血清-谷氨酰转移酶(-GGT)速率法测定.docx

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1、血清丫一谷氨酰转移酶(y-GGT)速率法测定1.实验原理GGT催化谷氨酰基转移给受体的反应。本法以厂谷氨酰-3-竣基-对硝基苯胺为底物， 将底物上的谷氨酰基转移至受体双甘肽，生成对硝基苯胺和厂谷氨酰双甘肽。在405nm进 行吸光度检测，吸光度升高的速率与标本中GGT活力成正比。y-谷氨酰-3-竣基-对硝基苯胺+双甘肽GGT对硝基苯胺+厂谷氨酰双甘肽A2 .标本：3 . 1病人准备：无特殊。4 . 2类型:血清或EDTA血浆。5 .标本存放：室温可保存8小时；28c可保存3天；-20保存至少可稳定1周。6 .标本运输：常温条件下保存运输。7 .标本拒收标准：细菌污染的标本。8 .实验材料6. 1

2、试剂 利德曼厂GGT测定试剂盒(试剂1 6X64ml试剂2 6X 16ml)6. 1. 1试剂组成试剂1 ( R1)：Tris缓冲液pH8.251OOmmo1/L甘氨酰甘氨酸150mmo1/L试剂2 (R2)：6.6.6.广谷氨酰-3-竣基-对硝基苯胺1.2试剂准备：试剂为即用式。1. 3试剂稳定性与贮存：试齐1J保存于2.9mmol/L28 ,若无污染,可稳定至失效期。1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质，不能继续使用。6. 1. 5注意事项：试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘 膜。应采取必要的预防措施

3、使用试剂。6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见 生化检验校准品和质控品.SOP文件。6 . 3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AU1OOO生化分析仪8 .操作步骤8. 1项目基本参数：参见AU1OOO生化分析仪项目测定参数.SOP文件8 . 2仪器操作步骤：参见AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与n质控做为未知标本进行分 析，以2s为质控警告限，3s为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内 质控操作规

4、程.SOP文件。11 .计算方法：以TruCal U复合校准品GGT校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围 内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行GGT活力检测，可以直接使用 A/min均值乘以计算因子得到结果， 但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算GGT活力的计算因子见下表： A/minX 因子=GGT 活力U/L底物起始的反应（37） 样品起始的反应（37）405nm1421115812 .参考值范围3 4：女性7-32U/L；男性11-49U/L。参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实 验室应建立自己的参考值。13 .临床意义：厂谷氨

5、酰转移酶（GGT）又称厂谷氨酰转肽酶。存在于肝脏和胆汁中，是 肝胆疾病最敏感的指示物。因为该酶对肝胆疾病具有高阴性预期值，因此厂谷氨酰转移酶 的检测被广泛地用于排除肝胆疾病。结合丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、胆碱 酯酶等其它酶，厂谷氨酰转移酶对于肝脏疾病的鉴别诊断非常有价值。14 .操作性能15 . 1 线性范围：2-500U/Lo14. 2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000批内精密度小于3%, 总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n = 20X(U/L)S(U/L)CV (%)批间精密度n = 20X(U/

6、L)S(U/L)CV (%)样品139. 90. 992. 48样品141. 50. 621. 49样品273. 60. 851. 16样品272. 30. 610. 85样品32061. 320. 64样品32040. 740. 3614.3 方法学比较：本公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对78个样品进行GGT 活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=l. 00x + l. OOU/L； r = 0.999。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为2U/L。14. 5病人结果可报告范围：2-500U/Lo15 .超出范围结果处理：本法对GGT活力检测的最大500U/L,

7、当样品测定值超过上限时， 应将样品用9g/L氯化钠溶液作1 + 5稀释，重新测定，结果乘以6。16 .病危报警值的处理17 .方法局限性17 . 1本法对GGT活力检测的最大500U/L,当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯 化钠溶液作1 + 5稀释，重新测定，结果乘6。18 . 2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度W1704(iniol/L ,胆红素浓度 684pimo 1/L,血红蛋 白浓度(4. OOg/L,甘油三酯浓度422. 6mmol/L时没有观察到干扰。19 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。20 .参考文献1. Thomas L. Clinical L

8、aboratory Diagnostics. 1， ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.80-6.2. Per s i jn JP, van der Silk W. A new method for the determination of gamma-glutamy11ransferase in serum. J Clin Chem Clin Biochem 1976 ; 14:421-7.3. Szasz G.Gamma-Glutamy1 transpept i dase.In: Bergmeyer HU. Methoden derenzymat i schen Analyse. Weinheim: Ver lag Chemi e, 1974.p. 757.4. F i schbach F, Zawta B. Age-dependent reference limits of several enzymes in plasma at different measuring temperatures. Klin Lab 1992;38:555-61.20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定 执行。