碱性磷酸酶-精品文档.docx

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1、碱性磷酸酶骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升高，应加以鉴别。研究应用碱性磷酸酶也是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶之一。与辣根过氧化物酶HRP)相比，ALP用作标记酶的优点是，稳定性高、灵敏度高，缺点是成本高，标记困难。在研究中最常用的ALP如下：细菌碱性磷酸酶Bacterialalkalinephosphatase(BAP),来源：EscherichiacoliC4；Shrimpalkalinephosphatase(SAP),来源：一种北极虾(Pandalusborealis);小牛肠碱性磷酸酶CalfIntest

2、inalAlkalinePhosphatase(CIP);胎盘碱性磷酸酶Placentalalkalinephosphatase(PALP)和分泌性碱性磷酸酶thesecretedalkalinephosphatase(SEAP)，后者是前者的C末端短缺版与PALP相比，SEAP没有PALP的C末端最后24个氨基酸(这24个氨基酸构成了与糖基化磷脂酰肌醇靶向锚定的区域)ALP主要应用于分子生物学和酶免分析中：分子生物学中主要用作核酸的去磷酸化。由于DNA通常会在5端结合磷酸基团，用ALP去磷酸化能防止DNA分子5端与3端连接，进而在后续步骤准备好之前让DNA分子抑制处于线性化状态;同样，通过去

3、磷酸化可用作放射标记示踪。通常用作这些目的用的最多的是Shrimpalkalinephosphatase(SAP)，由于在反响完成之后它是最容易灭活的。酶免分析中应用最多的是ELISA，以竞争法测小分子抗原为例，抗体先与固相载体结合，然后让待测样品与事先经ALP标记过的该抗原竞争地与抗体结合，洗去未反响的过量ALP-抗原，参加显色底物。则能够通过与按梯度浓度变化的标准品绘出的标准曲线比照进而知道待测样品中抗原的浓度。ELISA中用的比拟多的是辣根过氧化物酶(HRP)，底物为OPD，深桔黄色，检测波长492nm；TMB，蓝绿色，检测波长450nm碱性磷酸酶，底物为PNPP对消基苯磷酸酯，黄色，检

4、测波长405nm目前工业上一个普遍的应用是作为检验牛奶的巴斯的灭菌的标志：被巴斯德过高温灭菌的分子会被灭活，向其中和未巴斯灭菌的牛奶中参加ALP的底物，2分钟后未灭菌的样品应该显黄色，假如待测样品(指被巴斯灭菌过的牛奶)也能呈现一样颜色，则讲明巴斯灭菌温度未过度。当然总有例外，由于有少数细菌会产生耐热的ALP。测定方法有很多种，我国曾应用较广的为磷酸苯二钠比色法，但如今应用较多的是连续检测法。原理为以磷酸对硝基酚为底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇或二乙醇胺为磷酸酰基的受体。在碱性环境下，ALP催化4-NPP水解产生游离的对硝基酚，在碱性溶液中转变成黄色。根据405nm处吸光度增高速率来计算A

5、LP活性单位。正常范围正常范围连续监测法女性，1-12岁小于500U/L；大于15岁，40-150U/L；男性，1-12岁小于500U/L；12-15岁，小于750U/L；大于15岁，40-150U/L。高值可能讲明有胆管阻塞现象；低值更多出现于儿童和孕妇身上。高值表明有可能发生了活动性骨沉积(这个可能译的不准，请指正，原文为activebonedeposition)，由于ALP是成骨细胞活动(造骨)的副产物(例如在佩吉氏斯症畸形性骨炎的案例中)。一般来讲，低值要比高值少见。临床意义临床上测定ALP主要用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸的鉴别诊断。对于不明原因的高ALP血清水平

6、，可测定同工酶以协助明确其器官来源。1生理性增高：儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高12倍。处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后均能够升高。2病理性升高：(1)骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等；(2)肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等；(3)其他疾病如甲状旁腺机能亢进。3病理性降低：见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血等。抑制作用除来源于胎盘外所有哺乳动物的ALP同工酶都能被高精氨酸所抑制；而除来源于肠和胎盘外所有的ALP同工酶都能被左旋咪唑所抑制；而除了来源于胎盘的ALP(PALP和SEAP)外，几乎所有的AL

