转基因治疗在创面愈合中的进展.pdf

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4、科(广东汕头515041)创面愈合是一个十分复杂的涉及到分子生物和细胞生物学的过程，牵涉到细胞运动、黏附、通讯、增殖和分化等细胞生物学的各个方面，以及细胞因子和细胞外基质之间错综复杂的网络作用与关系。创面异常愈合的结果是导致增生性瘢痕或瘢痕疙瘩。如何既能主动促进创面愈合又能防止病理性瘢痕，是现今很多人正在探索的问题。局部应用生长因子虽可促进创面愈合，但是由于创面上存在蛋白酶使其降解加速和缺乏足够的的受体，已经被证实具有较少的临床应用价值和低效率J。随着基因技术的发展，转基因治疗已成为干扰创面愈合病理过程的最有发展前景之一的技术。l转基因治疗创面创面的转基因治疗是将待转染的细胞从机体中分离出来，

5、在体外培养，扩大细胞数，然后再运用多种转基因方法将目的基因导入细胞，经筛选，将载有目的基因的细胞回输入机体创面，从而在创面上持续分泌该种生长因子，促进创面愈合；或者是将对组织愈合有益的目的基因直接导入参与修复的细胞中，使其高效表达一定的时间，在局部释放适量的特异性治疗性蛋白质，促进创面愈合。主要包括：目的基因的选择、目的基因的导入、基因表达如何调节等方面。2目的基因选择早期的目的基因主要有如类固醇硫酸酯酶、B一半乳糖苷酶、腺苷脱氨酶等，但是由于促进创面愈合的效果不佳，逐渐被淘汰，现在目的基因的选择集中在各种生长因子(EGF，TGFB，PDGF，IGF，HGF，VEGF等)、一氧化氮合酶(NOS

6、)、表皮干细胞、纤维连接蛋白启动子、整合素等，但其中应用最多、意义最大、最常用的还是生长因子，它是一系列具有多种功能的活性肽类物质，由组织或血液产生并释放。通过自分泌或旁分泌形式作用于特定的靶细胞。生长因子的作用：编码生长因子的质粒DNA导入细胞并覆盖创面后，该细胞能持续分泌该生长因子，生长因子分泌后与细胞表面的受体结合后导致受体构象的变化和一些蛋白激酶的激活，将信号传导至细胞核，对细胞的生长进行+广东省科技计划项目(编号：2003C3271 1)调控，不同的生长因子具有不同的信号传导途径。它们是促细胞分裂剂，对细胞具有趋化作用，调节细胞阎的相互作用，影响细胞外基质的合成和组分，血管生成的有力

7、刺激剂弘J。KESWANI等H1在其实验中发现：腺病毒介导的血小板源性生子因子B(PDGFB)能明显促进创面愈合和新生血管形成，这可能是由于PDGFB促进内皮前体细胞大量增加形成的。NAKANISHI等1用脂质体(外涂副流感病毒1型)介导人类肝细胞生子因子(HGF)转移到大鼠皮肤创面上，发现：创面组织上人HGF的mRNA和蛋白的量是增加的，并且相对于对照组，上皮再生快速，细胞增殖加强，新生血管形成加强。3 目的基因导入(基因转移技术)目的基因导入细胞，要么通过裸DNA要么通过载体(病毒和非病毒)来实现。裸DNA通常以质粒形式投递的。该质粒携带的生长因子存在于胶原海绵中。相对于载体投递系统(特别

8、是病毒载体)，裸DNA是较经济和安全的J。病毒栽体包括：腺病毒、逆转录病毒、单纯疱疹病毒和腺伴随病毒等载体；非病毒载体是物理和化学方法，主要有微种、粒子介导的基因转移(基因枪技术)、阳离子脂质体等技术。一般来说，病毒载体比非病毒载体有更高的基因转移效率，然而，细胞毒性、免疫原性和遗传突变是其主要伴随的缺点，这可能限制病毒载体在创面基因治疗的应用拍J。非病毒载体优点：对基因大小不限制、制备容易、重复性好、免疫原性和细胞毒性小。缺点：可能引出非特异性炎症反应；不稳定：对DNA聚集的易感性；最重要的缺点是可变的、短暂而低的转移效率和基因表达。不过，它们的基因转移效率能够通过新的技术来提高。因此，可以

9、预见非病毒载体将逐渐成为皮肤基因转移首选的工具。但是，现在病毒栽体仍是占优的。31病毒载体除了常用的病毒载体外，最近慢病毒栽体应用于创面报道较多。慢病毒载体，属于逆转录病毒的亚型，主要的优点是能转导和整合进入未分裂细胞；主要的缺点是有可能逆转为野生型病毒【7】。LEE等哺1用慢病毒载体介导的PDGF转染糖尿病小鼠创面能明显提高PDGF产物，改善血管化作用和胶原组织。MAN等p 5将携带PDGFB的慢病毒载体，注射到糖尿病大鼠切除的2 cm2 cm的全厚创万方数据广东医学2007年1月第28卷第1期面上，发现在第21天相对于未治疗组，能明显增加创面愈合；免疫组化显示能显著增加新生血管形成；有机胶

