LC-MS-MS定量培训参考资料.pdf

《LC-MS-MS定量培训参考资料.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《LC-MS-MS定量培训参考资料.pdf（79页珍藏版）》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、1AB China 2008 Applied Biosystems感谢您使用ABI产品 请将您的手机设置为静音 卫生间位于大门右侧 敬请各位留意紧急通道,大门左侧楼梯2AB China 2008 Applied Biosystems培训日程第一天第一天上午上午9:00-下午下午4:009:00-9:20爱普拜斯应用生物系统公司技术服务体系简介9:20-9:40用户自我介绍9:40-10:00 合影10:00-10:10 茶歇茶歇10:10-11:30 串联液质系统分析原理11:30-12:00 总结与问题解答12:00-1:30工作午餐工作午餐1:30-4:00实验操作练习实验操作练习实验操作

2、内容：实验操作内容：仪器硬件设备简介与维护ESI、APCI源的转换方法管路的正确连接方法：连续进样、色谱进样等复习PPG校正方法及应注意的问题3AB China 2008 Applied Biosystems培训日程第二天第二天上午上午9:00-下午下午4:009:00-10:30 Analyst软件概揽、定量分析流程简介10:30-10:40 茶歇茶歇10:40-11:30 如何建立定量方法、定量列表及结果计算，Analyst软件的使用（电脑模拟演示11:30-12:00），总结与问题解答12:00-1:30工作午餐工作午餐1:30-4:00实验操作练习实验操作练习实验操作内容实验操作内容：

3、定量方法建立的基本流程MRM方法建立与参数优化-FIA优化源参数-LC-MS调整优化目标化合物的保留时间，并进行进一步参数优化与调整，以得到满意的灵敏度4AB China 2008 Applied Biosystems培训日程第三天第三天上午上午9:00-下午下午4:009:00-10:00 定量分析思路与成功液质分析的经验。10:00-10:30 Analyst软件的使用（电脑模拟演示）常用Script功能简介10:30-10:40 茶歇茶歇10:40-12:00Analyst软件的使用（电脑模拟演示）计算器、数据库功能及其他问题解答12:00-1:30工作午餐工作午餐1:30-4:00实验

4、操作练习实验操作练习实验操作内容：实验操作内容：练习Analyst软件拓展功能Library、Calculator、Scripts上机操作自由练习5AB China 2008 Applied BiosystemsASC Mission Statement 亚太技术应用支持中心宗旨亚太技术应用支持中心宗旨To offer a state-of-the-art facility for China and Asia Pacific,providing the advanced mass spectrometry product portfolio in a functional setting,a

5、 range of application and training experts,and comprehensive customer support programs,to serve the life science community and meet our customers needs.为中国和亚太区提供一个我公司最现代化的质谱技术支持中心平台为中国和亚太区提供一个我公司最现代化的质谱技术支持中心平台,为生命为生命科学领域的研究者和我们的客户提供快捷、全方位的一站式服务！科学领域的研究者和我们的客户提供快捷、全方位的一站式服务！6AB China 2008 Applied Bi

6、osystemsASC Technology and Support Areas 技术和应用范围技术和应用范围Pharmaceutical&Natural Products,Proteomics&Biomarker Research,Forensics,Environment and Food Safety Testing新药研发新药研发,天然产物天然产物,蛋白组学和生物标志物蛋白组学和生物标志物,法医法医,环境和食品安全分析环境和食品安全分析Q TRAPFamilyQSTARELITETOF/TOFTM Family LightSight&Cliquid SoftwareiTRAQ Reag

7、entsTempoTMLC FamilyAPIFamilySmall MoleculesProteomics/BiomarkerPOROSReagentsMarkerView andAnalystSoftwareProteinPilotSoftware7AB China 2008 Applied BiosystemsInstrument Demonstration and Sample Analysis仪器仪器示示范和范和各各个领域中的个领域中的样样品分析品分析Best in ClassHigh Performance Advanced Tandem Mass Spectrometers 性能

