常用缓冲液配置.doc

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1、. .实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法： 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 参加约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量参加浓盐酸调节所需要的pH值。PH值浓HCl 7.4 约70ml 7.6 约60ml 8.0 约42ml 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2)10TE Buffe

2、r (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法： 1. 量取以下溶液，置于1 L烧杯中。1M TrisHCl BufferPH7.4，7.6，8.0100ml 500mM EDTA(PH8.0) 20ml 2. 向烧杯中参加约800 ml的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法： 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 参加约800 ml的去离子水

3、，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。4)3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法： 1.称量40.8g NaAc3H2O置于100-200ml烧杯中，参加月40ml的去离子水搅拌溶解 2.参加冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM

4、KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法： 1. 称量以下试剂，置于1 L烧杯中。NaCl 8gKCl 0.2gNa2HPO4 1.42gKH2PO4 0.27g2. 向烧杯中参加约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后参加去离子水将溶液定容至1 L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6)10 M醋酸铵组份浓度：10 M醋酸铵配制量：100 ml配制方法： 1. 称量77.1 g醋酸铵置于10

5、0200 ml烧杯中，参加约30 ml的去离子水搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。 3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。 4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7)苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法： 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的别离，而异戊醇那么有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇24 : 1混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。810 (W/V) SDS组份

6、浓度：10 (W/V)SDS配制量：100ml配制方法： 1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，参加约80ml的去离子水，68参加溶解 2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。92 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法： 1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。 2. 称取8 g NaOH小心地逐渐参加到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。102

7、.5 N HCl组份浓度：2.5 N HCl配制量：100 ml配制方法： 1. 在78.4 ml的去离子水中参加21.6 ml的浓盐酸11.6 N)，均匀混合。 2. 室温保存。115 M NaCl组份浓度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法： 1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，参加约800 ml的去离子水后搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。 3. 高温高压灭菌后，4保存。1120 (W/V) Glucose组份浓度：20 (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法： 1. 称取20 g Glucose置于100200 ml烧杯

8、中，参加约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。 3. 高温高压灭菌后，4保存。12Solution I(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HClpH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose配制量：1 L配制方法： 1. 量取以下溶液，置于1 L烧杯中。1M Tris-HClPH8.025ml 0.5M EDTAPH8.020ml 20Glucose1.11M45ml dH2O 910ml 2. 高温高压灭菌后，4保存。 3. 使用前每50 ml的Solution I中参加2 ml的RNase A20 mg/ml)。13S

9、olution II(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH，1(W/V)SDS配制量：500ml配制方法： 1.量取以下溶液，置于500ml烧杯中 10 SDS 50ml2N NaOH 50ml 2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀 3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌14Solution III(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法： 1. 称量以下试剂，置于500 ml烧杯中。KOAc 147g CH3COOH 57.5ml 2. 参加300 ml去离子水后搅拌溶解。 3. 加去离

10、子水将溶液定容至500 ml。 4. 高温高压灭菌后，4保存。150.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：称取186.1 g Na2EDTA2H2O，置于1 L烧杯中。 2. 参加约800 ml的去离子水，充分搅拌。 3. 用NaOH调节pH值至8.0约20 g NaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至1 L。 5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。 6. 室温保存。161 M DTT组份浓度：1 M DTT配制量：20 ml配制方法： 1. 称取3.09 g DTT，参加到50 ml塑料离心管内。

11、2. 加20 ml的0.01 M NaOAcpH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。 3. 适量分成小份后，-20保存。1710 mM ATP 组份浓度：10 mM ATP配制量：20 ml配制方法： 1. 称取121 mg Na2ATP3H2O，参加到50 ml塑料离心管内。 2. 加20 ml的25 mM Tris-HClpH8.0)，搅拌溶解。 3. 适量分成小份后，-20保存。一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺Spermidine: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L精胺Spermine：溶解3.48g精胺于足量的水

12、中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L乙酸胺ammonium acetate：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA：加100mg的牛血清蛋白组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶于9.5ml水中为减少变性，须将蛋白参加水中，而不是将水参加蛋白，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。1mol/L二硫苏糖醇DTT：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.6

13、5ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾potassium acetate：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾KCl：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠sodium acetate：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液0.5mol/L，混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HE

14、PES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH6.8-8.2，然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT异丙基硫代-D-半乳糖苷于10ml水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl26H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。20mg/ml蛋白酶Kproteinase K：将200mg的蛋白酶L参加到9.