10、原纤维的量也是明显增加。虽然慢病毒属介导的载体还没有被准许用于临床实验，但是它们已经证明是有希望的，仍然在研究中。32非病毒载体发展较快，不仅旧的投递系统有所完善，而且出现了新的投递系统。基因枪技术、阳离子脂质体技术在皮肤创面愈合中应用的较多，DILEO等叫报道了一种新设计的基因枪，这种枪使用氦作为推动力，可以使DNA投放到更深的组织里。他们用这种新的基因枪投递荧光素酶表达质粒到皮下组织，发现基因表达比传统的基因枪要高；即使使用125 ng小的DNA，在轰击后24 h基因表达就能达到高峰，并且可以持续至少1周。关于脂质体：JESCHKE等lJ认为：不同化学和分子结构的脂质体，对细胞内有不同的影

11、响和生物反应。对急性创面来说，DOTAPChloe脂质体显得更好。MEILANDERLIN等u引为了持续释放蛋白，使用了新的，以琼脂糖(一种生物相溶的来源于红藻的水凝胶)为基础的投递系统，将质粒DNA溶与琼脂糖中，通过皮内注射的方式实现。发现在37能持续释放功能性DNA超过50 d。4基因表达的调节成功的基因治疗完成不仅依靠有效地把治疗基因转染到靶细胞，还需控制维持基因表达的水平。现存的应用于皮肤的非病毒基因投递方法24 h内可以出现高峰，但是7 d内表达水平就会下降，这种表达时间对组织修复是不够的“。而高水平的基因表达又必须控制在一定时期内，限制其过量表达的毒性作用。理想的调节系统是：当外源

12、性化学物质(配位体)投放时，调节基因能被激活，而配位体移除时，激活能结束。配位体应是无毒性的。基因开关不能被内源性细胞因子激活。早期的基因表迭诱导系统是依靠内源性成分对外源性的信号或应激来实现的，这些诱导系统主要的问题是较低的特异性，因此调节效果不是很理想。然而通过使用非哺乳动物或变异的内源性控制成分，就能达到较高的特异性。到目前为止，主要有以下几个诱导系统：四环素诱导系统、雷怕霉素诱导系统、蜕皮激素诱导系统和RU486米非司酮诱导系统。它们共同的特征是，每个系统都依赖一些调节转录因子活性的小分子的存在，小分子的转录激活活性能被药理学分子调控。四环素诱导系统：其基因控制开关是基于四环素控制的反

13、式作用因子(tTA)，它是通过将抗四环素操纵子抑制物融合于单纯疱疹病毒蛋白16(VPl6)中的转录激活区域而构建形成的。tTA能结合一系列位于极微量启动子上游区域的四环素操纵基因序列。当四环素缺乏时，能刺激转录；当四环素存在时，此启动子还原为很低的水平。蜕皮激素诱导系统：其基因控制开关是基于一个异源二聚体，它由一个改良的蜕皮激素受体(VgEcR)和视黄醇类x受体(RXR)组成。当暴露在蜕皮激素或类似物时，此异源二聚体能有效的诱导目的基因表达。但是，当单独使用其中的RXR受体的配位体时，该配住体不能激活蜕皮激素开关。RU486米非司酮诱导系统：其基因控制开关是一个人类孕酮受体突变体(hPRB89

14、1)，其C末端缺失42个氨基酸，该hPRB891不能和孕酮结合，但是能结合RU486(米非司酮)和其他孕酮对抗物质。在米非司酮存在时，该受体能刺激那些含有对孕酮敏感成分的目的基因转录。雷怕霉素诱导系统：其调节系统有三个基本组分：a155融合了NFkBp65蛋白羧基末端转录激活区域的hFRB(hFRAP的雷怕霉素结合区域)；b融合了ZFHDl(嵌合体DNA结合区域)的hFKBP，它能结合雷怕霉素；C目的基因。通过hFRB和hFKBP的特性，雷怕霉素就能调节转录因子活性141“。在以上的几个调节系统中，四环素诱导系统优势是明显的：它能调节各种类型的细胞基因表达；目的基因表达水平能被四环素的浓度控制

15、。但是这个系统也有缺点，那就是较难获得稳定表达tTA的细胞系或者转基因动物，这可能是由于VPl6蛋白的毒性造成的。因此AKAQI等151提出了用一种更好的代替tTA的反式作用因子一一E2F4。它是一种转录因子，控制着基因表达，在哺乳动物组织中广泛表达并且对细胞无毒性。构建这种新的反式作用因子，需要将E2F4转录激活区域融合到四环素抑制物中。5 结语目前基因治疗治疗创面大部分还是局限在动物实验阶段，考虑到还存在缺陷，较少应用于临床。安全性是首先要考虑的，虽然现在非病毒载体技术的应用已经避免了病毒性载体引起的细胞毒性等缺点，但是其本身可以造成局部的炎症反应等副作用。而且它们的转移效率需要提高；另外