8、卓越性能卓越技术领技术领先先的的串联串联质谱仪质谱仪系列系列8AB China 2008 Applied BiosystemsComprehensive and Systematic Training Programs提供提供综合性综合性和和系统性培训，包括系统性培训，包括技术和应用技术和应用培训培训-Regular training courses posted on the web 常规培训班常规培训班(网络注册）网络注册）-Training courses on the demand 客户客户特殊需求特殊需求的的培训班培训班-External training 客户客户培训培训-Inte

9、rnal training 内部员内部员工工培训培训9AB China 2008 Applied BiosystemsDevelopment of Regional Specific Applications 针对本土需求针对本土需求提供服务提供服务,开开发发本土本土应用应用市场市场 如如食品安全分析食品安全分析X I C o f +M R M (1 0 p a ir s):2 4 9.3/1 0 4.2 a m u f ro m S a m p le 1 (S T D 0#1)o f 3 0 O C T 0 2 D A Y 8 V a lid a t io.M a x.1 2 3 3.3 c

10、 p s.1234567891 01 11 21 31 4T im e,m in0.05 0 0 0.01.0 e 41.5 e 42.0 e 42.5 e 43.0 e 43.5 e 44.0 e 44.5 e 45.0 e 45.5 e 46.0 e 46.5 e 47.0 e 47.5 e 48.0 e 41 3.6 01 4.4 61 3.2 01.5 39.0 00.0 71.7 91 0.5 41 1.5 06.5 49.7 64.5 37.6 26.1 98.5 52.8 74.1 75.6 2X I C o f +M R M (1 0 p a ir s):2 4 9.3/1 0

11、 4.2 a m u f ro m S a m p le 6 (S T D 2.0#1)o f 3 0 O C T 0 2 D A Y 8 V a lid a t io.M a x.1.3 e 4 c p s.1234567891 01 11 21 31 4T im e,m in0.01.0 e 42.0 e 43.0 e 44.0 e 45.0 e 46.0 e 47.0 e 48.0 e 49.0 e 41.0 e 51.1 e 51.2 e 51.3 e 51.4 e 51.5 e 57.6 7Nitrofuran metabolites in chichen10AB China 200

12、8 Applied BiosystemsProvide On-site and Remote Support Network提供提供多样多样化的支持化的支持，边远地，边远地区的客户区的客户也能享受到及时也能享受到及时的服务的服务Skype,emails,webex,webinars 在线在线服务服务Phone support&tracking system电话电话支持和支持和追踪追踪服务服务On site application support现现场场应用支持应用支持11AB China 2008 Applied BiosystemsASCA Comprehensive One-Stop Fa

13、cility Serves AB Customers in Asia Pacific为生命科学领域的研究者和我们的客户提供快捷、全方位的一站式服务！为生命科学领域的研究者和我们的客户提供快捷、全方位的一站式服务！Comprehensive training programs 多样多样化的化的培训培训Demo&sample analysis 示示范和范和样样品分析品分析Integrating science&technology,and expertise,to help the life science community and satisfy customers 综合综合科技科技，专业，专

14、业技术技术，让，让生命科学研究生命科学研究者和我们的客户者和我们的客户得到得到最最满意满意的服务的服务Development of regional specific applications 开开发发本土本土应用应用On-site and remote support network 现现场场和和在线在线支持支持Food SafetyCollaboration with leaders in the field 与行业与行业领领导导者者合合作作美美国应用生物国应用生物系统系统公司公司亚太区技术服务中心亚太区技术服务中心串联液串联液质质系统系统分析分析原理原理13AB China 2008 A

15、pplied Biosystems联系联系方式方式 硬件及保修：硬件及保修：8008100497 软件及软件及应用应用：8008203488北京北京 8008100192广州广州 8008302001 网网站站：14AB China 2008 Applied BiosystemsDay 1 培训日程9:00-9:20爱普拜斯应用生物系统公司技术服务体系简介9:20-9:40用户自我介绍9:40-10:00 合影10:00-10:10 茶歇茶歇10:10-11:30 串联液质系统分析原理11:30-12:00 总结与问题解答12:00-1:30工作午餐工作午餐1:30-4:00实验操作练习实验操

