水消毒效果鉴定试验.docx

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1、 水消毒效果鉴定试验水消毒效果鉴定试验2.1.4.1 生活饮用水消毒效果鉴定2.1.4.1.1 目的 检测生活饮用水消毒剂与消毒器械的杀菌效果，以验证其对生活饮用水消 毒能否达到卫生合格标准。2.1.4.1.2 试验器材(1) 大肠杆菌 (8099) 悬液。取 37 培养 18h24 h 的新鲜大肠杆菌斜 面，用生理盐水洗下菌苔，混匀后再用生理盐水适当稀释，配制成试验用大肠 杆菌悬液。(2) 微孔滤膜滤器和滤膜(滤膜孔径为 0.45m0.65 m，滤膜大小示滤 器型号确定，目前常用有直径为 35 mm 和 47 mm 两种)。(3) 抽滤水泵或气泵。(4) 恒温水浴箱。(5) 秒表。(6) 三

2、角烧瓶。(7) 广口玻璃瓶 ( 500ml)。(8) 无齿镊子。(9) 品红亚硫酸钠培养基：见附录 A。(10) 中和剂(鉴定合格者，见 2.1.1.5 )。(11) 细菌定量杀灭试验用其他器材(见 2.1.1.7 )。(12) 天然水样。(13) 模拟现场消毒装置(见 2.1.4.1.8 )。(14) 磁力搅拌器。2.1.4.1.3 试验阶段饮用水消毒效果的鉴定应经过实验室杀菌试验，天然水样消毒试验两个阶 段的检测。实验室试验的目的是以大肠杆菌为试验菌，用悬液定量杀菌试验法 测出在试管中消毒所需的剂量。天然水样消毒试验是由自然水体取样，进一步验证受试消毒剂或方法对成分较复杂的天然水的消毒效果

3、。对用于较大水体(如 人工游泳池水、高层建筑二次供水)消毒的设备和方法，必要时尚需进行模拟现 场或现场试验，以进一步验证其消毒效果。由于生活饮用水的卫生标准，除微生物外还需考虑化学污染等方面，因此 对其安全评价尚需由有关专业单位对其他条件，例如化学物质含量和 pH 值等， 进行检测和判定，以对所鉴定的消毒剂或器械做出合格与否的综合评价。2.1.4.1.4 试验菌污染水样的配制试验用试验菌污染水样用于试验室消毒试验。配制时，将用生理盐水配制 的大肠杆菌悬液加入脱氯的自来水或蒸馏水中，使其含菌量达到 5 104 cfu/100ml5 105 cfu/100ml。2.1.4.1.5 试验菌污染水样中

4、活菌的培养计数(1) 将纤维滤膜在蒸馏水中煮沸消毒 3 次，每次 15min。每次煮沸后需更 换蒸馏水洗涤 23 次，以除去残留溶剂。(2) 将滤器用压力蒸汽灭菌( 121，20 min )，也可用酒精火焰灭菌。(3) 用无菌镊子夹取无菌的滤膜边缘，将粗燥面向上，贴放在已灭菌滤器 的滤床上，稳妥地固定好滤器。取一定量待检水样(稀释或不稀释)注入滤器中， 加盖，打开抽气阀门，在负压 0.05 Mpa 下抽滤。(4) 水样滤完后，再抽气约 5s，关上滤器阀门，取下滤器。用无菌镊子夹 取滤膜边缘，移放在品红亚硫酸钠琼脂培养基平板上，滤膜截留细菌面向上。 滤膜应与琼脂培养基完全紧贴，当中不得留有气泡，

5、然后将平板倒置，放入 37 恒温培养箱内培养 22h24h。(5) 观察结果和计数:计数滤膜上生长带有金属光泽的黑紫色大肠杆菌菌落，并 计算出染菌水样中含有的大肠杆菌数 (cfu/100ml )。2.1.4.1.6 实验室杀菌试验操作程序（1）饮水消毒剂杀菌试验1）试验分组试验组。申请消毒产品卫生许可批件时，按使用说明书规定的最短剂量，设 定 1 个浓度，3 个作用时间（使用说明书规定的最短作用时间，最短作用时间 的 1.5 倍和最短作用时间的 0.5 倍），测定其对大肠杆菌的杀菌效果。进行消毒产品监督检测时，按使用说明书规定的最短剂量，设定 1 个浓度，1 个作用 时间（使用说明书规定的最短

