最新培养基的配制、分装、灭菌PPT课件.ppt

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1、培养基的配制、分装、灭培养基的配制、分装、灭菌菌二二. . 实验材料实验材料l其它：天平、牛角匙、电炉、其它：天平、牛角匙、电炉、1N NaOH1N NaOH、pHpH试纸、试纸、 刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、 带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、 无棉塞的空试管、培养皿、吸管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、 各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等（4 4）关键步骤及注意事项）关键步骤及注意事项要严格按配方配制。要严格按配方配制。调调pHpH不要过头。不要过头。干热灭菌要注

2、意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70C70C以下放物、取物。以下放物、取物。高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。降压回零取物。（二）灭菌（二）灭菌灭菌：用物理或化学的方法杀灭物体上一切微生物。灭菌：用物理或化学的方法杀灭物体上一切微生物。（1 1）干热灭菌法：把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温）干热灭菌法：把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温 至至160C160C，恒温，恒温1 1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用 具等的

3、灭菌。具等的灭菌。（2 2）高压蒸汽灭菌法（一般）高压蒸汽灭菌法（一般121C121C，30min30min，适用培养基）：，适用培养基）： 把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进 行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上 升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到1.055 1.055 公斤公斤/ /厘厘 米米2 2时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121C121C。在这种。在这种 情况下，微生物（包括芽孢）在情况下，微生物

4、（包括芽孢）在151520 20 分钟便会被杀分钟便会被杀 死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等 面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时 间。间。高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法1 1加水加水 将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的 水，以水面与三角架相平为至。水，以水面与三角架相平为至。2 2装料装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培 养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶养基的

5、容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶 壁，以防冷凝水沾湿棉塞。壁，以防冷凝水沾湿棉塞。3 3加盖加盖 将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌 桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧 相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀；相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀；4 4排气排气 加热。待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔加热。待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔 排出。一般认为，当水沸后约排出。一般认为，当水沸后约5min5min，表明锅内空气已排，表明锅内空气已排 净。净

6、。5 5升压升压 当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始 上升。上升。6 6保压保压 当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源。当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源。 开始计时并维持压力至所需时间。本实验用开始计时并维持压力至所需时间。本实验用121121， 20min20min灭菌。灭菌。7 7降压降压 达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下 降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅 盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。盖，取出灭菌物品，倒掉锅内

7、剩水。8 8无菌检查无菌检查 将已灭菌培养基于将已灭菌培养基于3737培养培养24h24h，无杂菌生，无杂菌生 长，即可待用。长，即可待用。注意事项：注意事项：使用灭菌锅应严格按照操作程序进行，避免发使用灭菌锅应严格按照操作程序进行，避免发生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开，务必待压力下降生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开，务必待压力下降到零后，才可打开锅盖。到零后，才可打开锅盖。（3 3）间歇灭菌法：待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天）间歇灭菌法：待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天 蒸煮蒸煮1 1次，每次煮沸次，每次煮沸1h1h，连续，连续3d 3d 重复进行。在每两次蒸重复进行。在每两

8、次蒸 煮之间，将物品（指培养基）放在煮之间，将物品（指培养基）放在37C37C恒温条件下培养恒温条件下培养 过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成 营养体，以便下次蒸煮时杀灭。营养体，以便下次蒸煮时杀灭。（4 4）巴氏灭菌法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质）巴氏灭菌法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质 量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来 杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风 味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在 6262，3030分钟既可达到消毒目的。此法为法国微生物学分钟既可达到消毒目的。此法为法国微生物学 家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。