16、作练习来自什么单位、来自什么单位、使用仪器的型号、主要用途、使用仪器的型号、主要用途、对质谱技术的了解程度、对质谱技术的了解程度、想通过培训班学到些什么？想通过培训班学到些什么？15AB China 2008 Applied Biosystems100200300400500600m/z0100%254.2194.2507.3334.3399.7质谱的基本概念一、质谱是什么？一、质谱是什么？Mass Spectromety特殊的天平：称量离子的质量。质谱学：是一门研究气相离子结构、性质及反应行为的科学。二、质谱能做什么？二、质谱能做什么？定性：化合物的结构定量：混合物的组成领域：化学、生物学、

17、医学、药学、环境、物理、材料、能源等三、质谱的独到之处是什么？三、质谱的独到之处是什么？4个特性：Sensitivity 灵敏Speed 快速Specificity 特异Stoichiometry化学计量16AB China 2008 Applied Biosystems 质谱分析过程：样品通过进样系统进入离子源，由于结构性质不同而电离为各种不同质荷比（m/z）的分子离子和碎片离子，而后，带有样品信息的离子碎片被加速进入质量分析器，不同的离子在质量分析器中被分离并按质荷比大小依次抵达检测器，经记录即得到按不同质荷比排列的离子质量谱，也就是质谱(mass spectrum)。质谱：按离子的质荷比

18、的大小依次排列形成的图谱质谱技术质谱技术：17AB China 2008 Applied Biosystems质谱是如何工作的质谱是如何工作的样样品品引入引入离子离子化化质质量量分析器分析器质质量量分析分析检测检测器器检测检测数据数据分析分析离子源离子源+13301330133013401340134013501350135010010010075757550505025252500 0样样品品引入引入Method to vaporize sample Solid Liquid Vapor检测离子离子的形成(带电荷的离子)根据质荷比(m/z)分离质谱质谱图图18AB China 2008 Ap

19、plied Biosystems液相色液相色谱谱串联串联质谱质谱1.液体样液体样品品通过通过LC或连续进或连续进样样进进入离子入离子源源中中2.液体液体中中有关有关的分的分子子转变成气转变成气态态的的离子离子；这些；这些离子到离子到达真空达真空界面界面3.在电场在电场梯度梯度和和压力压力梯度梯度下下，离子，离子通过界通过界面面4.离子在离子在四级杆四级杆中中传输传输、选择或碎裂选择或碎裂5.离子离子被被检测，检测，信号信号传输传输到到工作站工作站，显显示示质谱质谱数据数据q0Q1q2Q319AB China 2008 Applied BiosystemsIon sourceMass analy

20、serGC/MS:EI,CIQuadrupoleLC/MS:ESI,APCI,APPIIon trapBiomolecules:MALDITime of FlightTriple quadrupoleHybrid MSSet-up of a mass spectrometer：20AB China 2008 Applied Biosystems样样品品引入引入方法方法 连续进样-提供准确的低流速。允许连续的样品引入以便仪器的调谐和优化。分流进样-使用针泵和LC系统优化离子源和化合物参数。流动注射进样(FIA)-没有柱子的情况下，使用LC高通量的优化离子源参数。液相色谱-使用LC在宽的流速范围下

21、，分离、分析混合物21AB China 2008 Applied BiosystemsTriple Quadrupole sequence of events离子检测离子过滤离子运输离子产生离子过滤离子处理22AB China 2008 Applied Biosystems离子产生第一步：离子产生23AB China 2008 Applied Biosystems大气压离子化接口*(API)主要有3种大气压离子化接口：电喷雾电离(ESI)-样品通过保持在高压下的电喷雾针喷射出带电荷的液滴，最终演变成气态离子。此源是化合物在液相中离子化。我们的TurboIonSpray 离子源使用加热辅助气，保

22、证了高流速。大气压化学电离(APCI)-样品被喷雾到加热室中，在电晕针帮助下使化合物在气相中离子化。大气压光电离(APPI)-是化合物在气相中离子化。我们的PhotoSpray离子源也有加热的雾化气并使用UV辐射和掺杂剂（dopant）来诱导离子化。*大气压离子源，或API，是一种非常温和的、低能量离子化过程。24AB China 2008 Applied Biosystems离子源3.6e4Intensity,cpsMometasoneMinoxidilTIS0.51.01.52.02.53.03.5Time,min0.04.0e4Intensity,cps0.51.01.52.02.53.

