茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡的影响-王洋.pdf

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1、 农学 硕 士学位 论文 茶多酚对 鼠胎儿成 纤维细胞 凋亡的影 响 EFFECT OF TEA POLYPHENOLS ON THE APOPTOSIS OF MOUSE EMBRYONIC FIBROBLAST 王 洋 动物遗 传育种 与繁殖 延 边 大 学 学校代码：10184 分 类 号： _ 农学 硕 士学位 论文 茶多酚对 鼠胎儿成 纤维细胞 凋亡的影 响 Effect of Tea Polyphenols on the Apoptosis of Mouse Embryonic Fibrolast 王 洋 动物遗 传育种 与繁殖 延 边 大 学 学校代码：10184 分 类 号：

2、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 2 0 1 4 _ 分类号 密级 U D C 学号 2011010591 延边大学 硕士学位 论文 茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡的 影响 研 究 生 姓 名 王 洋 培 养 单 位 延边 大学农 学院 指 导 教 师 姓 名 、 职 称 李钟淑 教授 学 科 专 业 动物遗 传育种 与繁殖 研 究 方 向 动物繁 殖与生 物技术 论 文 提 交 日 期 2014 年 5 月 19 日 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 20

3、14 _ 5 _ 19 _ _ _ 本人郑重声明： 所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。 尽 我 所 知 ， 除 了 文 中 特 别 加 以 标 记 和 致 谢 的 部 分 外 ， 论 文 中 不 包 含 其 他 人 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 研 究 成 果 ， 也 不 包 含 本 人 为 获 得 任 何 教 育 机 构 的 学 位 或 学 历 而 使 用 过 的 材 料 。 与 我 一 同 工 作 的 同 事 对 本 研 究 所 做 的 任 何 贡 献 均 已 在 论 文 中 作 了 明 确 的说 明并表示谢意。 本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后

4、果。 研究生签名： 日期： 年 月 日 _ 本 人 在 导 师 指 导 下 所 完 成 的 学 位 论 文 ， 学 校 有 权 保 存 其 电 子 和 纸 制 文 档 ， 可 以 借 阅 或 上 网 公 布 本 学 位 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 ， 可 以 向 有 关 部 门 或 机 构 送 交 并 授 权 其 保 存 、 借 阅 或 上 网 公 布 本 学 位 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 。 对 于 保 密 论 文 ， 按 保密的有关规定和程序处理。 本学位论文属于： 1. 保密 ，在 年解密后适用于本声明；2. 不保密 。 研究生签名： 导师签名： 日期： 年 月

5、 日 _茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡影响 摘要 I 摘 要 细 胞 凋 亡 （Apoptosis ）是生 物 体 内 自 发 发 生 的 细 胞 生 理 性 的 死 亡 ， 细 胞 正 常 凋 亡对维持生物体正常生长发育和维持细胞内环境稳态的作用， 细胞异常凋亡能够引发 疾病， 如癌症和肿瘤等。 有报道指出在体外培养的细胞中添加抗氧化剂能够抑制细胞 凋亡， 茶多酚（Tea polyphenols,TP）是一种天然抗氧化剂，具有多种生物学功能 ， 抗氧化能力比其他抗氧化剂抗氧化能力强很多倍， 对体外培养细胞主要用于癌细胞 和 肿 瘤 细 胞 的 研究， 且 对 抑制癌 细 胞 和 肿 瘤 细 胞

6、 的 生长 作 用 效 果 显 著 ， 研 究 表 明 ，TP 具有抗癌和抗肿瘤的作用， 但是在体细胞培养液中添加 TP 对体外培养鼠胎儿成纤维 细胞 凋亡效果的影响尚未见报道。 【目的】：本试验主要通过体外培养 MEF 细胞，用不同浓度的 TP 培养液处理细胞， 研究不同浓度的茶多酚 培养液对鼠胎儿成纤维细胞 存活率和细胞形态变化的影响， 并 应用反转录方法检测抗凋亡基因Bcl-2 基因、 促凋亡Bax 基因和促凋亡基因Casase-3 从分子 水平上检测基因表达量的变化， 用来确定天然抗氧化剂 茶多酚对鼠胎儿成纤维 细胞凋亡 效果的影响。 【方法】 ：1.取妊娠 12.5 天昆明白母鼠，热

