线粒体dna鉴定.pdf

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1、竭诚为您提供优质文档竭诚为您提供优质文档/ /双击可除双击可除线粒体线粒体 dnadna 鉴定鉴定篇一：线粒体 DnA 的结构特征及在鹿科动物物种鉴定中的应用线粒体 DnA 的结构特征及在鹿科动物物种鉴定中的应用摘要最新研究表明，作为生物能量的生成场所线粒体是一种具有自我遗传控制功能，本文重点针对鹿科动物的线粒体 DnA 结构特征进行了研究和分析，通过具体的实验验证了鹿科动物物种鉴定中线粒体 DnA 的实际功能和应用。同时，还对线粒体 DnA 的提取方法进行了探索，最后就线粒体 DnA的序列以及动物物种进行了鉴定，就鹿科动物线粒体 DnA 的研究成果提出了意见。关键词染色体；线粒体 DnA；鹿

2、科动物；物种鉴定0 引言线粒体是 1898 年被命名的，其实线粒体的发现却要追踪到 1850 年。线粒体外膜比较平滑，具有两层的膜包被，1 11212向内的折叠内膜形成嵴，两层膜中间有一个腔，基质居于线粒体的中央。基质内部有可以喝三羧酸进行循环时所需要的所有酶类，内膜上有 ATp 酶复合体和呼吸链酶系。线粒体其实就是细胞内形成 ATp 和氧化磷酸化的关键场所，因此，被形象地成为细胞的动力加工厂。1 线粒体 DnA 结构特征真核生物所呼吸所用的细胞器就是线粒体，不同物种的细胞之间，其线粒体的数目有着很大的差距，通常情况下都在 100 个3000 个之间， 植物细胞中一般都会含有 50 个100个

3、左右的线粒体，而动物的细胞中其线粒体的数目差异性要远远高于植物体内的线粒体数目，多的要达到 1000 个，少的却只有 50 个左右。实验表明，植物细胞中的所有线粒体都会参与植物本身的一系列新陈代谢的全过程。植物体内的所有的线粒体通过自身的功能可以把细胞所吸收和合成的糖类、脂肪等所有的储藏能量经过进一步地氧化而生成了co2 和 h2o，最后通过特定的方式将其释放出去，同时它还能将所存储的一些太阳能经过一系列的转换生成了细胞用以维持自身的生理功能的具体能量-ATp 分子。 正是由于植物细胞中的线粒体少于动物体内的线粒体，从而制约了能量的来源，因此植物就不可能出现和动物一样的自由活动和快速增长。由于

4、线粒体DnA（mtDnA）相对比较小，所以它仅能决定本身最基本的一些特征，缺少多余的编码结构，因此就难2 21212以产生有效的修复功能。实验表明，只要线粒体 DnA 受到了不同程度的损伤，哪怕只是一个极其微小的变化，都会直接导致和引发线粒体的正常的功能，这种效应还具有一定的累加性，变异的幅度会随着损害程度的变化而不断地加大，最后就会产生连细胞核都无法具备的一些独特功能。2 线粒体 DnA 的提取方法鹿科动物的线粒体 DnA 的常见的提取方法有： 碱变性法；柱层析法；氯化铯密度梯度离心法；Dnase 法柱层析法；改良碱变性法等几种。碱裂解法是借鉴质粒快速提取法所建立，在差速离心获得线粒体后。通

5、过高篇二：DnA 个体识别鉴定书鉴定机构全称（英文标题）（DnA 个体识别）鉴定书（）公（）鉴（）字20号一、绪论（一）委托单位： （二）委托人：（三）委托时间：200 年月日（四）案情摘要： （五）检材和样本： （以下内容为例举）1、标记“”字样物证包装袋一个，内装（现场提取或为受害人的）白色棉内裤一条，裆部可疑斑迹，剪取少许标记为 1 号检材。3 312122、嫌疑人张的白色的确良衬衫一件，其左胸部、右衣襟处分别可见 3cm2.1cm 和 2cm2cm 面积的褐色斑迹，剪取少许依次标记为 2、3 号检材。3、嫌疑人张的血样纱布一块，剪取少许标记为 4号检材。 （六）鉴定要求： （以下内容为

6、例举）地址：邮编：单位名称：电话：第页共页对上述检材进行 DnA 检验及同一认定。二、检验（以下内容为例举） （一）检验过程1、预实验：取 1 号检材少许，经酸性磷酸酶检验为阳性。取 2、3 号检材少许，经孔雀绿检验为阳性。2、确证实验：取 1 号检材少许，经抗人精试验检验，结果为阳性。取 2、3 号检材少许，经抗人 hb 试验检验，结果为阳性。3、DnA 提取：按行标 gA/T383-20XX 中差异裂解法分离1 号检材，经消化后，收集上清溶液（备用） ，取沉淀少许涂片，he 染色镜检，高倍镜下可检见精子，应用xxx 法提取精子 DnA。按行标gA/T383-20XX中chelex法提取2-