23、03.50.0Time,minMometasoneMinoxidilAPCI25AB China 2008 Applied Biosystems电喷雾离子化(ESI)原理气帘气气帘气(CUR)蒸蒸发发库伦爆炸库伦爆炸离子离子喷雾喷雾电电压压(IS)雾雾化化气气(GS1)LC Flow形成带形成带电液电液滴滴Orifice(DP)质质量量分析器分析器真空区域大气压区域TurboHeater(TEM)/辅助加热气辅助加热气(GS2)1.2.3.1.形成带电液滴2.液滴蒸发，液滴里的场强增加3.离子从液滴中脱离，在接口处聚焦26AB China 2008 Applied BiosystemsLCFl

24、ow+2-4kV电喷雾离子化：形成带电液滴电化学反应27AB China 2008 Applied Biosystems电喷雾离子化:溶剂蒸发和小液滴碎裂+溶剂蒸发液滴非均匀碎裂+.28AB China 2008 Applied Biosystems电喷雾离子化：形成气相离子离子蒸发模式对于半径10nm的液滴,电荷的排斥作用导致离子从液滴表面蒸发而不是 液滴的分裂.离子从溶液中转移至气相AH+AH+AH+AH+X-AAH+X-AH+AH+AAH+AH+AH+X-AH+AH+AH+X-AH+AH+AAH+X-AH+AH+r 10 nmAH+29AB China 2008 Applied Bios

25、ystems离子源的喷雾臂在上方，加热器在底部离子源的后方可调节API 2000 的 TurboIonSpray离子源30AB China 2008 Applied Biosystems离子源的喷雾在左边，加热器在右方离子源的底部有气和加热装置的连接，并有废气出口API 3000 系统的 TurboIonSpray离子源31AB China 2008 Applied Biosystems40 L/min200 L/min1.0 mL/min流速=Curtain PlateOrifice2-3 mmAPI 3000 系统 TurboIonSpray离子源操作条件32AB China 2008 A

26、pplied BiosystemsCurtain PlateOrifice2-3 mmAPI 2000 系统 TurboIonSpray离子源操作条件40 L/min200 L/min1.0 mL/min流速=33AB China 2008 Applied Biosystems严禁对ORIFICE直接喷雾！喷雾后喷雾后液体在液体在气帘气档板气帘气档板上的上的溅溅开线开线外外延延应应离离Curtain Plate孔孔 边边35mm流流量越量越大大，喷雾喷雾针针应应离离Orifice越远越远正确正确的的喷雾口喷雾口与与Orifice的位的位置置：34AB China 2008 Applied Bi

27、osystemsTurbo V 离子源(针对 API 3200,API 4000,&API 5000 系统)垂直和水平方向可精细调节 内置的气路和配线方便使用 直角设计保证了充分的去溶剂并提高了耐用性 对称的 750C 加热装置 含2个离子源:ESI&APCI35AB China 2008 Applied Biosystems参数优化喷针位置通常高于导管0.5至1mm根据流动相的比例和流速大小优化参数，高含水比例的流动相需要更高的温度和气流，离子源温度太低时易形成溶剂簇离子气帘气在不影响灵敏度的前提下可设定较高值，以保障仪器的抗污染及方法的重现性36AB China 2008 Applied

28、BiosystemsTurboIonSpray离子源指南 气帘气Curtain Gas(CUR),雾化气Nebulizer Gas(GS1),和辅助气Heater Gas(GS2)在不影响信号损失的前提下，气帘气设置的尽量高 在试验所用的LC流速下优化 喷射 对于 API 2000&API 3000 系统-不要不要对对着孔喷射着孔喷射!一般不依赖于化合物 在高流速下喷射须离孔远一些37AB China 2008 Applied BiosystemsTurboIonSpray离子源指南针电压 正离子:1500 到 5500V 负离子:-1500 至-4500V温度(TEM)高流速需要高的温度 A

