常用pH缓冲液配置方法及注意事项.doc

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1、常用pH缓冲溶液的配制和pH值序号溶液名称配制方法pH值1氯化钾-盐酸13。0 ml 0。2 mol/L HCl 与25。0 ml 0。2 mol/L KCl混合均匀后，加水稀释至100 ml1。72氨基乙酸-盐酸在500 ml 水中溶解氨基乙酸150 g，加480 ml浓盐酸，再加水稀释至1L2.33一氯乙酸-氢氧化钠在200 ml 水中溶解2 g 一氯乙酸后,加40 g NaOH,溶解完全后再加水稀释至1 L2.84邻苯二甲酸氢钾-盐酸把25.0 ml 0。2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与6。0 ml 0。1 mol/L HCl混合均匀，加水稀释至100 ml3.65邻苯二甲酸氢钾氢氧

2、化钠把25.0 ml 0。2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与17。5 ml 0。1 mol/L NaOH混合均匀,加水稀释至100 ml4。86六亚甲基四胺-盐酸在200 ml水中溶解六亚甲基四胺40 g，加浓HCl 10 ml，再加水稀释至1 L5.47磷酸二氢钾氢氧化钠把25。0 ml 0.2 mol/L的磷酸二氢钾与23.6 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀,加水稀释至100 ml6.88硼酸-氯化钾-氢氧化钠把25.0 ml 0。2 mol/L的硼酸-氯化钾与4。0 ml 0。1 mol/L NaOH 混合均匀,加水稀释至100 ml8。09氯化铵氨水把0.1 mol/L

3、氯化铵与0.1 mol/L 氨水以2:1比例混合均匀9。110硼酸氯化钾-氢氧化钠把25。0 ml 0。2 mol/L 的硼酸氯化钾与43。9 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀,加水稀释至100 ml10.011氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸氯化钠与51.0 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀11。612磷酸氢二钠氢氧化钠把 50。0 ml 0.05 mol/L Na2HPO4与26.9 ml 0。1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml12.013氯化钾氢氧化钠把 25.0 ml 0。2 mol/L KCl与66

4、.0 ml 0。2 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml13。0一、常用溶液的配制（一)溶液配制注意事项1药品要有较好的质量 试剂分为优级纯（保证试剂,Guaranteed reagent,GR）、分析试剂（Antalytical reagent，AR）化学纯（Chemical pure，CP)和实验试剂（Laboratory reagent，LR)等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等.2药品称量要精确。3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.57.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途

5、时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水.配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质)，以防杂菌生长。（二)0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液11/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，AR）9。08g，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度(1000ml）。21/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4,A。R.）9。47g（或者Na2HPO42H2O 11.87g)用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml)。3按附表的比例，配制成不同p

6、H值的缓冲溶液。附表1 磷酸盐缓冲液配制法(单位：毫升）pH1/15Mol/L Na2HPO41/15Mol/L KH2PO4pH1/15Mol/L Na2HPO41/15Mol/L KH2PO45.88.092.07.166。623。45。99.990.17.272.028。06.012。287.87。376。823.26.115.384。77。380。819.26。218.681。47.584.115.96。322.477.67.687.013。06.426.773.37。789.410.66。531。868。27。891。58。56.637.562.57。993.26.86。743。55

7、6.58.894.75.36。849。650.48。195。84。26.955。444。68。297.03.07。061.138.98.498。02.0（三)0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法pH0.15Mol/L Na2HPO4(ml）0.15Mol/L NaH2PO4（ml）6.426.573。56。637。562.56。849。051。07。061。039.07.272。028.07。481。019。07.687.013。0Na2HPO42H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。Na2HPO412H2O分子量=358。22 0。1

8、5Mol/L溶液含53。7g/L。NaH2PO4H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20。7g/L.NaH2PO42H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23。4g/L。（四）0.2Mol/L PB缓冲液附表3 0。2mol/L PB缓冲液配制法pH0.2 Mol/L Na2HPO4(ml)0。2Mol/L NaH2PO4（ml）5.88.092.06。012.387.76.218.581.56.426.573。56.637。562.56.849.051。07。061。039。07。272。028.07.481。019.07。687。013。07.891。58.5

