜胞膜上特异性抗原的上特异性抗原的类型。型。所以，所所以，所谓的血型，主要指的血型，主要指红细胞血型胞血型。红细胞凝集胞凝集：红细胞凝集反胞凝集反应是

15、一种抗原是一种抗原抗体反抗体反应，它是免疫反，它是免疫反应的一种形式。的一种形式。凝集原（凝集原（agglutinogen）：）：红细胞膜上存在着特异的抗原胞膜上存在着特异的抗原凝集素（凝集素（agglutinogen）：血液中与）：血液中与红细胞膜上的凝集原起反胞膜上的凝集原起反应的特的特异抗体异抗体血型的分血型的分类:目前已知人目前已知人类的的RBC除除ABO血型血型系系统外外,还有有Rh、P等等23个血型系个血型系统。ABO血型是根据血型是根据红细胞表面存在胞表面存在的凝集原（的凝集原（A或或B）决定的，分）决定的，分为A、B、AB、O四型。四型。1.1.输血型相合的血液输血型相合的血液

16、,最好成分输血最好成分输血;2.2.输血前必须进行血型输血前必须进行血型交叉配血试验交叉配血试验二、输血的原则二、输血的原则给给血血者者受受血血者者红细胞红细胞血清血清红细胞红细胞血清血清主侧次侧*两侧均不凝两侧均不凝:配血配血相合相合,可以输血可以输血;*主侧凝集主侧凝集,配血不配血不合合,绝对不能输！绝对不能输！*主侧不凝次侧凝集主侧不凝次侧凝集,配血基本相合，紧配血基本相合，紧急时考虑少量输。急时考虑少量输。总结：输血的原则总结：输血的原则1 1、准备输血时，首先必须鉴定血型、准备输血时，首先必须鉴定血型2 2、保证供血者与受血者、保证供血者与受血者ABOABO血型相合，且必须进行交血型

17、相合，且必须进行交叉配血试验叉配血试验 配血相合：可进行输血配血相合：可进行输血 配血不合：不可输血配血不合：不可输血 基本相合：原则同基本相合：原则同O O型血输给其他血型者或型血输给其他血型者或ABAB型血型血接受其他型血接受其他型血3 3、紧急情况无同型血：少量、缓慢、紧密观察。、紧急情况无同型血：少量、缓慢、紧密观察。实验方法取双凹玻片一取双凹玻片一块，用干，用干净纱布布轻拭使之拭使之洁净，在玻片两端用腊笔，在玻片两端用腊笔标明明A及及B，并分，并分别各滴入各滴入A及及B标准血清一滴。准血清一滴。取血：采左手无名指血。取血：采左手无名指血。70%酒精消毒酒精消毒风干干用一次性用一次性针头扎手指扎手指滴血（血量：滴血（血量：血清血清约为1:1用牙用牙签迅速混匀（切勿将两迅速混匀（切勿将两种血清混到一起）种血清混到一起）观察察结果。果。ABO血血型型的的鉴鉴定定实验结果的观察实验结果的观察实验报告：主要写结果及其分析，实验中遇到的问题及解决方法，思考题。预习下次实验：血血细胞胞计数数思考题在无标准A及B血清的情况下，已知某人为A型血，能否用他的血将其他人的血型检查出来？在ABO血型中，同型血互输也要做交叉配血试验吗？为什么？