15、5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase无DNaseDNasefree RNase：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中pH 5.0。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20贮存。配制过程中要戴手套5mol/L氯化钠NaCl：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠NaOH：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中磁力搅拌器搅拌，氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10SDS十二烷基

16、硫酸钠：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨糖醇Sorbitol：溶解36.4g山梨糖醇于足量水中使终体积为100ml。100三氯乙酸TCA:在装有500gTCA的试剂瓶中参加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。稀释液应在临用前配制2.5 Xgal5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺DMF,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。100Denhardt试剂Denhardts regent成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2聚蔗糖Ficoll，400型 2聚乙烯吡咯

17、烷酮PVP-40 2BSA组分V水2g2g2g加水至总体积为100ml 依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。10标准DNA连接酶缓冲液standard DNA ligase buffer粘端、平端连接成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺可选 0.5mg/ml BSA组分V可选水5ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mm

18、ol/L 贮液 0.5ml 10 mg/mL 贮液 2.25ml 将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20。100 mmol/L dNTP 溶液dNTP solutions可以购置到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液 2ul 100 mmol/L dTTP

19、贮液 12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20聚乙二醇 2.5mol/L 氯化钠水20g 50ml 5 mol/L 氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠二水 3mol/L 氯化钠水88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠二水和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。DEPC焦碳酸二乙酯处理水加100ul DEPC 于 10

20、0ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使剩余的DEPC失活。DEPC会与胺起反响，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺deionized formamide直接购置或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存防止氧化。磷酸缓冲液phosphate buffer按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠单碱和1mol/L 磷酸氢二钠双碱贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 m

21、ol/L 的磷酸二氢钠NaH2PO4H2O贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠Na2HPO4贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L磷酸二氢钠ml1mol/L磷酸氢二钠ml最终pH值8778508157757356856255655104503903302801231501852252653153754354905506106707206.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE用于悬浮和贮存DNA成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水1ml 1

22、mol/L Tris-HClpH7.4-8.0，25 200ul 0.5 mol/L EDTApH 8.0 98.8mlTris缓冲液Tris-HCl buffer将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH25下加一定量的浓盐酸11.6N，用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积mlpH8.6142128.53846566671.3769.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50Tris-乙酸TAE缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA水2

23、42g 57.1 ml的冰乙酸17.4 mol/L 200ml的0.5 mol/L EDTApH 8.0补足1L5Tris-硼酸TBE缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA水54g27.5g硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTApH 8.0补足1L染料1溴酚蓝bromophenol blue加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FFxylene cyanole FF溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙锭ethidiu

24、m bromide小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。凝胶上样液gel loading solutions6碱性凝胶上样液室温贮存成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA18聚蔗糖400型 0.15溴甲酚绿 0.25二甲苯青FF水300ul 10N 氢氧化钠 120ul 0.5mol/L EDTApH8.01.8g15mg25mg补足到10ml 6聚蔗糖凝胶上样液室温贮存成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15

25、聚蔗糖400型水1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTApH8.01.5g补足到10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液室温贮存成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25溴酚蓝 0.25二甲苯青FF15聚蔗糖400型水2.5ml 1溴酚蓝 2.5ml 1二甲苯青FF1.5g补足到10ml 6甘油凝胶上样液4贮存成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50甘油水1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTApH8.0 3ml 3.9ml 6蔗

26、糖凝胶上样液室温贮存成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40聚蔗糖水1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTApH8.04g补足到10ml 10十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液室温贮存成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2溴酚蓝 0.2二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1SDS50甘油水20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS5ml补足到10ml 三.常用培养基1 LB培养基将以下组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取

27、物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH1ml调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。SOB培养基将以下组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L 氯化钾2.5ml 用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。2SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖18g葡萄糖溶于足够水中，再用水

28、补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌。3TB培养基将以下组分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。42YT培养基将以下组分溶解在0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml 如果需要用1N NaOH1ml调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/

29、L。5YPD培养基将以下组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前参加20g琼脂粉。四.常用抗生素1氨苄青霉素ampicillin100mg/ml溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。2羧苄青霉素carbenicillin50mg/ml溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于

30、-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。3甲氧西林methicillin100mg/ml溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。4卡那霉素kanamycin10mg/ml溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。5氯霉素chloramphenicol25mg/ml溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以12.5u

31、g/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。6链霉素streptomycin50mg/ml溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。7萘啶酮酸nalidixic acid5mg/ml溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。8四环素tetracyyline10mg/ml溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。. .word.