16、，外源性基因在创面基因表达调节上，虽然有几种基因调节系统，但是在时间和水平上还无法完全达到精确调控。经济实用性也是创面基因治疗需要解决的问题。体外分离、培养细胞，然后将目的基因导入，再回执到创面上，需要化很长的时间。如果细胞培养过程缓慢，必将影响治疗创面效果。目前创面的基因治疗倾向于多种生长因子的综合基因治疗，它比单一生子因子更有效；并且调节创面的微环境，以便最大地发挥它们的生物学效应。尽管目前利用基因治疗创面还有很多限制，但随着科学和医学的发展，作为治疗创面最有潜力的技术，一定能取得可喜的成果，其限制最终会被解决。到那时候基因治疗的有效性和安全性会有极大的提高，真正用于临床，解决患者的痛苦。

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26、control of a humanized gene therapy system implanted intonude miceJJ Clint Invest，1997，100(11)：2 865-2 872(收稿日期：20060815编辑：张素文)前列腺及固定结构解剖学研究进展欧陕兴姚华强综述黄其鎏审校广州军区广州总医院放射科(广州510010)前列腺是男性泌尿生殖系统的重要组成部分，有近段尿道穿越其中，尿道后壁有射精管的开口，它属性器官，其解剖特性随着年龄的不同而有所变化，并受激素变化的影响，参与产生精液，在遗精和射精时贮存精液u J。前列腺疾病在泌尿外科工作中占有重要的位置，前列腺的

27、解剖学研究对其某些疾病的发生、发展和手术治疗有重要的临床意义。以下就前列腺及其固定结构的研究进展作一综述。1前列腺的形态和位置口1前列腺是部分为腺体、部分为纤维肌性组织的坚实结构。前列腺形似栗子，底朝上，尖朝下，底部宽大，尖部细小。其横径约为4 cm，前后径约为2 cm，纵径约为3 cm。前列腺后面，横向较平，垂直面较凸。前列腺的后面近上缘处有一压迹。两个射精管从此处穿过。后面的下部有一个浅的正中沟。前列腺的前面从前列腺尖延伸到前列腺底，横向窄而凸。前列腺位于小骨盆下部，耻骨联合下缘和耻骨弓的后方，直肠壶腹的前方，围绕在男性尿道的前列腺部。前列腺的底大部分与其上方的膀胱颈相接触。前列腺尖细小，

28、位于尿生殖膈上筋膜的上面。前列腺的下外侧面与肛提肌的前部相邻，借前列腺纤维鞘内的静脉丛将它们分开。前列腺被尿道和射精管穿过并开口于前列腺小囊。尿遭经常通过前列腺的前13和中13之间，射精管向前下经过前列腺的后部。目前研究表明，前列腺是以射精管为中心而不是以尿道为中心的器官。2前列腺的分部、分叶和分带目前用不同的名词对前列腺进行不同的描述。在教学和诠释前列腺上很困难。这些不同的描述来源于不同时期前列腺的研究，如胚胎期、青春前期、正常和异常的成人前列腺，及来源于胚胎学、组织学、病理学、解剖学和泌尿学的专家、学者。不同学者将前列腺分成不同的叶和带，其特征是不同的叶和带有着共同的开口进入尿道【l J。

29、现行对成人前列腺的解剖分部是基于两个主要研究结果，Gil Vernet和McNeal分别发表于1953年和1968年日J。21前列腺的分部 前列腺可分为底、体、尖三部分口】，底在上、尖在下，底与尖之间为前列腺的体部。这是比较古老而实用的划分前列腺的方法，便于描述前列腺的形状、位置和比邻关系。22前列腺的分叶 为了更好地描述前列腺，许多的学者对其分叶作了大量的研究，如Albarran，Motz，Chevassa等，Lowsley于1912年将前列腺分为五叶：前叶、中叶、后叶和两个侧叶。有学者赞同这一分叶方法，认为其较为科学】，国内的医学院校教科书一直沿用这一分叶方法【4 J。但学术界对前列腺的这一分叶方法仍存在争议。继Lowsley后Johnson，Mijsberg，Leduc，Gil Vemet，McNeal等也作了大量的研究工作，但始终未能统一分叶的方法J。23前列腺的分带 McNeal在做了大量的前列腺解剖工作后，根据临床上良性前列腺增生、前列腺癌等疾病的发生规律，摒去了将前列腺分叶的方法，将前列腺分为4个腺体区和4个肌纤维部分。腺体区为外周带、中央带、移行带和尿道周围腺体。肌纤维部分为前列腺肌肉基质、前列腺前括约肌、前列腺后括约肌和尿道纵行平滑肌。前列腺前括约例州例蚓|三_蚓万方数据