29、PI2000，API3000：最高到500度 API3200，API4000，API5000：最高到750度38AB China 2008 Applied BiosystemsTurboIonSpray离子源指南(续)流速和溶剂组成 流速 2-400 L/min-API 2000&API 3000 系统 2-1000 L/min-API 3200,API 4000&API 5000 系统 溶剂是100%水或100%有机相，仪器均可操作，但在有机相/水相下能达到最好的灵敏度39AB China 2008 Applied BiosystemsTurboIonSpray离子源指南(续)ESI下的常用

30、的溶剂组成 挥发性的缓冲液，如甲酸铵或醋酸铵(2 10 mM 最佳，超过20 mM会引起抑制)酸 0.1-1.0%乙酸 0.1%甲酸 正离子模式下最大0.1%TFA-可能引起抑制不要不要在在负负离子离子模模式下式下使使用用TFA40AB China 2008 Applied Biosystems离子源的选择-ESI优点 适合范围广:分析离子型/极性化合物、难挥发或热不稳定性化合物多电荷离子的形成，可以分析高分子量化合物 灵敏度高缺点 在溶液中必须形成离子 流动相中缓冲盐的种类和浓度对灵敏度均有显著影响，因此流动相的选择非常重要 具有流速依赖性 基质抑制现象较为明显 放电现象41AB China

31、 2008 Applied Biosystems大气压化学电离(APCI)的原理l毛细管样品送入加热管中l在加热管中溶剂挥发l加热管出口处放置电晕(Corona)放电针,使挥发出来的溶剂分子电离，形成等离子体。l等离子体与样品分子反应，生成MH+或MH准分子离子。42AB China 2008 Applied BiosystemsAPI 2000系统的APCI源离子源外，后部可调节加热的雾化气，上部调节电晕针离子源内部,在孔与石英管之间的电晕针43AB China 2008 Applied BiosystemsAPI 3000系统的APCI 源离子源外，探针，气、电源连接和横向校正离子源内部,

32、在孔与石英管之间的电晕针44AB China 2008 Applied BiosystemsTurbo V离子源的APCI 一个不用使用工具只要换探针就可以切换ESI和和APCI 的离子源 用手或螺丝起子就可调节的电晕针 电晕针一直在离子源中(显示ESI 探针）45AB China 2008 Applied BiosystemsAPCI 加热喷雾器指南加热喷雾器是高流速入口 0.2 2.0 mL/min-API 2000&API 3000 系统 0.05 2.0 mL/min-API 3200,API 4000&API 5000 系统 APCI 适合非极性热稳定的化合物 分子量 1300 am

33、u 探针加热有助于蒸发需要电晕针诱导化学离子化46AB China 2008 Applied BiosystemsAPCI 加热喷雾器指南(续)电晕针位置 稍偏离探针，对准孔气帘气(CUR)在不减少灵敏度的前提下设的尽量高缓冲液 缓冲液/添加剂不需要离子化 挥发性缓冲液最高50mM 极性大的化合物可能降低极性低的化合物的灵敏度，比如 TFA正离子模式下从分析物那里夺走电荷47AB China 2008 Applied Biosystems参数优化48AB China 2008 Applied Biosystems离子源的选择-APCI优点 有一定挥发性的中等极性或低极性的小分子化合物 对溶剂选

34、择、流速和添加物的依赖性较小缺点 有可能发生热裂解 样品需要有一定的挥发性 适合分析分子量小于2000 Da 的样品49AB China 2008 Applied Biosystems大气压光离子化(APPI)原理APPI中两个离子化机制:1.电荷在非极性化合物间传递(上面所示)2.极性化合物溶剂传递.50AB China 2008 Applied BiosystemsAPPI Source 加热雾化器 适合非离子非极性热稳定化合物 探针加热有助于蒸发 需要dopant post-column和UV光子诱发离子化 操作范围类似 APCI Turbo VTM源51AB China 2008 Ap

