血清肌酸激酶CK测定.doc

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1、血清肌酸激酶CK测定1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。2 实验原理肌酸激酶德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法。 ADP + 磷酸肌酸 肌酸 + ATP己糖激酶(HK) ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸(G6P-DH) 葡萄糖-6-磷酸+NADP+ 6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+ NADPH在340nm处有特异吸收，通过测定NADPH生成速率计算出CK活性。3 标本：3.1 病人准备：无特殊要求。3.2 类型：血清或EDTA血浆。3.3. 标本存放：稳定性：28保存稳定7天;1525保存稳定1天;-2

2、0保存稳定4周（避光保存）。3天内的活性损失：28保存24小时或1822保存1小时至少损失10%。3.4 标本运输：常温条件下保存运输。3.5 标本拒收标准：细菌污染的标本。4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司CK试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成： 试剂1（R1）： D-葡萄糖 27mmol/L 咪唑缓冲液 60mmol/L 乙酸镁 14mmol/L NADP 2.7mmol/L N-乙酰半胱氨酸 27mmol/L AMP 7mmol/L 试剂2（R2）： 磷酸肌酸 160mmol/L 6-磷酸葡

3、萄糖脱氢酶20KU/L ADP 11mmol/L 己糖激酶 20KU/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。4.1.3 试剂稳定性与贮存：28避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。试剂1 与试剂2 启用后，在210避光的条件下可稳定20天。4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的CK校准品对自动分析仪进行校准。4.3 质控品：使用正常值、病

4、理值复合控制品。5 仪器 AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生

5、化分析仪操作规程。7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。8 计算方法 以CK复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。9 参考值范围：（U/L）成人：女性 26140 U/L男性 38174 U/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。我室参考值:0-160 u/L10 临床意义 肌酸激酶（CK）主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M）和存在于脑中的同工酶（CK-B）组成。在血清中CK形

6、式为CK-MM，CK-MB，CK-BB和巨酶等的二聚物。在心肌损伤或骨骼肌疾病时可以观测到CK活力的升高。CK和CK-MB一起检测有助于心肌梗死的诊断和监视。11 操作性能11.1试剂空白：a)试剂空白吸光度应不大于0.500；b)试剂空白吸光度变化率(A/min)应不大于0.001。11.2分析灵敏度：20U/L样本的吸光度变化率（A/min）应不小于0.003。11.3线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖201000U/L。a) 线性相关系数（r）应不小于0.990；b) 30U/L范围内的线性偏差应不超过8.0U/L，30U/L范围内的线性偏差应不超过10%。11.4准确度：相对偏差（B）

7、应不大于10%。11.5精密度：（1）重复性：变异系数（CV）应不大于5%；（2）批间差：相对极差（R）应不大于10%。11.6稳定性：试剂（盒）在28贮存至12 个月末，试剂性能应符合试剂空白、分析灵敏度、线性范围、精密度（重复性）和准确度的要求。12 超出范围结果处理 本法线性上限血清/血浆为1000U/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%的氯化钠溶液作1:4稀释，重新测定，结果乘以5。13 病危报警值的处理 当血清CK测定值1000U/L,在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。14 方法局限性14.1测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的

8、控制。14.2样本中甘油三酯浓度1500mg/dL、胆红素浓度20 mg/dL、血红蛋白浓度50mg/dL时，对测定无干扰。14.3试剂（盒）启用后，在210避光的条件下可稳定20天。若试剂混浊，或以水为空白在波长340nm 处的吸光度值大于0.500，则不能使用。15 补救措施 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。16 参考文献 16.1叶应妩，王毓山，申子瑜主编全国临床检验操作规程中华人民共和国卫生部医政司编(第四版)16.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版16.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版16.4试剂说明书。