6、作用时间），测定其对大肠杆菌的杀菌效果。 阳性对照组，以未经消毒的试验菌污染水样进行活菌培养计数; 阴性对照组，以试验所用同批次未经使用的培养基进行培养，观察有无细菌 生长。2）操作程序按 2.1.4.1.4 所示方法配制试验菌污染水样。将装有试验菌污染水样的三角烧瓶放入恒温水浴箱(202)中，开动磁力 搅拌器，使细菌在水中分布均匀。先取 2 份试验菌污染水样，按 2.1.4.1.5 所 示方法进行大肠杆菌活菌计数(阳性对照组)。待水样的温度恒定后加入消毒剂，迅速搅拌均匀。从开始加消毒剂起计时， 按规定时间吸取水样，注入装有中和剂的无菌三角烧瓶中，以终止消毒作用。将中和后水样，分别取 100

7、ml，10 ml，1 ml 各 2 份，按 2.1.4.1.5 所示 方法进行大肠杆菌的活菌培养计数。将未接种大肠杆菌的试验用同批培养基平板 2 个，置温箱中培养(阴性对照 组)。试验重复 3 次。3）结果评价当阳性对照组平均菌量在 5 104 cfu/100 ml5 105 cfu/100 ml，阴性对 照组均无菌生长时。在 3 次试验中均使大肠杆菌下降至 0/100 ml 的最低剂量， 可判定为实验室试验中饮水消毒最低有效剂量。若阳性对照和阴性对照未达上 述要求，应寻找原因，纠正后重做试验。（2）饮水消毒器杀菌试验 本节饮水消毒器械指能产生消毒液并用于饮水消毒的饮水消毒装置。1）试验分组试

8、验组。申请消毒产品卫生许可批件时，按使用说明书规定的最低剂量，设 定 1 个作用浓度（使用说明书规定的最低作用浓度）和 3 个作用时间（使用 说明书规定的最短作用时间，最短作用时间的 1.5 倍和最短作用时间的 0.5 倍） ，测定其对大肠杆菌的杀菌效果。进行消毒产品监督检测时，按使用说明书规定的最低剂量，设定 1 个浓度（使用说明书规定的最低作用浓度）和 1 个作 用时间（使用说明书规定的最短作用时间），测定其对大肠杆菌的杀菌效果。阳性对照组，以未经消毒的试验菌污染水样进行活菌培养计数;阴性对照组，以试验所用同批次未经使用的培养基进行培养，观察有无 细菌生长。2）操作程序按 2.1.4.1.

9、4 所示方法配制试验菌污染水样。取 2 份试验菌污染水样，按 2.1.4.1.5 所示方法进行大肠杆菌活菌计数(阳 性对照组)。应用气压法或水泵法进行消毒处理。应用气压法时，按要求联接高压( 2 kg/cm23 kg/cm2 )气源、耐压水样贮水器（3 kg/cm25 kg/cm2 ）、流量计和 饮水消毒器。应用水泵法时，则按要求联接耐压水样贮水器（3kg/cm25 kg/cm2 ）、水泵、流量计和饮水消毒器。然后将加有试验菌的水样通过消毒器， 将消毒过的水样放置至规定时间，再分别取其加于含中和剂的灭菌三角瓶中， 混匀。分别吸取中和后水样 100ml，10ml，1ml 各 2 份，按 2.1.

10、4.1.5 所示 方法进行大肠杆菌的活菌计数。将未接种大肠杆菌的试验用同批培养基平板 2 个，置培养箱中培养(阴 性对照组)。试验重复 3 次。3）结果评价当阳性对照组平均含菌量在 5 104cfu/100ml5 105cfu/100ml。阴性对照 组均无菌生长时。在 3 次试验中使大肠杆菌均下降至 0/100ml 的最低剂量，可 判定为实验室试验中饮水消毒最低有效剂量。若阳性对照组和阴性对照组含菌量未达上述要求，应寻找原因，纠正后重做试 验。（3）饮水过滤器除菌试验1）试验分组试验组。申请消毒产品卫生许可批件时，按使用说明书规定的最大流量，测 定其对大肠杆菌的除菌效果。阳性对照组，以未经消毒

11、的试验菌污染水样进行活菌培养计数。阴性对照组，以试验所用同批次未经使用的培养基进行培养，观察有无 细菌生长。2）操作程序按 2.1.4.1.4 所示方法配制试验菌污染水样。取 2 份试验菌污染水样，按 2.1.4.1.5 所示方法进行大肠杆菌活菌计数(阳 性对照组)。按使用说明书规定的最大流量，将试验菌污染水样(见 2.1.4.1.4 )分段通 过饮水过滤除菌装置。按规定过滤的水量，用无菌三角瓶分段采集:初始、 1/4、2/4、3/4、4/4 等各段流出的水样(不需加中和剂)。对过滤后各段水样，分别取 100ml、10ml、1ml 各 2 份，进行大肠杆菌 活菌培养计数 (见 2.1.4.1.

