消毒剂能量试验.docx

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1、 消毒剂能量试验2.1.1.11.1 目的测定连续加入细菌悬液对消毒剂杀菌作用的影响， 以验证该消毒剂用于多次消毒污秽物品(含较多有机物)，如浸洗拖布的消毒液、浸泡污染医疗器械的消毒液、浸泡洗手消毒液等实用剂量。2.1.1.11.2 试验器材 (1) 试验菌株 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 大肠杆菌 8099 铜绿假单胞菌 ATCC 15442(2)磷酸盐缓冲液 (PBS，0.03mol/L，pH 值 7.27.4)。(3)标准硬水(硬度为 342mg/L)：见附录 A。(4)含中和剂营养肉汤培养基 (所用中和剂应为经试验鉴定合格者，见 2.1.1.5)。(5)细菌定量杀灭试验所用器材

2、(见 2.1.1.7.2)。2.1.1.11.3 试验程序(1)试验用菌悬液配制 选择上述试验菌中对所试消毒剂抗力强者作为试验菌， 配制菌悬液。用标准硬水将酵母粉配成 50mg/L 溶液 (pH 值 6.97.1)。然后，吸取试验菌新鲜营养肉汤 24h 培养物6.0ml，加于含 4.0ml 酵母液试管中，混匀。依此配制成的菌悬液，所含菌量应为 106 cfu/ml107cfu/ml。 (2)将待测消毒剂用硬水稀释成 A(1.5x)、B(x)、C(0.5x) 等 3 个浓度的消毒液 (括弧中的 “x” 代表杀菌试验所得有效浓度)， 各取 3.0ml 分装于无菌试管内。(3)第 1 次，取试验菌悬

3、液 1.0ml 加入到第 1 管 A 浓度消毒剂溶液内，立即混匀。(4)在 A 管加菌悬液后 8min，分别吸取 A 管内混合液 20l 移种至 A 组的第 1 批 5 支盛有 5.0ml 含中和剂营养肉汤培养基管中。(5)在第 1 次加菌悬液后 10min，第 2 次取 1.0ml 菌悬液加入到A 浓度消毒剂管内，立即混匀。(6)在第 2 次加入菌悬液后 8min(即第 1 次加菌悬液后 18min) 时，分别吸取 A 管内混合液 20l 移种至 A 组的第 2 批 5 支盛有5ml 含中和剂营养肉汤培养基管中。(7)在第 2 次加入菌悬液后 10min(即第 1 次加菌后 20min)，取

4、1.0ml 菌悬液加入到 A 浓度消毒剂管内，振摇混匀。(8)在第 3 次加入菌悬液后 8min(即第 1 次加入菌液后 28min) 时， 分别吸取 A 管内混合液 20l 移种至 A 组的第 3 批 5 支盛有5ml 含中和剂的营养肉汤培养基管中。(9)B(x)、C(0.5x)两浓度药液的试验内容和操作程序，与上述 A 浓度者相同。3 个稀释度消毒药液同一批进行操作时，可按表 2-3 规定的时间和顺序进行。表 2-3 能量试验操作时间加菌与移种次序 各浓度组操作时间(第 X min) A B C 第 1 次加菌 0 1 5第 1 次移种(5 管) 8 9 13第 2 次加菌 10 11 1

5、5第 2 次移种(5 管) 18 19 23第 3 次加菌 20 21 25第 3 次移种(5 管) 28 29 33 (10)以 2 支含 5ml 中和产物 (用同次试验所用消毒剂与中和剂配制) 的营养肉汤培养基管，加入 5l 试验菌液，作为阳性对照。(11)以 2 支含 5ml 与上相同的中和产物的营养肉汤培养基管，作为阴性对照。(12)将以上各试验组和对照组样本管，置 37 培养箱中培养 48h，观察是否有菌生长(13)所有试验均在 201 水浴中进行。(14)重复上述试验，每日 1 次，以连续取得 3 次同一评价结论者为准。(15)试验中应将试验用菌悬液进行活菌培养计数，其长菌量应在1

6、06cfu/ml107cfu/ml。阳性对照管应变浑浊，阴性对照，不应有菌生长。对照组结果不符合要求时，应检查原因，改正后重新进行试验。2.1.1.11.4 评价规定当阳性对照管有细菌生长(混浊)，阴性对照管无菌生长(透明)时，第 1 次和第 2 次移种的 5 管样本中，有 2 管或 2 管以上不长菌的浓度组，作为合格浓度组。如 3 个浓度组均合格， 应降低消毒剂浓度继续试验; 反之，3 个浓度组均不合格，则增加消毒剂浓度，直至找到最低合格浓度。连续 3 次重复试验，得到同样最低合格浓度，该最低合格浓度可作为设定反复浸泡用消毒液实用浓度的依据。2.1.1.11.5 结果举例设对某消毒剂能量试验结果如表 2-4。表 2-4 某消毒剂能量试验结果试验序号消毒剂浓度3 次加菌后移种 5 管肉汤中细菌生长情况(%，v/v)(1)(2)(3)10.6 1.2 1.8 , 20.6 1.2 注: “+“ 表示有菌生长， “-“表示无菌生长。结论：此次试验结果，该消毒剂的最低合格浓度为 1.2%。2.1.1.11.6 注意事项(1)试验应选用规定菌株。(2) 3 个消毒剂浓度组操作，应严格按表 2-3 规定的时间进行。1.8 30.6 1.2 1.8