7、4号检材DnA。4、DnA 质和量的检测：采用 xxx 系统扩增 1-4 号检材 DnA，经 AbI-7500 型定量 pcR 仪分析，确定 1-4 号检材 DnA 的质量。4 412125、sTR 多态性检验：取适量的 1-4 号检材 DnA，应用Identifiler 系统，经 pcR 复合扩增 sTR 基因座；扩增产物经 AbI-3100 型 DnA 序列分析仪电泳分离和激光扫描分析，得到上述检材的 sTR 分型结果。6、 线粒体 DnA 序列分析检验： 取适量2-4 号检材的DnA，扩增 mtDnAhVI 区 16091-16418 区间片段，扩增产物经纯化后采用 big-Dye 试剂

8、盒进行测序反应，测序反应产物在AbI377 型 DnA 序列分析仪上进行电泳分离和序列分析， 得到2-4 号检材的序列结果。第页共页7、Y 染色体 sTR 检验：取适量 1-4 号检材的 DnA，使用Y-xxx 系统进行 pcR 复合扩增，扩增产物 Ab-3100 型 DnA 序列分析仪电泳分离和激光扫描分析，得到上述检材的 Y-sTR分型结果。 （二）检验结果1、DnA 质和量的检验结果：2、sTR 多态性检验结果：3、线粒体 DnA 序列分析检验结果：2-4 号检材在 mtDnAhVI 区（16091-16418 区间）的检测序列与 Anderson 标准序列比较，碱基变异位置如下：2 号

9、：16093c,16223A,16362c3 号：16129A,16223A4 号：16129A,16223A4、Y 染色体 sTR 检验结果：第页共页5 512125、数据库比对过程和复核：将 1 号检材 sTR 分型结果输入中国法庭科学 DnA 数据库中，经比对查询，与国家数据库中编号为s33050300020XX071956979 的样本在 xx 系统的 15 个基因座分型结果相同。经双方实验室再次进行 DnA 检验分析，sTR结果在 xx 系统的 15 个基因座与原分型结果一致。三、论证（以下内容为例举）1、 人类染色体的 D3s1358、 VwA、 FgA、 D21s11、 D18s

10、51、D5s818、 D13s317、 D7s820、 D16s539、 D8s1179、 Th01、 Tpox、csF1po、D2s1338、D19s433 等基因座均是人类遗传标记，联合应用可以进行同一认定，其累积个体识别概率为 11.810。1、4 号检材在 D3s1358 等 15 个基因座检测结果相同，采用中国汉族 sTR 群体数据资料计算似然比率为 7.5110。3 号检材在 D2s1338 和 FgA 没有获得分型结果,3 号检材在 D3s1358 等 13 个基因座的检测结果与 4 号检材相同，采用中国汉族 sTR 群体数据资料计算似然比率为 5.7210。1、3、4 号检材与

11、 2 号检材在 D3s1358 等 13 个基因座检测结果不相同。2、人类线粒体 DnA（mtDnA）呈母系遗传，同一母系的不同个体 mtDnA 序列应相同。当 mtDnA 序列相同时，不排除6 61212母系遗传关系。3、912-18第页共页列不同。3、 Y 染色体呈父系遗传， 同一父系不同男性个体的 Y-sTR分型结果应相同。当 Y-sTR 分型结果相同，不排除父系遗传关系。1、 3、 4 号检材在 DYs19 等 8 个基因座单倍型相同。 四、鉴定意见（以下内容为例举）1、在送检的白色棉内裤裆部可疑斑迹中检出人精斑，经 n 个 sTR 分型未排除张，支持该精斑为张所留，不支持为其他随机个

12、体所留。在送检的白色的确良衬衫左胸部 3cm2.1cm 面积的褐色斑迹中检出女性人血，不是张所留。在送检的白色的确良衬衫右衣襟处 2cm2cm 面积的褐色斑迹中检出人血，经 n 个 sTR 分型未排除张，支持该血痕为张所留，不支持为其他随机个体所留。2、在送检的白色的确良衬衫右衣襟处 2cm2cm 面积褐色斑迹中检出人血，该人血与张血样的 mtDnAhVI 区序列范围内一致，不排除两者来自同一母系。7 712123、在送检的白色的确良衬衫右衣襟处 2cm2cm 面积褐色斑迹中检出人血， 该人血与张血样的 8个Y染色体sTR基因座分型一致，不排除两者来自同一父系。第页共页篇三：DnA 亲子鉴定是

13、怎么回事DnA 亲子鉴定是怎么回事1、DnA 的鉴定原理是什么？如今 DnA 亲子鉴定技术已经发展到一个比较成熟的阶段，也逐渐被大众所熟知，DnA 检测成为了确定人与人之间是否存在血缘关系的最简单最实用的方法。在 DnA 检测中，亲子鉴定又比较常见，其鉴定的原理和依据如下：人体是由约 60 亿兆个细胞组成，而细胞是由细胞膜、细胞质、细胞核三个基本部分组成。染色体位于细胞的细胞核中，染色体是细胞核 DnA 的载体，sTR 是细胞核 DnA 中一些特定的片段。 线粒体位于细胞核外的细胞器中， 线粒体 DnA的结构数量与细胞核 DnA 有很大不同。目前国际上通用的 DnA 检测标记主要是细胞核 sT