12、5 )。将未接种大肠杆菌的试验用同批培养基平板 2 个，置培养箱中培养(阴 性对照组)。试验重复 3 次。3）结果评价当阳性对照组平均含菌量在 5 104cfu/100ml5 105 cfu/100ml。阴性对照 组均无菌生长时。在 3 次试验所有流量段水样中大肠杆菌下降至 0/100ml 时， 可判为实验室试验中饮水消毒效果合格。若阳性对照组和阴性对照组含菌量未 达上述要求，应寻找原因，纠正后重做试验。2.1.4.1.7 杀菌效果影响因素测定试验操作程序(用于饮用水化学消毒试验)（1）水温影响试验:将人工染有大肠杆菌的水样，温度分别调控在 52、 202、302 条件下，对不同温度的水样，按

13、说明书上规定的最低使 用剂量（1 个浓度，1 个作用时间）进行杀菌试验，观察水温的影响。试验程序 同 2.1.4.1.5 或 2.1.4.1.6。试验重复 3 次。3 次试验中，3 个温度组杀菌效果 均达合格标准，判为温度对该消毒剂杀菌效果影响不明显，所试剂量可在 530条件下使用。否则应依据杀菌效果确定仅可在杀菌效果均达合格标准 的温度区间内使用。试验中应设阳性对照和阴性对照组。两对照组结果未达要 求见 2.1.4.1.6（1）3），应寻找原因，纠正后重做试验。（2）有机物影响试验腐殖酸配制：取 0.1g 腐殖酸（分析纯）用少许 2.0 mol/L 氢氧化钠溶液溶 解，加蒸馏水 50 ml，

14、用滤纸过滤至 100 ml 容量瓶中，用 2.0 mol/L HCl 溶 液调节 pH 值至中性，并定容至 100 ml，比色测定实际色度。水样制备：在水样中加入腐殖酸，比照标准色度管，使色度各为 0 度、10 度、 15 度，然后分别加入大肠杆菌悬液，配成不同色度的人工染有大肠杆菌水样。消毒处理：按说明书上推荐的最低使用剂量( 1 个浓度，1 个作用时间)进行 杀菌试验，观察有机物的影响。试验程序同 2.1.4.1.6（1）或 2.1.4.1.6（2）。试验重复 3 次。 3 次试验中，3 个浓度的有机物组杀菌效果均达合格标准，判为有机物对该 消毒剂杀菌效果影响不明显，所试剂量可用于色度低于

15、 15 度水的处理。否则 应依据杀菌效果确定仅可用于低于杀菌效果均达合格标准色度水的处理。试验 中应设阳性对照和阴性对照组。两对照组结果未达要求见 2.1.4.1.6（1）3）， 应寻找原因，纠正后重做试验。3）水中 pH 值的影响试验水样制备：用氢氧化钠（分析纯）或盐酸（分析纯）调水样 pH 值分别调为 6.5，7.0 和 8.5，然后加入大肠杆菌悬液，配成不同 pH 值的试验菌污染水样。消毒处理：按说明书上推荐的最低使用剂量(1 个浓度，1 个作用时间)进行 杀菌试验，观察 pH 值的影响。试验程序同 2.1.4.1.6（1）或 2.2.1.4.1.6（2）。试验重复 3 次。 3 次试验

16、中，3 种 pH 值的消毒剂浓度杀菌效果均达合格标准，判为 pH 值 对该消毒剂杀菌效果影响不明显，所试剂量可用于 pH 值 6.58.5 水的处理。 否则应依据杀菌效果确定仅可在杀菌效果均达合格标准的 pH 值区间内使用。 试验中应设阳性对照和阴性对照组。两对照组结果未达要求见 2.1.4.1.6（1） 3），应寻找原因，纠正后重做试验。2.1.4.1.8 模拟现场试验和现场试验考虑到实用情况下各种水质对消毒效果的影响，根据产品申报的使用范围， 选用天然水样如井水、河水、湖水或高层建筑贮水箱的水等进行消毒试验。（1）饮水消毒剂对天然水样杀菌试验1)根据说明书的最低使用剂量选择 1 个浓度，1