7、消化法 分离原代细胞进行培养，差速贴 壁法纯化细胞， 传至第3 代，绘制细胞生长曲线，检测细胞活力 。 2. 用 含有不同 浓 度 的 茶多 酚 培 养 液培 养 细 胞 ，分 别 培 养 24h 、36h 、72h 、96h ，倒置 显微镜观察细胞形态， 用MTT 法进行细胞 存活率的检测， 比较 添加不同浓度茶多酚 培 养液 对细胞存活率的影响。 3.用不同浓度的茶多酚 培养液处理细胞， 培养72h， 分别提取细胞总 RNA， 进行RT-PCR 反应， 反转录合成目的基因Bax 基因、Bcl-2 基因和 Caspase-3 基因， 琼脂糖凝胶电 泳对反应产物 进行检测，使用软件进行条带灰度

8、值的检测，比较基因的相对表达量 。 【结论】： 通过细胞生长曲线确定了 3 代细胞适合试验用， 不同浓度的茶多酚 培养 液 处 理 细 胞 后 对 鼠 胎 儿 成 纤 维 细 胞 生 存 率 和 形 态 的影响为： 当 茶 多 酚 浓度低于 100 mg/L 时，MTT 结果为 72h 时，对细胞促进作用最明显，96h 时，细胞生存率低于 72h 时， 可能是细胞正常生长的结果。 对鼠胎儿成纤维细胞的生长具有促进作用， 并且细 胞形态没有发生明显的变化，通过实验结果，当浓度为 40 mg/mL 时促进作用略微 明 显， 高于细胞对照组， 但是没有显著差异， 当细胞浓度高于 100 mg/mL

9、时对细胞生长 具有抑制作用， 从形态学观察出 细胞出现调亡现象。 通过反转录结果表明 在Bax 基因、 Bcl-2 基因和 Caspase-3 基因的分子途径上没有什么影响,因此，TP 各个浓度处理组 中基因相对表达量 没有显著性差异。证明了适宜浓度 TP 对 MEF 细胞生长具有正向的 保护作用 但是在凋亡基因 bcl-2、bax 和 caspase-3 表达途径上无影响，其他机理还 有待进一步研究。 关键字：细胞凋亡；茶多酚；鼠胎儿成纤维细胞；反转录 _茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡影响 Abstract I Abstract Cell apoptosis (Apoptosis) is th

10、e spontaneous occur cell physiological death in organism, normal cell apoptosis play an important role to maintain the normal growth and the maintenance of internal environment homeostasis within cells, Abnormal apoptosis can cause disease,such as cancer and tumor. There are a lot of studies have re

11、ported that add antioxidants in vitro cultured cells can inhibit cells apoptosis,Tea polyphenols (Tea polyphenols, TP) is a natural antioxidant,It has many biological functions, its antioxidant capacity is stronger than other antioxidant ability many times,its mainly used on cancer cells and tumor c

12、ells researches about cells culture In vitro, And the growth effect of inhibiting on cancer cells and tumor cells is significantly,Researches shows that, TP has the ability of anticancer and antitumor , But the report about the effect of tea polyphenol on the apoptosis of mouse embryonic fibroblast

13、has not been reported. Purpose By adding different concentrations natural antioxidant tea polyphenols to the culture fluid of mouse embryonic cells,study on effect of different concentrations TP on mouse embryonic cells survival rate and the changes of cell morphological,using reverse transcription

14、polymerase chain reaction(RT-PCR)test the changes of Gene expression quantity of anti-apoptotic genes Bcl-2,apoptosis-promoting gene Bax and anti-apoptotic genes caspase-3.With this method to make sure if the nature antioxidant tea polyphenols can regulate and control at the molecular level the mous

15、e embryonic cells apoptosis. Methods 1.Use the 12.5 days pregnancy female mouse,to make the mouse embryonic cells,use the hot digestion method for primary culture,differential adhesion purified cells,after passage to 3th generation,draw cell growth curve,to detect the cell vitality. _茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡影

16、响 Abstract II 2.The third cells treated with different concentrations of tea polyphenols,cultivation of 24, 36, 72, 96 h,use the Inverted microscope observe the cell morphology , use MTT methods to test the vitality of the cells,compare the effects of different concentrations of tea polyphenols on t

