高效液相色谱法同时测定食品中19种防腐杀菌剂_1姜玲玲.doc

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1、 分析检测 高效液相色谱法同时测定食品中 19 种防腐杀菌剂 姜玲玲，金雁，李晓东，张侃，张欣媛沈阳出入境检验检疫局（沈阳 110016）摘要建立了固相萃取柱净化 -高效液相色谱二极管阵列检测器 , 测定食品中 19 种防腐保鲜剂的方法。样品经甲醇提取 , 通过 C 固相萃取柱净化 , 以 C 反相色谱柱为分离柱 , 0.02 moL/L 乙酸铵和甲醇为流动相 , 梯度洗脱程序进行高效 1818r 液相色谱分离和检测。方法的相对标准偏差为 6.34%15.7%, 回收率为 57.07%83.15%, 其相关系数 0.990 3, 具有较高的准确度和精密度。该方法简单、快速 , 适用于食品中防腐

2、杀菌剂的检测。关键词固相萃取 ; 高效液相色谱 ; 防腐剂 ; 杀菌剂 ; 食品 Simultaneous Determination of 19 Preservatives and Bactericides in Food by Using High Performance Liquid ChromatographyJiang Ling-ling, Jin Yan, Li Xiao-dong, Zhang Kan, Zhang Xin-YuanShenyang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau (Shenyang 110016) A me

3、thod was developed for the determination 19 preservatives and bactericides in food by using high performance Abstract liquid chromatography with photodiode array detector (PDAD) after solid phase extraction. Ground cereal samples were column. The analysis was performed extracted with methanol, and t

4、he extract was puri ed using solid phase extraction with a C18 column using a gradient elution with the mobile phases of 0.02 mol/L ammonium acetate buffer and methanol was on a C18 used for assay by reversed phase HPLC. The relative standard deviations (RSD) was 6.34%15.7%, and recoveries was 57.07

5、%83.15%, with all the correlation coef cients r 0.990 3. The method was precise and accurate. The method was rapid, easy, and can be applied for the determination of preservatives and bactericides in food.solid phase extraction; high performance liquid chromatograghy; preservatives; bactericides; fo

6、odKeywords 食品防腐保鲜 是食品加工储藏的必备环节，但因此，建立了食品中苯菌灵、山梨酸、水杨酸、在这过程中好多不良商家过量添加食品添加剂，甚挥发酚、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、间甲酚、对至使用非食用物质对食品进行防腐保鲜，这对人体羟基苯甲酸乙酯、噻菌灵、对羟基苯甲酸丙酯、纳他健康造成了巨大伤害，由此引发的食品安全事件层霉素、邻苯基苯酚、对苯基苯酚、对羟基苯甲酸丁出不穷。因此，研究建立食品防腐、杀菌剂检测方酯、对氯间二苯酚、双氯酚、联苯醚、三氯羟基二法也是目前行业的热点。目前，食品中苯菌灵、山苯醚、联苯等 19 种防腐、杀菌剂的检测方法。 结果表 1-4梨酸等防腐、杀菌剂的检测方法已有

7、国标和文明，该方法简单、快速、准确，可用于食品的安全监 5-8献报道，但这些检测方法大多都是单一方法，能管和质量检测。够同时测定食品中多组分的方法较少。而且目前少 1 材料与方法见食品中苯氧乙醇、对氯间二本酚、三氯羟基二苯醚、联苯醚、水杨酸、挥发酚、间甲酚、对苯基苯 1.1 仪器与试剂酚和双氯酚的检测方法。 Agilent HP1200 高效液相色谱仪（配有 PDAD 二极 4 卢燕 , 许群 , 陈静 , 等 . 高效液相色谱多阀多柱技术同时中的维生素 J. 中国乳品工业 , 2013, 41(10): 40-42. 分析水溶性和脂溶性维生素 J. 环境化学 , 2012, 31(9): 7

8、 赵海燕 , 赵榕 , 杨永红 , 等 . 冷皂化 -HPLC 测定强化食品 1442-1447. 中的维生素 A、 E 的方法研究 J. 中国食品卫生杂志 , 2010, 5 中华人民共和国卫生部 . GB 5413.92010 婴幼儿食品和 22(4): 344-347. 乳品中维生素 A、 D 和 E 的测定S. 北京 : 中国标准出版社 , 8 王玉堂 , 池涛 , 胡涛 , 等 . 婴儿配方粉中维生素 A、 D和 E2010. 测定的关键影响因素研究 J. 中国食品学报 , 2013, 13(12): 6 李颂群 , 陈胜楠 , 李征 . 冷皂化 -HPLC 法测定乳及乳制品 232