9、8。094。75。30。2Mol/L Na2HPO42 H2O溶液35。61g/LNa2HPO412 H2O溶液含71。64g/L0。2Mol/LNaH2PO4H2O溶液含27。60g/LNaH2PO42 H2O溶液含31。21g/L欲配0。1Mol/L PB缓冲液则在0。2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85的NaCl溶液即可.(五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水(PBS）(0。15Mol/L PH 7.2）NaCl 8.0gKCl 0。2gNa2HPO4 1.15g（如为Na2HPO412H2O，则为2.89g）KH2PO4 0。2g将上述试剂

10、依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115高压灭菌10min15min,存在4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。（六)硼酸盐缓冲液(Borate saline buffer）1硼酸（3BO3)0。2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。2硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19。07g加水至1 000ml。附表4 不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH0.05Mol/L硼砂（ml)0。2Mol/L硼酸（ml）pH0。05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）7.41。09.08.23。56.57.61。58

11、。58。44。55。57.82。08。08。76.04.08.03。07。09。08.02。0（七）巴比妥缓冲液1pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠 47.6g蒸馏水 3 000ml1.17N HCl 55。0ml(1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水) 将4。76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。 加1。17 N HCl 55ml。 用HCl调节pH到8。2，并加蒸馏水至4 265ml。2pH8。4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.84g巴比妥钠 10.30g加蒸馏水至 1 000.00ml3pH8。6 0。06Mol/L巴比妥缓冲

12、液巴比妥 1。66g巴比妥钠 12。76g加蒸馏水 1 000.00ml（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液 见表附表5附表5 0。2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法pH0.2Mol/LTris（ml）0。1Mol/LHCl（ml）pH0.2Mol/LTris(ml）0。1Mol/LHCl（ml）233723379.108.952558。067.902527.58。928。76257.57.967.822530.08.758。602510。57。877.732532。58.628.482512.57.777.632535.08。508。372515.57.667。522537。58。408.2725

13、17.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542。5（九）三羟甲基甲烷-盐酸缓冲液（TrisHCl缓冲液）不同pH，0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加ml0。1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）附表6 Tris-HCl缓冲液配制法pH0.2Mol/LTris（ml)0.1NHCl（ml)pH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl（ml）233723379.108。962558.057。902527。58.928。78257.57。967.822530。08.748。602510.07。877.732532。58.6

14、28。482512。57.777。632535.08.508.372515.07。667.522537。58.408.272517。57。547.402540.08.328。182520。07.367。222542.58。238.102522。57。207.052545.08.148。002525。025三羟甲基氨基甲烷（Tris)分子量=121.140。2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。0.1NHCl：取HCl8。6ml，加水至1 000ml。(十）0。5Mol/L pH9。5碳酸盐缓冲液NaHCO3 3.70gNa2CO3 0。60g溶于600.00

15、ml蒸馏水中即得。不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制.（十一)甘油磷酸缓冲液1配制pH8。0磷酸缓冲液0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml0。1N NaH2PO4 5.50ml混合即可29份甘油与1份pH8。0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液.用途：用于免疫荧光试验。(十二）Hanks液1贮存液NaCl 80。00gKCl 4。00gNa2HPO412 H2O 1.52gKH2PO4 0。60g葡萄糖 4.00g0.4%酚红液 50。00ml双馏水加至 100。00ml115高压灭菌15min,冰冻保存。2工作液贮存液 1份双馏水 9份115高压灭菌1

16、5min。临用时用灭菌的5.6NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色)。（十三)萘（钠）氏试剂（Nesslers reagent）配方1：氯化汞 6.0g碘化钾 12.4g20NaOH 30ml加蒸馏水至 100ml配方2：碘化汞 11。5g碘化钾 8g蒸馏水 50ml(完全溶解后)过滤，加20NaOH 50ml。用途:检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（Alsevers）液葡萄糖 2。05g柠檬酸钠 0。80g氯化钠 0。42g蒸馏水 100ml溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6。1，过滤，分装,10磅10min灭菌，4保存。（十五）青、链霉素混合液（简称SP液或双抗液)青霉素（40万

17、U) 5支链霉素（200万g） 1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中,混合后分装小瓶，置10-20冰箱保存备用（1万单位g/ml）。临用时,按1的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。(十六）洗液(清洁液）配方1：重铬酸钾 150g蒸馏水 300ml浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中,使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液.盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套,以保安全。洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾,又可重新使用。配方2：浓硫酸 50蒸馏水 50重铬酸钾 5%此为中等强度洗液。配方3：重铬酸钾 100g蒸馏水 1 000ml加热溶解,冷却后缓慢加入工业硫酸 100ml此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时,必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。