35、plied Biosystems什么时候使用不同源ESIAPCIAPPIIonicAnalyte PolarityMolecular Weight10110210310104105Non-Ionic52AB China 2008 Applied Biosystems避免的事:盐干扰离子化并成簇，使质谱图变得复杂 强碱或季铵如三乙胺，在正离子模式下引起信号抑制 强酸如磺酸、硫酸和三氟乙酸 可能在负离子模式下引起信号抑制 非挥发性添加剂或缓冲液如磷酸盐导致加合物的产生，且污染物离子源 非挥发离对子试剂如十二烷基硫酸钠（SDS)引起严重的离子抑制53AB China 2008 Applied Bio

36、systemsDrain withFixed High SuctionRoom AirRoom Air废气排放装置废气排放装置54AB China 2008 Applied BiosystemsESI主要主要特特点？点？APCI主要主要特特点？点？55AB China 2008 Applied Biosystems离子运输第二步：离子运输56AB China 2008 Applied Biosystems气帘气接口如何工作的？不带电荷的粒子的屏障不带电荷的粒子的屏障不带电荷的粒子的屏障不带电荷的粒子的屏障离子进入四级杆源于离子进入四级杆源于:压力梯度压力梯度(离子、杂质离子、杂质)电场梯度电场

37、梯度(离子离子)防止中性分子和不挥发盐由于压力梯度进入防止中性分子和不挥发盐由于压力梯度进入四级杆，污染四级杆四级杆，污染四级杆提高仪器的抗污染能力及稳定性提高仪器的抗污染能力及稳定性辅助样品去溶剂辅助样品去溶剂防止离子簇的产生防止离子簇的产生Vacuum PumpSkimmerFocusing RingOrificeCurtain PlateCurtain GasCurtain GasQ0 areaVacuum Pump57AB China 2008 Applied BiosystemsCurtain Gas interfaceATMOSPHERIC PRESSUREVACUUMCURDPS

38、KFPATMOSPHERIC PRESSUREVACUUMCURDPSKFPN2ATMOSPHERIC PRESSUREVACUUMCURDPSKFPN2+ATMOSPHERIC PRESSUREVACUUMCURDPSKFPN2+ATMOSPHERIC PRESSUREVACUUMCURDPSKFPN2+ATMOSPHERIC PRESSUREVACUUMCURDPSKFPN2+ATMOSPHERIC PRESSUREVACUUMCURDPSKFPN2+ATMOSPHERIC PRESSUREVACUUMCURDPSKFPN2+ATMOSPHERIC PRESSUREVACUUMCURDPS

39、KFPN2+ATMOSPHERIC PRESSUREVACUUMCURDPSKFPN2+Q0LC流速大流速大时，时，CURDP：不同不同化化合合物物，DP不同不同，应分应分别优别优化化DP设置过大设置过大，化化合合物物会被会被部部分分打碎打碎源内源内裂解裂解抗污染抗污染助气助气化化58AB China 2008 Applied Biosystems离子过滤第三步：离子过滤59AB China 2008 Applied BiosystemsMS 扫描模式类型Q1 MSStart Stop Scan Full ScanQ1 Center WidthQ1 MIMultiple Ion Modemet

40、hod inputanalysis outputmass range scan timemass width scan timeMassdwell timeintensity200600m/zintensity200600m/zintensity010timeQ3 MS,Q3 center width,Q3 MI scan mode operation is the same as the Q1 scans modes aboveMultiple Start Stop Scans60AB China 2008 Applied BiosystemsMS:modes of operationSel

41、ected Ion Monitoring(SIM)select Precursor Ionscan Precursor IonsQ1 full scan61AB China 2008 Applied BiosystemsQuadrupole：full scanning modeTimem/z ratiom/z 1m/z 3m/z 2Last m/z1stscanm/z 3m/z 2Last m/z2ndscan62AB China 2008 Applied Biosystems离子处理第四步：离子处理63AB China 2008 Applied BiosystemsLINAC/LINAC/L