9、-236. 2014 3512 年第卷第 期食品工业 261 分析检测 管阵列检测器）：美国安捷伦科技有限公司； Z323K 取方式。结果表明，综合 19 种待测物的整体考虑，高速冷冻离心机：德国 HermLe 公司产品； Milli-Q 超超声提 取的效果最佳，样品回收率较高且省时省纯水仪：美国Millipore 公司。力。因此，选择超声提取作为提取方式，结果见苯菌灵、山梨酸、水杨酸、挥发酚、苯氧乙醇、图 1。 对羟基苯甲酸甲酯、间甲酚、对羟基苯甲酸乙酯、噻 菌灵、对羟基苯甲酸丙酯、纳他霉素、邻苯基苯酚、对苯基苯酚、对羟基苯甲酸丁酯、对氯间二苯酚、双氯酚、联苯醚、三氯羟基二苯醚、联苯，分别购

10、置天津环保所和美国迪马公司，纯度均大于 95.0%；甲醇、乙腈，色谱纯；乙酸铵，分析纯； C 固相萃取柱 18（ 500 mg， 3 m）：迪马公司。 1.2 色谱条件图 1 不同提取方式的比较 色谱柱， Agilent TC-C（ 4.6 mm250 mm，5 18m）；柱温， 30 ；流速， 1.0 mL/min；进样量， 2.2 流动相的选择文献报道，防腐剂测定时常用的流动相有甲醇 -10 L；波长， 280 nm；流动相： A 为甲醇， B为 0.02 5678水 -乙腈 mol/L 乙酸铵溶液， pH 6.5。梯度洗脱条件见表 1。、甲醇 -水、甲醇 -乙酸铵、乙腈 -乙酸铵等。试验

11、在相同的色谱条件下，分别采用乙腈 -乙酸表 1 梯度洗脱条件铵、甲醇 -水、甲醇 -乙酸铵、甲醇 -磷酸二氢钠进行 -1 时间 /min 流速 /mL minA/%B/%了对比。结果表明，甲醇和 0.02 mol/L 乙酸铵作为流 0120.080.0 动相进行梯度洗脱时，由于醋酸铵缓冲液与有机溶剂 20145.055.0 兼容性较好，使得极性大的化合物得到良好分离，极30170.030.0 性小的化合物也得到了适当保留，同时缩短了分析周 40185.015.0期，且峰形良好，见图 2。 47185.015.065120.080.0 1.3 样品前处理 1.3.1 含脂肪的样品（如牛 奶、糕点

12、等） 1.3.1.1 提取称取 5.0 g 粉碎混匀后匀浆样品（精确至 0.1 g），置于 50 mL 聚丙烯离心管中，加入 10 mL 甲醇，超声提取 5 min，用稀氨水或盐酸调节 pH 至 7（同上）左右，准确加入 1 mL 乙腈，于 5 000 r/min 离心 15 min（乳制品可适当延长时间），取上清液待净化。 1.3.1.2 净化图 2 19 种待测物混合标准溶液的液相色谱图 取 3 mL 上清液转入预先平衡活化的 C 固相萃取 18 小柱上，用 5 mL 乙腈 -甲醇（体积比为 2 1）溶液洗 2.3 线性关系、定 量限、回收率和精密度脱，收集洗脱液，于 40 下氮气吹至近干

13、，用甲醇溶配制 5 个不同质量浓度的混合标准溶液，质量浓解后经 0.45 m 滤膜过滤后上机分析。度为 1， 10， 30， 60 和 100 g/mL，在最佳色谱条件下，以标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标，标准溶 1.3.2 不含脂肪的样品（如果汁、酒及碳酸饮料等）称取 5.0 g 试样（精确至 0.1 g），置于 50 mL 聚丙液中被测组分浓度为横坐标绘制标准工作曲线。当信烯离心管中，加甲醇 10 mL（含酒精和 CO 的样品需在噪比（ S/N） 10 时，作为仪器的定量限 。各组分的 2 超声波上脱气驱赶酒精及 CO），超声提取 5 min，用线性方程、相关系数及定量限见表2，结果表明

14、，在 2 稀氨水或盐酸调节溶液的 pH 至 7 左右，用甲醇定容至 1100 g/mL范围内线性关系良好。 25 mL，用 0.45 m滤膜过滤后进样分析。在空白样品中，分别添加混合标准溶液，制成 3 个添加水平的模拟加标样品，其中添加浓度均为 2.0， 2 结果与分析 5.0 和 10.0 g/g，充分混均后，按上述试验条件进行样品前处理和测定，每个添加水平测定 6 次，各组分的 2.1 提取方法的优化对比了超声提取、 振荡提取、涡混三种不同提平均回收率和相对标准偏差见表 2。 2014 3512 年第卷第 期食品工业 基金项目：国家质检总局科技计划项目（ 2011IK215， 2014IK

15、129）； 262 “十二五 ”国家科技支撑计划项目（ 2011BAK10B04-9） 分析检测 表 2 线性回归方程、相关系数、定量限、平均回收率和精密度 -1rR 待测组分线性方程相关系数 ()定量限/mg kg 平均回收率 ()/%相对标准偏差（ RSD） /% yx 苯菌灵=20.067-655.570.995 20.572.1215.7yx 山 梨 酸=41.411+0.1480.993 60.2579.709.41yx 水杨酸 =27.607-2.570.991 20.2567.8014.2x 挥 发 酚 y=5.506-5.5650.990 40.566.098.90yx 苯氧乙