7、P都能在652小时即被灭活。单乙醇胺对碱性磷酸酶有温度依靠的抑制作用；较高浓度的无机磷可竞争性地抑制碱性磷酸酶的活性；EDTA通过络合碱性磷酸酶而导致该酶活性中心微环境构象发生变化，进而不可逆地抑制碱性磷酸酶的活性；其他的抑制剂还有联苯胺(竞争性)、L-苯丙氨酸和丹酰-L-苯丙氨酸(反竞争性)、含氮杂环氧钒配合物(选择性)、五氯酚(对人胎盘碱性磷酸酶反竞争性抑制)等。肝胆疾病引起的ALP升高肝细胞介入合成ALP，肝胆疾病时增高的ALP来自肝细胞。淤胆性疾病时ALP的升高ALP存在于毛细胆管面的微绒毛上，在胆汁分泌障碍时明显增高。因胆汁酸刺激而ALPmRNA转译增高，肝细胞合成ALP亦增高。AL

8、P经胆汁排出，肝内外胆管阻塞时，ALP有非常明显的升高，ALP升高先于黄疸的出现，在黄疸消退后还可持续异常。在原发性胆汁肝硬化、药物性肝炎、肝移植排挤或淤胆型病毒性肝炎引起的肝内淤胆，都会使ALP升高，甚至高达正常值的4倍。肝内占位性病变时ALP的升高即便无黄疸，在肝占位性病变时血清ALP可以升高，包括肝肿瘤和肝脓肿，机制不明，可能与存在小胆管阻塞有关。在单小叶或节段的胆管阻塞，血清ALP升高能够是唯一的检验异常。恶性肿瘤时ALP明显升高，是肿瘤的标记酶。在肝硬化病人的病程观察中如发现血清ALP升高，须考虑合并HCC的可能性。肝转移性肿瘤与其他肝占位性病变一样，血清ALP可明显升高。某些肝外肿

9、瘤可以合成ALP，并不表示肝外肿瘤已有肝转移。成骨细胞与ALP成骨细胞的活性及成骨作用的变化与血清ALP的活力密切相关。骨骼疾病患者主要由于成骨细胞增殖使血清ALP升高。畸形性骨炎显著升高，为正常参考值上限的10倍至几十倍，但血清钙磷多正常。佝偻病和骨软化症患者ALP变化与病程、病情有关，早期ALP轻度升高，随病情加重而呈持续性上升，可达正常上限的410倍。治疗2周后酶活力下降。骨折愈合期ALP活力轻度升高，成骨骨癌者显著升高。各种类型的骨质疏松，良性成骨细胞瘤等ALP无明显变化。甲状旁腺功能亢进患者因田状旁腺素太多引起溶骨作用加强，使ALP活力中度或重度升高，同时血钙升高，血磷降低。此点有助

10、于与畸形骨炎、佝偻病的鉴别。对血清ALP成分的测定结果表明，其主要作用在于鉴别血清中升高的ALP是单独地还是同时来自肝和骨组织。血液中同时出现肝型和骨型ALP升高，最常见于恶性肿瘤。肝型ALP增加几乎都是肝脏恶性肿瘤浸润的结果。肝型ALP继发性沉积于骨组织，常可引起成骨反响，因此伴有骨型ALP增高。所以恶性肿瘤患者血清肝型和骨型都增高的比例较大，定量测定肝型与骨型ALP同工酶，对判定肿瘤的扩散和疗效均具有重要价值。碱性磷酸酶偏低的原因碱性磷酸酶可出现偏高症状，同时，可以出现偏低症状，碱性磷酸酶3偏低的原因，主要可分下面几种：1.常见于重症型慢性肾炎，甲状腺功能不全者；2.营养不良、呆小症；3.维生素C缺乏症坏血病、乳糜泻、恶病质、贫血；4.遗传性低磷酸酶血症。碱性磷酸酶出现低值的现象虽少见，但由于碱性磷酸酶偏低，引主由病例性方面的因素引起，因而，提醒患者切忌轻视此症状的发生！