14、R 分型检测和线粒体 DnA 高变区测序。对于一个特定的个体，他染色体上某个特定位置的重复序列的重复次数是固定的，而对于不同的个体在同一位置处的重复次数可能不同，这就构成了人群中这些重复序列的多态性。由于人类基因组中这种重复序列非常多，通过对这种8 81212多态性的检测，就可以明确区分个体与个体的不同，确定父母子的亲缘关系。核 DnA-sTR 遗传，完全遵循孟德尔遗传定律，即父母各把自己一半的DnA遗传给孩子， 孩子分别带有一半父亲的DnA，一半母亲的 DnA，孩子不可能带有父母没有的 DnA。使用核sTR 这种标记，可以直接鉴定二代以内直系血亲，比如已知父母，鉴定子女;或者已知子女，鉴定父

15、母，通过核 sTR 的鉴定，准确率可高达 99.99%以上，这样的准确率达到了可以直接认定亲子关系的程度。2、DnA 亲子鉴定的程序是什么？DnA 是从几滴血，腮细胞或培养的组织纤内提取而来。用畴素将 DnA 样本切成小段， 放进喱胶内， 用电泳槽推动 DnA小块使之分离最细的在最远，最大的最近。之后，分离开的基因放在尼龙薄膜上， 使用特别的 DnA 探针去寻找基因,，相同的基因会凝聚于一。然后，利用特别的染料在 x 光的环境下，便显示由 DnA 探针凝聚于一的黑色条码。小孩这种肉眼可见的条码很特别一半与母亲的吻合，一半与父亲的吻合。这过程重覆几次，每一种探针用于寻找 DnA 的不同部位并影成

16、独特的条码， 用几组不同的探针， 可得到超过 99.9%的父系或然率或分辨率。3、DnA 亲子鉴定有多准确？DnA 亲子鉴定是目前亲子测试中最准确的一种。如果小9 91212孩和测试男子的 DnA 模式在一个或多个的 DnA 探针上不吻合，那么被测试男子便被 100%排除， 即他是 0%可能是亲生父亲。他不可能是孩子的生父，如果是母亲，孩子和被测试父亲的DnA 模式完全吻合， 那么可以计算出 99.9%或更大的或然率。这个结果证明他是实则完全证实小孩的亲生父亲。大部分的美国法庭接受 90%或然率作为生父证明的证据。4、孩子要到某一年龄才可接受 DnA 亲子鉴定测试吗？DnA 亲子鉴定测试是无年

17、龄限制.传统的血型测试， 要小孩至少 6 个月。还有，要大量的血液样本，通常是要两大茶匙以上。这种方法应用于小孩身上较困难。相反，DnA 亲子鉴定只是要很少几滴的血液（约 1/4 或 1/2 茶匙） ，或是口腔抹擦所得的腮细胞， 这种用少量的血液或口腔测试， 使 DnA测试甚至可以在新生婴或小孩身上进行。由于 DnA 是形成于结合期，测试甚至可以在小孩末出世之前，使用（chorionicvillisampling/cVs）胎盘素或抽羊水（amniocentesis）方法来进行。亲子鉴定可以在已逝世的人的由殡仪馆工人收集的样本上进行。当一个人已辞世或失踪，还可以在其有血缘关系的亲属上重新编排他或

18、她的DnA 组织。5、亲子鉴定可以在没有母亲参与情况下进行吗？可以。DnA 亲子鉴定是非常有效，即使在母亲不在的情形下依然有效。在母亲参10101212与或不参与的情况下，而孩子和被测试男子的 DnA 组织排列不吻合，那么被测试者便 100%排除为亲生父亲。如果组织排列吻合，那么我们可计算出 99%或更大的生父或然率。个人如带未成年小孩测试，携带身份文件并签署一份有关他/她在法律上有权带小孩来测试的表格。6、口腔（腮）抹试准确吗？测试血液的另一变通办法是一种叫腮抹试（buccalswab）的样本收集方法，由于 DnA 存在于身体内每个细胞之中，使用抹试方法收集的样本而得出的试验结果的准确性和血

19、液样本一样。收集样本时用棉签在小孩口内轻轻抹试，DnA 便可以从此抽取，这种程序是不强制和无痛，最适宜于小孩。由于用这种方法提取 DnA，更多的步骤可以在大人身上取血而用口腔擦试在小孩上取得样本，大人也可选择使用口腔抹擦测试。7、被测试的人分布在不同的城市可以吗？完全无问题。8、要医院证明或律师信才可以做 DnA 亲子鉴定吗？不一定。9、亲子鉴定可以在小孩出世前做吗？可以， 用 DnA 鉴定， 亲子测试可以在小孩未出世前进行。DnA 测试可通过 cVb 胎盘素，常在怀胎 10 到 13 个星期，或用抽羊水方法在怀孕 14 到 24 星期内进行。任何一种手术要11111212由一位 ob/gYn 医生实施。10、可否请解释亲子鉴定测试的结果？孩子会有一条纹与亲生母亲相同而另一条码与待证实父亲 1 号（AF1）相同，此人是生父；被排除的男子（ AF2） ，则与小孩并无相同的条码。12121212