16、醇 =6.550+0.9980.991 21.668.906.34yx对羟基苯甲酸甲酯 =10.702+0.8080.993 40.2569.237.29yx 间甲酚 =12.746+1.8080.996 40.872.319.75yx 羟基苯甲酸乙酯=15.689+0.6810.990 40.2574.1512.3yx 噻菌灵=46.927+5.1990.991 32.273.9013.5yx 对羟基苯甲酸丙酯=14.965+1.2750.990 90.2581.6110.7yx 纳 他 霉 素=3.214+0.3430.990 30.1572.2614.5yx 邻 苯 基 苯 酚=6.18

17、8+0.9770.991 80.575.506.93yx 对苯基苯酚 =4.420-1.2990.992 90.273.779.98yx 对羟基苯甲酸丁酯 =14.250-0.4430.993 40.580.807.26yx 对氯间二甲酚 =5.317+1.7680.991 90.569.039.18yx 双氯酚 =10.702+0.8080.992 10.1583.1510.7yx联苯醚 =5.317+1.7510.992 90.1570.088.90yx 三氯羟基二苯醚=9.266+6.2130.992 40.7657.079.45yx 联苯 =3.661+2.1480.991 31.56

18、3.248.95 2.4 实际样品的测定山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法 S. 北京 : 中国标在市场上采购了果汁、酸奶、面包类等 6 批次样准出版社 , 2009.品，应用试验所建立的方法对其进行分析测定。测 2 国家认证认可监督管理委员会 . SN/T 01622011 出口水定结果见表 3，其中仅列出检出的 9 种防腐杀菌剂的结果中甲基硫菌灵、硫菌灵、多菌灵、苯菌灵、噻菌灵残果，其余 10 种均未检出。从中可以看出果汁中所含防留量的检测方法 高效液相色谱法 S. 北京 : 中国标准出版腐杀菌剂较多，可能是由于在果蔬种植中所喷洒的农社 , 2011.药残留所造成，山梨酸作为常用的食品防腐

19、剂，在大 3 中华人民共和国卫生部 , 中国国家标准化管理委员会 . 多数食品中都有添加。 GB/T 5009.312003 食品中对羟基苯甲酸酯类的测定 S. 表 3 食品中防腐剂、杀菌剂的测定结果北京 : 中国标准出版社 , 2004. 待测组分苹果汁橙汁香蕉奶昔火腿面包糕点 4 中华人民共和国国家进出口商品检验局 . SN 06591997 山梨酸 1.020.890.551.352.412.91 出口蔬菜中邻苯基苯酚残留量检验方法液相色谱法 S. 对羟基苯甲酸甲酯 5.101.510.25NDNDND 羟 基 苯 甲 酸 乙 酯ND0.590.25NDNDND 北京 : 中国标准出版社

20、 , 1998.噻菌灵2.524.113.21NDNDND5 白娟娟 , 艾尔肯 依不拉音 , 麦麦提 艾合麦提 . 固相萃对羟基苯甲酸丙酯 8.96ND0.25NDNDND取逐步分离果实保鲜防腐剂噻本咪唑、邻苯基苯酚残留纳他霉素 NDNDND2.151.512.05 检测的研究 J. 新疆医科大学学报 , 2012, 35(5): 594-598. 邻 苯 基 苯 酚3.121.512.14NDNDND6 杨涛 , 靳智 , 李明 , 等 . 高效液相色谱法同时测定果蔬中 5 对羟基苯甲酸丁酯 ND0.991.5NDNDND种防腐杀菌剂 J. 食品与发酵工业 , 2008, 34(6): 1

21、32-134.联苯NDND4.5NDNDND 7 康绍英 , 张继红 , 沈汇琴 , 等 . 二极管阵列 -高效液相色谱 3 结论同时检测食品中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸 J. 食品与机械 , 2007, 10(5): 118-121.建立的高效液相色谱法一次性检测 19 种防腐、杀 8 罗海英 , 杨毅兰 , 李荔 , 等 . 中草药凉茶中苯甲酸、山梨菌剂的方 法，具有较高的灵敏度和较为理想的精密 9度，该方法满足防腐剂残留分析要求，并填补了食 酸、对羟基苯甲酸酯类同时测定的方法研究 J. 广东化品中杀菌剂的检测空白，对提高检测效率，缩短检测工 , 2011, 32(11): 214-218.时间，加快通关速度具有重要意义。 9 中华人民共和国卫生部 , 中国国家标准化管理委员会 . GB 参考文献： 27602007 食品添加剂使用卫生标准 S. 北京 : 中国标准 1 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 , 中国国家出版社 , 2008.标准化管理委员会 . GB/T 234952009 食品中苯甲酸、 2014 3512 年第卷第 期食品工业 263