17、he survival rate of the cells. 3.Add different concentrations of tea polyphenols to the culture fluid of mouse embryonic cells,after 72 hours,extract total RNA from cells,amplified by a reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR) for Synthesising the aim gene bax,bcl-2,caspase-3,The ampl

18、ification product test with agarose gel electrophoresis. Using the software analysis the relative expression of genes,compared relativeexpression gene. Results Though the cell growth curve test determine the 3 generation cells is suitable for the test, Effect of different concentrations of tea polyp

19、henols on the mouse embryonic cells:when the concentration is inferior to 100 g/mL,Tea polyphenols on mouse embryonic cells growth has a promoting effect,at 72h, the promote function is most obvious. At 96ht he cell survival rate is less than 72h,May be the result of normal cell growth.though the re

20、sult at the concentration of 40 mg/mL the promotes effect is the most obvious.And the cell morphology no obvious changes,when the concentration above prep 100mg/L,Tea polyphenols on mouse embryonic cells growth has a inhibition effect,the cells bacome apoptosis.Through reverse transcription results

21、showed that it is no effect in molecularapproach of Bax gene, Bcl-2 gene and Caspase-3 gene . Therefore, the relative gene expression was not significant difference in adding different TP concentration treatment group.Prove that the suitable concentration of TP is good to on the growth of MEF cells.

22、 it has a protective effect. But in apoptosis gene Bcl-2, Bax and Caspase-3 expression had no effect,Others mechanism oabout TP remains to be further studied. Key words: Cell apoptosis; Tea polyphenols; Mouse embryonic cells; Reverse transcription _茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡影响 目录 目 录 摘 要 . I Abstract . I 第 一章 前

23、 言 . 1 1.1 细胞凋亡 . 1 1.2 细胞凋亡的分 子途径 . 2 1.3 胚胎干细胞及 其应用 . 4 1.4 TP 来源及应用 . 6 1.5 本实验研究目 的及意义 . 7 第 二章 材 料与方法 . 9 2.1 试验材料 . 9 2.2 试验方法 . 11 2.2 试验方法 . 14 2.3 试验方案 . 18 2.4 数据处理 . 19 第 三章 结 果与分析 . 20 3.1MEF 细胞生长曲 线 . 20 3.2 细胞生长形态 观察 . 21 3.3 不同浓度的TP 对鼠胎 儿成纤维 细胞生存 率的影响 . 22 3.4 不同浓度TP 对细胞形 态影响 . 23 3.5

24、 不同浓度TP 对Bax、Bcl-2 、Caspase-3 基因表达 量的影响 . 25 第 四章 讨 论 . 28 4.1 鼠胎儿成纤维 细胞最适 培养条件 研究 . 28 4.2 TP 对 鼠 胎 儿 成 纤 维 细 胞 生 存 率 的 影 响 . 28 4.3 TP 对 MEF 细 胞 形 态 的 影 响 . 29 4.4 TP 对基因表达 量的影响 . 30 4.5 展 望 . 31 第 五章 结 论 . 32 致 谢 . 33 参 考文献 . 34 附录 A. 主要 缩略词表 . 40 _茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡影响 前言 1 第一章 前 言 细胞程序性死亡是真核细胞自然死亡的方

25、式，近年来对细胞凋亡的研究广 泛，但是 至今 一 些 地方 还 未 研究 清 楚 。 有报 道 指出 ， 控 制细 胞 凋 亡有 望 实 现 细胞 的永 生 化 和抑 制 癌 细胞 和 肿 瘤细 胞 的 无限 增 殖 ，从 而 抑 制衰 老 和 治疗 某 些疾 病。 对于 细 胞 凋亡 的 研 究主 要 集 中在 研 究 控制 细 胞 死亡 和 促 进细 胞 生 存率 方 面， 主要 通过 外 部 观察 、DNA 检测、 线 粒体 膜 电 位和 凋 亡 相关 基 因 的检 测 等 方法 对 凋亡 进 行检 测 ， 主要 通 过 在体 外 培 养的 细 胞 液中 添 加 抗氧 化 剂 和其 他