42、INAC/LINAC/高压碰撞室高压碰撞室高压碰撞室高压碰撞室-无交叉污染无交叉污染，有效消除有效消除有效消除有效消除“假阳性假阳性假阳性假阳性”Low Gas PressureHigh Gas Pressure,Collisional FocusingHigh Pressure8 mTorrHigh Pressure8 mTorrLINAC线性离子加速碰撞池技术 高（气）压碰撞池设计使离子连续加速，快速通过碰撞池 提高灵敏度 MRM模式下（定量），允许减少离子驻留时间，而不损失灵敏度“n in 1“MRM up to 300 pairs 提高分析速度 有效消除“记忆效应”增加分析结果可靠性6

43、4AB China 2008 Applied Biosystems300 pesticidesXIC of+MRM(297 pairs):226.2/170.0 amu from Sample 1(MRMs 100)of Data MRM pesticides_02.wiff(Turbo Spray)Max.1.1e6 cps.1234567891011121314151617181920212223Time,min0.005.00e41.00e51.50e52.00e52.50e53.00e53.50e54.00e54.50e55.00e55.50e56.00e56.50e57.00e57.

44、50e58.00e58.50e59.00e59.50e51.00e61.05e611.79Mix 100ng/mLWe can monitor more compoundsin a single run while still meeting EU requirements65AB China 2008 Applied Biosystems第五步：离子过滤离子过滤66AB China 2008 Applied BiosystemsMS/MS:modes of operationProduct Ion Scanfilter Precursor Ionscan Product IonMultipl

45、e ReactionMonitoring(MRM)filter Precursor Ionfilter Product Ionscan Precursor Ionfilter Product IonPrecursor Ion Scanscan Q1 and Q3 with constant mass off-setNeutral Loss Scan67AB China 2008 Applied Biosystems在离子源形成的离子全部储存在质量分析器。然后，这些离子依次从质量分析器中扫描出来，形成一个全扫描谱。full scan-全扫描 50 100 150 200 250 300 350

46、400 450 500 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Relative Abundance 249.0 207.9 250.0 234.9 496.8 362.2 318.0 450.7 193.7 431.9 155.8 M2+H+CH3CN+M2+H+M1+H+CH3CN+M1+H+68AB China 2008 Applied BiosystemsProduct Ion Scan产物离子扫描m1+fixedm3+scanned69AB China 2008 Applied BiosystemsEphedrine,a b-AgonistHNCH3

47、OHCH3(M+H)+166148Product ion spectrumMW=16570AB China 2008 Applied BiosystemsPrecursor Ion Scan-母离子扫描母离子扫描m3+fixedm1+scanned71AB China 2008 Applied Biosystems+Prec(143.10):Exp 1,5.917 to 6.018 min from Sample 16(Pres-IDA-UV2)Max.1.3e6 cps.100150200250300350400450500550m/z,amu1.00e52.00e53.00e54.00e5

48、5.00e56.00e57.00e58.00e59.00e51.00e61.10e61.20e61.27e6Intensity,cps143.1519.0535.8360.0302.872AB China 2008 Applied BiosystemsNeutral Loss Scan-中性碎片丢失扫描m1+scannedm3+scanned m73AB China 2008 Applied BiosystemsAmino Acid Scan(NL=102)PKU positivePhe/Tyr ratio a much better indicator.ControlPositive3.12

49、e4 cpsfromT-12134.2146.2172.3188.3209.3222.3242.3260.3290.4150180210240270300m/z,amu600012000180002400030000Intensity,cps7.85e4 cpsfromControlMxd AC&AA134.2146.2172.3188.3209.3227.3242.3260.3290.4150180210240270300m/z,amu200004000060000Intensity,cpsI.S.I.S.*227.3PheTyr74AB China 2008 Applied Biosystems离子检测第六步：离子检测75AB China 2008 Applied Biosystems76AB China 2008 Applied BiosystemsCEM Gain Check(Q1 SIM)77AB China 2008 Applied Biosystems串联串联四四极极杆杆的的扫描扫描方式方式有有哪哪些？些？检测检测器器电电压优压优化化原原则则？78AB China 2008 Applied BiosystemsAny Questions?79AB China 2008 Applied BiosystemsThanks for listening!