17、 个作用时间，对天然水样进行 杀菌试验。同时设置阳性对照组与阴性对照组。2)将装有天然水样的三角烧瓶放入恒温水浴箱( 202 )中，开动磁力 搅拌器，使细菌在水中分布均匀。取 2 份同批同类天然水样，每份 100ml，按 2.1.4.1.5 所示方法计数大肠菌群数(阳性对照组)。3)待水样的温度恒定后，加入消毒剂，迅速搅拌均匀。从开始加消毒剂起 计时，按规定时间吸取水样，注入装有中和剂的无菌三角烧瓶中，以终止消毒 作用。4)将中和后水样，分别取 100ml 2 份，按 2.1.4.1.5 所示方法进行大肠 菌菌群的活菌培养计数。5)将未接种水样的试验用同批培养基平板 2 个，置培养箱中培养(阴

18、性对 照组)。6)试验重复 3 次。当阳性对照组均有菌生长。阴性对照组均无菌生长时， 可判定在 3 次试验中均使大肠菌菌群下降至 0/100ml ，可判定为对天然水样 消毒合格。7)如阳性对照组含菌量未达上述要求和阴性对照组有菌生长，应寻找原因， 纠正后重做试验。（2）饮水消毒器对天然水样杀菌试验1)根据使用说明书的最低使用剂量选择 1 个浓度，1 个作用时间，对天然 水样进行杀菌试验。2)试验前，先取 2 份试验用天然水样，每份 100ml，按 2.1.4.1.5 所示 方法进行大肠菌菌群的活菌培养计数(阳性对照组)。然后，将天然水样本按 2.1.4.1.6（2）2） 要求通过消毒器进行消毒

19、处理，将处理后水样移到含中和 剂的三角烧瓶中，混匀。3)将中和的水样 2 份，每份 100ml，按 2.1.4.1.5 所示方法进行大肠菌 菌群的活菌培养计数。4)大肠菌菌群的活菌培养计数量，按 2.1.4.1.5 所示方法检测。用滤膜过 滤法检测时，所用水量应一致，约数毫升。污染严重的天然水，检测时可适当 稀释。5)将未接种水样的试验用同批培养基平板 2 个，置培养箱中培养(阴性对 照组)。6)试验重复 3 次。当阳性对照组均有大肠菌群生长，阴性对照组均无菌生 长时，在 3 次试验中均使大肠菌群下降至 0/100ml ，可判定为对天然水样消 毒合格。7)如阳性对照组含菌量未达上述要求和阴性对

20、照组有菌生长，应寻找原因， 纠正后重做试验。（3）饮水过滤器对天然水样的除菌试验1)取 2 份试验用天然水样，每份 100ml，按 2.1.4.1.5 所示方法进行大肠菌 菌群的活菌培养计数。所得结果作为过滤前含菌量(阳性对照组)。2)按过滤器产品规定流量，将天然水样分段通过过滤器。按规定过滤的水量， 用无菌三角瓶分段采集:初始、1/4、2/4、3/4、4/4 等各段流出的水(不需加中 和剂)。3)对过滤后各段水样，分别取 100ml、10ml、1ml 各 2 份，按 2.1.4.1.5 所示方法进行大肠菌菌群的活菌培养计数。4)将未接种水样的试验用同批培养基平板 2 个，置培养箱中培养(阴性

21、对 照组)。5)试验重复 3 次。当阳性对照组均有菌生长，阴性对照组均无菌生长，3 次试验中所有流量段水样大肠菌群均降至 0/100ml，可判为对天然水样的消毒 效果合格。6)如阳性对照组和阴性对照组含菌量未达上述要求，应寻找原因，纠正后 重做试验。（4）高层建筑二次供水消毒设备和方法对较大水体消毒设备和方法的鉴定，在模拟现场和现场试验中选做其一即可， 但首先应考虑后者，只有在无法进行现场试验时，才做模拟现场试验。大水体 现场消毒试验的操作程序，随当时当地情况，设备大小和所采取的消毒方法而 定。1)高层建筑二次供水消毒有两种主要方式，一是直接对贮水池中的水用物 理或化学法消毒，一是将贮水池水引