26、成 分， 基 因敲 除某 些基 因 或 增加 某 些 基因 的 表 达来 实 现 对细 胞 凋 亡调 控 机 制的 研 究 ， 且 研究 进 展显 著。 本试 验 通过 在 体 外培 养的 MEF 细胞 培养 液 中 添加 天 然 抗氧 化 剂 茶多 酚， 研究 茶多 酚 对 细胞 存 活 率的 影 响 和对 分 子 机制 进 一 步探 讨 ， 以确 定 TP 对 MEF 细胞凋 亡效 果 的 影响 。 1.1 细胞凋亡 细胞 凋亡 又 称 为细 胞 编 程死 亡(programmed cell death ， PCD) 。 是 各种 环 境刺 激的 细胞 凋 亡 ， 受生 理 或病 理 的

27、诱导 或 抑 制 ， 不 同 于细 胞 坏 死 ， 细 胞 凋亡 发 生 在 非相 邻的 细 胞 ， 是 一个 生理 过 程 ， 没 有炎 症 发 生。 细胞 表 现 有核浓缩、DNA 断裂、 细 胞器 密 集、 细胞 膜 突 起、 体 积缩 小 、 凋 亡小 体形 成 。 几 乎所 有 动 物都 具 有 此动 能， 细胞 凋 亡 在维 持 低 等和 高 等 动物 正 常 发育 和 维 持内 环 境 稳态 具 有 重要 作 用。 密切 相关 的 细 胞凋 亡 、 增值 和 分 化是 细 胞 基本 的 生 命活 动 ， 它们 受 一 些列 复 杂的 基因 群调控 。 凋 亡 在 多 细 胞 生

28、物 中 对 于 细 胞 发 育 和 维 持 内 环 境 稳 态 具 有 重 要 的 作 用 1,2 。 对于 人类 细 胞 过度 凋 亡 和凋 亡 不 足都 会 导 致严 重 的 病理 后 果 ， 凋亡 机 制的 抑 制 引 起 自 身 免 疫 疾 病 和 癌 症 3,4 。例如，在黑色素肿癌症中凋亡蛋白酶激活因子 -1(Apaf-1) 被频 繁 的 灭活 5 ，另一方 面 ， 异常 的 凋 亡上 调 能 导致 神 经 系统 障 碍 6 。 1.1.1 真 核 生 物 细 胞 凋 亡 19 世纪下 半 叶 开始 出 现 细胞 死 亡 作用 的 研 究和 细 胞 凋亡 机 制 的相 关 问题 ，

29、 在 20 世界 中 叶出 现 多 细胞 动 物 激活 和 自 我毁 灭 的 程序 性 死 亡的 研 究 进展 。 这 种自 我 毁 灭 的程序 性 死亡可 能 由其他 细 胞提供 的 信号调 节 7 。 凋 亡 的 大部分 表 型、 和 核 心作 用 的 特点 和 病 理细 胞 死 亡的 基 因 调节 识 别 ， 不 仅 在 发育 上 ， 也在 成 年组 织内 稳态 ， 导 致了 来 自 于多 细 胞 动物 的 细 胞本 质 上 程序 性 自 我 毁灭 的 观点 的 接受 。 但 是细 胞 持 续的 生 存 也依 靠 细 胞的 这 种 来自 与 其 他细 胞 的 程序 上 的 自我 毁 灭，

30、 换句 话说 ， 细 胞可 能 一 直生 存 只 要他 们 接 受来 自 于 其他 细 胞 系的 这 种 导致 的 细 胞 自杀 的拖 延 的 信号 途 径 。 细 胞 凋 亡异 常 会 产生 疾 病 ，如 癌 症 ，肿 瘤 等 疾病 。 _茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡影响 前言 2 1.1.2 细 胞凋 亡的检测 方法 细 胞凋 亡主要通 过形态学 检测，DNA 检测，ELISA 法， 流式细胞 术法，凋 亡 调控 基 因 和 相 关 因 子检 测 法， 使用 染 色 剂对 细 胞 进行 染 色 观察 ， 提 取 DNA 分析 条 带， 提取 RNA 进行半 定量 分 析 等技 术 进 行，

