最新实验一培养基的配制与灭菌ppt课件PPT课件.ppt

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1、实验一培养基的配制与灭实验一培养基的配制与灭菌菌pptppt课件课件 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院一 实验目的了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大

2、学生命科学学院福建农林大学生命科学学院灭菌方法灭菌方法加热灭菌加热灭菌干热灭菌干热灭菌湿热灭菌湿热灭菌过滤除菌过滤除菌辐射灭菌辐射灭菌放射线辐照灭菌放射线辐照灭菌紫外线灭菌紫外线灭菌化学药品灭菌化学药品灭菌 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院加热灭菌加热灭菌干热灭菌干热灭菌v干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。v细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。v因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160170），时间要长（12h），但干热灭菌温度不能超过但干热灭菌

3、温度不能超过180180，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃燃烧烧。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院湿热灭菌湿热灭菌 高压蒸气灭菌是将待灭菌的高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而而增

4、加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于使沸点增高，得到高于100100的温的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。达到灭菌的目的。在同一温度下，湿热的杀在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸气有潜大，三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，速提高被

5、灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。从而增加灭菌效力。1g水在水在100时，由气态变时，由气态变为液态时可放出为液态时可放出2.26kJ(千千焦焦)的热量。的热量。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。温度低于饱和蒸气的温度。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 一般培养基用0.1Mpa0.1Mpa，121.5,15121.5,1530min30min可达到彻底灭菌的目的。

6、可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院过滤除菌过滤除菌不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。清），一般可用细菌过滤器进行除菌。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院紫外线灭菌法紫外线灭菌法 紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200-300nm200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm260nm的杀菌力最强。在的杀菌力最强。在波长一定的条件

7、下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。积成正比。紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和二聚体的形成和DNADNA链的交联，从而抑制了链的交联，从而抑制了DNADNA的复制。的复制。另另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成OO，再使，再使O O2 2氧氧化生成臭氧（化生成臭氧（O O3 3）或使水（）或使水（H H2 2O O）氧化生成过氧化氢（）氧化生成过氧化氢（H H2 2O O2 2）。）。O O3 3和和H H2 2O O2 2均有杀菌作用

8、。紫外线穿透力不大，所以，均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m1.2m为宜。为宜。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯以为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯以前；可在无菌室内前；可在无菌室内(或接种箱内或接种箱内)喷洒喷洒3%3%5%5%石炭石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内落，另一

9、方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面、凳子可用的桌面、凳子可用2%2%3%3%的来苏尔擦洗，然后再的来苏尔擦洗，然后再开紫外灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目开紫外灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。的。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院化学药品灭菌化学药品灭菌微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。灭、煤酚皂溶液，它们有的

10、是杀菌剂，有的是抑菌剂。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院三 实验材料药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、可溶性淀粉、K K2 2HPOHPO4 4、KNOKNO3 3、MgSOMgSO4 4 7H7H2 2O O、FeSOFeSO4 47H7H2 2O O等。等。高压蒸汽灭菌锅、恒温干热灭菌箱、超净工作台。高压蒸汽灭菌锅、恒温干热灭菌箱、超净工作台。其它：天平、牛角匙、电炉、其它：天平、牛角匙、电炉、2MHCl2MHCl、2MNaOH2MNaOH、pHpH试纸、试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒

11、、玻璃珠、三角刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、玻璃珠、三角瓶、带塞子的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、瓶、带塞子的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、标签等。各种包装纸、防水纸、标签等。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院四 实验步骤6.加塞7.包扎8.灭菌9.搁置斜面10.无菌检查1.称量2.溶化3.调pH4.过滤5.分装 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院称量：称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。溶化：溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。调调pH值：值：用1MNaOH或1MHCl调pH，用pH试纸对照。加

12、琼脂溶化：加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。分装：分装：注意不要污染棉塞。包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。灭菌备用：灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院几种常用培养基配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 水 1000ml pH 7.47.6。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院高氏高氏号培养基配方如下：号培养基配方如下：可溶性淀粉 20g NaCl 0.5g KNO3 1gK2H

13、PO43H2O 0.5gMgSO47H2O 0.5gFeSO47H2O 0.01g 琼脂 1525g 水 1000mL pH 7.47.6 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院马铃薯培养基配方：马铃薯培养基配方：马铃薯 200g葡萄糖 20g琼脂 l520 g蒸馏水 l000mL pH 自然 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院阿斯毕无氮培养基：阿斯毕无氮培养基：甘露醇（或蔗糖、葡萄糖）甘露醇（或蔗糖、葡萄糖）10gKH2PO40.2gMgSO4.7H2O0.2gNaCl0.2gCaSO4.2H2O0.1gCaCO35g琼脂琼脂20g水水1000mlPH7.07.2 福

14、建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院五 注意事项n在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气要尽可能排除完；n易燃易爆物品（如：硝化甘油、硝化纤维、黄磷、红磷、乙醚、汽油及可燃性气体等）不能用高压灭菌法灭菌；n当含盐类的液体和含盐的琼脂中大量的盐类泼洒在工作腔体，要立即换水，冲洗腔体，仔细擦干锅盖垫圈上的水滴。否则它们会带来腐蚀和变质。要检查压力表上的指数为“0Mpa”后才能打开锅盖。n外来物质（金属、液体）不能堵塞通风孔，否则会引起装置故障、起火、短路。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院n蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛交匙用于一

15、种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。n在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。n分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上以免污染棉塞而引起污染。n分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，三角瓶的装量不超过瓶体的1/2。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院六 思考题n1.1.思考牛肉膏蛋白胨培养基属于何种培养基？思考牛肉膏蛋白胨培养基属于何种培养基？n2.2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？n3.3.在配制培养基的操作过程要注意哪些问题？在配制培养基的操作过程要注意哪些问题？n4.4.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？冷空气完全排尽？结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！29