22、出通过消毒装置(如紫外线照射装置、过滤 装置或消毒剂添加和搅拌装置等)进行消毒，遂后再输送到用户。2)直接对水池中水进行消毒的设备和方法的鉴定，可参照游泳池水消毒设 备和方法鉴定的有关要求进行消毒和采样检测(见 2.1.4.2 )。试验剂量选用使 用说明书中规定者，样本按 2.1.4.1.5 所示方法进行活菌培养计数。检测中阴 性对照组的设置和结果的评价，与天然水样杀菌试验相同见 2.1.4.1.8（1）； 2.1.4.1.8（2）；2.1.4.1.8（3）。但检测需重复 5 次，结果均符合要求者 (使用含氯消毒剂消毒的水样，剩余氯量为 0.3 mg/L0.5mg/L )可判为合格。3)将水引

23、出后消毒的设备和方法的鉴定，可在进入消毒器和消毒后出水口 管道上各加一 三通阀门，分别采集消毒前和消毒后水样。将样本按 2.1.4.1.5 所示方法进行活菌培养计数。试验剂量选用使用说明书规定者。检测中阴性对 照组的设置和结果的评价，与天然水样杀菌试验相同见 2.1.4.1.8（1）； 2.1.4.1.8（2）；2.1.4.1.8（3）。但检测需重复 5 次，结果均符合要求者 (使用含氯消毒剂消毒的水样，剩余氯量为 0.3 mg/L0.5 mg/L )可判为合格。4)对条件不容许加装三通阀门时，可进行模拟现场试验。先设一大型水箱 (大小根据鉴定的消毒设备流量和试验时间计算)，在其出水口下游用管

24、道依次 连接水箱出口阀门、排水泵、三通阀门(一端接下面的流量计，另一端接一回流 管，必备需要时可将菌悬液送回水箱)、流量计和所鉴定的消毒装置。消毒装置 的进水口前装一三通阀门，以备采集阳性对照水样。试验时，水箱内盛装含大肠杆菌悬液(大肠杆菌浓度在 5104cfu/100ml5105cfu/100ml，见 2.1.4.1.4 )的水样。打开水箱出口阀 门，根据流量计所示，用阀门和水泵控制流出水样的量和压力，并使按规定流 量进入消毒装置。当水流按规定流量稳定地由消毒装置出水口流出后，先采阳 性对照水样，而后由消毒装置出水口采集消毒后水样。将水样按 2.5.5 所示方 法进行活菌培养计数。试验剂量选

25、用使用说明书规定者。检测中，阴性对照组 的设置和结果的评价，与天然水样杀菌试验相同见 2.1.4.1.8（1）； 2.1.4.1.8（2）；2.1.4.1.8（3）。但检测需重复 5 次，结果均符合要求者 (使用含氯消毒剂消毒的水样，剩余氯量为 0.3 mg/L0.5 mg/L )可判为合格。其他类似设备和方法亦可参照有关原则进行。2.1.4.2 人工游泳池水消毒效果鉴定(1) 水样采集。游泳池水面1000 m2，设 2 个采样点，超过 1000m2 的， 设 3 个采样点。(2) 鉴定时应在暑季游泳人员处于高峰期时进行。室内游泳池可根据情况 在其他季节进行，但亦应在游泳人员的高峰期。(3)

26、采样时，使用无菌玻璃瓶在水面下 30 cm 深处采集。再将水样加入有 适量鉴定合格的中和剂溶液(见 2.1.1.2.5 )的无菌玻璃瓶中。每点采 1 个样 本。每日采 2 次，一次在清晨消毒前(作为阳性对照)，一次在消毒后当日游泳 人员高峰时，作为消毒后样本。(4) 试验剂量选用说明书规定者。对样本，应检测细菌总数和大肠菌群数。 使用含氯消毒剂时，还应测定水中的剩余氯含量。检测方法按公共场所卫生 标准监测检验方法中的规定进行。(5) 消毒后样本检测结果，细菌总数应1000cfu/ml，大肠菌群18cfu/L (见游泳场所卫生标准)。(6) 检测按日重复 5 次。5 次全部符合上述要求者可判为合格。2.1.4.3 注意事项（1）在消毒前，对饮水消毒器与饮水过滤器，应用无菌水冲洗和通过 5 min10min，以消除内表面污垢并证明管路通畅。（2）水处理中，极易遭污染，故试验材料、采样口和操作应严格保持无菌要求， 否则可造成较大误差。（3）模拟试验所用多余的菌悬液、水样等，应消毒后方可排放。所用设备与物 品亦须进行彻底消毒后再进行下一次试验。