31、 通过 形 态学 观 察 和细 胞 计 数可 初步判 断药 物 对 细胞 凋 亡 的影 响 ，DNA 电泳确 定细 胞 是 否发 生 DNA 断裂 ， 对于 组成单 纯的 细 胞 悬液 来 说， 使用 RT-PCR 法提取 RNA 之后合 成 cDNA ， 扩增 目 的 基因 ， 进 行琼 脂 糖 凝胶 试 验 检测 的 灵 敏性 高 ， 而 ELISA 法不 能 精 确确 定 凋 亡的 绝 对 量 ，因 此试 验 采 用倒 置 显 微镜 和 RT-PCR 法。 1.2 细胞凋亡的分子途径 基因 调控 凋 亡 ， 分 子 途 径有 三 种 ， 一 个 是 死亡 受 体 的凋 亡 途 径 也叫

32、外在 途径 （death receptor mediated pathway 或 extrinsic pathway) ， 二 是线 粒 体凋 亡 途 径或 内 在途 径(mitochondrial pathway 或 intrinsic pathway) ， 三是 内 质 网途 径(endoplasmic retuculum pathway) 。 三种 途 径 中受 三 种 凋亡 基 因 调控， 即 凋亡 中 表 达的 基 因，促 凋亡 基 因 和抗 凋 亡 基因 ，这些 基因之间 一起 作 用导 致 细 胞凋 亡 。 1.2.1 Bcl-2 基 因家族 Bcl-2 基因 家 族 在人 类

33、癌 症中 表 达 ， 调 节 化 疗药 物 作 用效 果 的 基因 。Bcl-2 和 Bax 之 间 的关 系 ， 它们 都 属 于 Bcl-2 家 族，Bcl-2 是一 种 凋 亡抑 制 基 因，Bax 是促 凋亡 基 因 ， 它 们 都 存在 线 粒 体膜 上 ， 它们 之 间 含量 和 功 能状 态 之 间的 平 衡可 以控 制细 胞 凋 亡，Bcl-2 含量 高 时 ， 抑 制 细 胞凋 亡 过 程 ， 反 之 ，促 进 细 胞发 生 凋 亡。 Mcl-1 是一 种 抗 凋亡 基 因 ， 也是 Bcl-2 家族 的 成员 。 先前 报 道 SBG 下调 Mcl-1 促使 PANC-1

34、发生 凋亡 8 。 Bcl-2 家族 蛋 包 括抗 凋 亡 基因 （Bcl-2 ， Bcl-XL，和 Mcl-1 基因 ） ， 也 包括 多 域 分子 Bax 和 Bak ， 与 带有 一个 BH3 区域的基 因 Bad ， Bid ， Puma ， 和 Noxa 9 。细 胞 凋 亡的 重 要 基因 Bcl-2 基因 ， 能使 Bak 、Bax 活化 ， 发生 细 胞凋 亡的 关 键 事件 ，即 多域 分 子 齐聚 ；Bak 和 Bax 发生 一 次 齐聚 ，Cyt-C 释放 到 线 粒 体膜 外 ， 与 Apaf-1 和 Caspase-9 等 结合 ，激 活 Caspase 基因 活化

35、级 联 10 。最近 报 道， 抗 凋 亡蛋 白 Bcl-XL 、Bcl-2 和 Mcl-1 ，在 几 个 癌模 试验 中可以 合 作保 护细胞 避免 死 亡 的刺 激 11,12 。Bcl-XL 和 Mcl-1 对正 常 细 胞作 用 的 机制 还 不 完全 清 楚。 在 线粒 体 和 内质 网 凋 亡途 径中 Bcl-2 都发 挥 着 重 要 的作 用， Bcl-2 能使线粒 中 巯 基氧 化还 原 状 态发生 改 变 ， 也 可 能抑 制 线 粒体 中 谷 胱甘 肽 （GSH ）的外泄，可能在 高 pH 值时， 使线 粒体 PT 孔形成 离 子通 道 ， 而 Bax 在广泛 pH 值 内

36、形 成 孔 道 ，Bcl-2 通过 关闭 Bax 形成的 孔道 ， 抑 制离 子 和 小分 子 通 过 ， 抑 制 凋亡发生 ， 还可 通过 调 控 Ca 2+ 浓 度， 调控 凋亡 。 _茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡影响 前言 3 1.2.2 P53 基因 和 P16 和 Rb 基因 与细胞 凋亡 P53 基因和 P16 基 因和 Rb 基 因是 重 要 的癌 症 抑 制基 因， p53 基因 与肿 瘤的 发 生、 发 展 有关 系 ，P53 可与 多 种生 长 因 子如 Bcl-2 、e-mye 、IL-3、TGF-p 等相互 作用 ， 共 同调 控 细 胞凋 亡 。 几个 线 粒 体上

37、的 和 细胞 膜 上 的起 功 能 作用 的 基因 转录 活化 才 能 促使 P53 介导 细 胞 凋亡 ， 可 分为 诱 导 和抑 制 凋 亡的 野 生 型和 突 变 型 两种 类型 。 多 种基 因 的 激活 和 失 活导 致 细 胞凋 亡 ， 肿瘤 抑 制 基因 p53 和序 列 特 异 性转 录因 子 的 活化 导致 DNA 损伤，一 些 数 据表 明 活 性氧 （ROS ）生 成 不 能触发 p53 激活 13 。p53 基因 的 主要 功 能 是激 活 转 录的 基 因 ，它 的 转 录目 标是 Bcl-2 家 庭成 员 Bcl-2 相关 X 蛋白 （Bax ） ， 使凋 亡 信

38、号透 过 细 胞外 膜发生 从线粒体 向 细 胞 质 中 的迁 移 ， 导致 线 粒 体蛋 白 质 的释 放 ， 进入 细 胞 质或 细 胞 核中 ， 参 与到 Caspase 活 化和 蛋 白 质或 DNA 降解 的 过 程 14 ,ROS 能引 起 Cyt-c 的释 放 和 Caspase-3/7 的活 化， 导致 DNA 碎片产生 ， 细 胞凋 亡 15 。 1.2.3 C myc 基 因 与 细胞凋亡 能够转 化 细胞 的 癌 基因C myc 与p53基 因参 与 凋 亡， C myc 的表 达和 功能 受 P53 抑 制， 能够 参 与 细胞 增 值 和也 促 使 细胞 凋 亡 ，C

39、 myc 是细 胞 增 值的 关 键 调节 器， C myc 表达 增强 ， 会 导致 肿 瘤的 发 生， 是一 种 致 癌基 因 的 转录 因 子。 miRNA 与致 癌 的 异常 表 达 能力 能 够 引起 几 个 不同 的 恶 性肿 瘤 。 除 了糖 酵 解 ， C myc 基因 通过 上 调 谷氨 酰 胺 酶（GLS ）刺 激 谷 氨酰 胺 的 代谢 抑 制 癌细 胞 的 生长 和 增 殖。C myc 细胞 增值 控 制 中心 具 有 重要 的 作 用， 在 有 丝分 裂 原 刺激 后 迅 速上 调 。C myc 基因在 肿瘤 细 胞 中经 常 超 表达 ， 该 基因 能 够 促进 肿

40、 瘤 细胞 的 增 殖和 抑 制 细胞 的分 化 。 包 含有C myc 基因 调 节网 络 包 括许 多 功 能 ， 也 包 括 那些 编 码 的miRNAs 。 miR-17-92基因 水 平 的升 高 使 前列 腺 素-2 的迅 速 增 高上 调C myc 表达基 因， 反 过 来又 抑 制PTEN 的表达； 因 此 ，增 加 肺 癌细 胞 凋 亡的 阻 力 。敲 除C myc 基因表 达 或miR-17-92 基因 簇 能够 有 效 逆转 这 个 结果 。 在NSCLC 细胞 中miR-17-92基因 表 达 水平 显 著 升高 。 重 要 的是，miR-17-92升 高， 以 肺 癌

41、患 者 的 血液 作 为 研究 目 标， 可 以检 测 出 会增 加 肺 癌发 生 的 风险 。 因 此miR-17-92 基因 簇 和C myc ，与 细 胞 增殖 和凋 亡 抵 抗相 关 。 1.2.4 Fas 基因 Fas 基因 与Bcl-2不 同， 它 们是 凋亡 的 基 因家 族 中 的两 个 对 立的 典 型 代表 基 因 ， 在某 一 些 细胞 中Fas 基因 含 量 的增 加 和Bcl-2基因 含 量的 减 少 会使 细 胞 不断 发 生 凋 亡。Fas 与FasL 是一 对 膜蛋 白， 分布 比 较 局限， 在 淋巴、 淋 巴样、 胆 管、 内 皮 细胞 等部 分 ， 与各 种 疾 病有 关 ， 如肝 脏 、 消化 道 、 粥样 硬 化 、狼 疮 肾 炎等 。 _