细胞融合技术课件.ppt

《细胞融合技术课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞融合技术课件.ppt（48页珍藏版）》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、 细胞工程是指应用细胞生物学和分细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过子生物学的原理和方法，通过细胞水平细胞水平或或细胞器水平细胞器水平上的操作，按照人们的意上的操作，按照人们的意愿来愿来改变改变细胞内的细胞内的遗传物质遗传物质或或获得细胞获得细胞产品产品的一门综合科学技术。的一门综合科学技术。什么叫细胞工程？什么叫细胞工程？按操作按操作对象分对象分植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程应用的原理和方法应用的原理和方法研究的水平研究的水平研究的目的研究的目的细胞生物学和细胞生物学和细胞生物学和细胞生物学和分子生物学分子生物学分子生物学分子生物学细胞水平或细细胞水平或

2、细细胞水平或细细胞水平或细胞器水平胞器水平胞器水平胞器水平按照人们的意愿来改按照人们的意愿来改按照人们的意愿来改按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质变细胞内的遗传物质变细胞内的遗传物质变细胞内的遗传物质或获得细胞产品或获得细胞产品或获得细胞产品或获得细胞产品概念：概念：回忆：回忆：1 1、植物组织培养的大致过程包括哪几个阶段？、植物组织培养的大致过程包括哪几个阶段？离体的离体的器官、器官、组织或组织或细胞细胞脱分化脱分化脱分化脱分化（又叫去分化）（又叫去分化）（又叫去分化）（又叫去分化）愈伤愈伤组织组织再分化再分化再分化再分化根、根、芽芽植植物物体体2 2、植物组织培养技术的理论基础是什么？、

3、植物组织培养技术的理论基础是什么？植物细胞具有全能性植物细胞具有全能性一一.细胞融合技术细胞融合技术概念：两个或两个以上的概念：两个或两个以上的同种同种或或异种异种细胞细胞 融合成为一个细胞的过程融合成为一个细胞的过程阅读课本第阅读课本第30-3130-31页内容，回答问题：页内容，回答问题：1.1.什么叫细胞融合技术？什么叫细胞融合技术？2.2.常用的人工诱导细胞融合的方法有哪几种？哪一种重常用的人工诱导细胞融合的方法有哪几种？哪一种重复性强，对原生质体伤害小，方法简单，可控性强？复性强，对原生质体伤害小，方法简单，可控性强？用人工方法诱导细胞融合，并在一定条件下使融合细胞用人工方法诱导细胞

4、融合，并在一定条件下使融合细胞分化再生，形成新物种或新品种的过程。分化再生，形成新物种或新品种的过程。物理法物理法：离心、振动、：离心、振动、电刺激（伤害小，可控性强）电刺激（伤害小，可控性强）化学法化学法：用聚乙二醇（）诱导：用聚乙二醇（）诱导灭活的病毒灭活的病毒：仙台病毒、：仙台病毒、疱疹病毒疱疹病毒等等（适合动物）（适合动物）动物细胞融合（细胞杂交）动物细胞融合（细胞杂交）2个或多个动个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程物细胞结合形成一个细胞的过程细胞细胞A细胞细胞B杂种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒新城鸡瘟病毒融合

5、后形成的融合后形成的单核单核细胞称为细胞称为杂交杂交细胞细胞用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核 细胞电融合仪二、二、植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术与作物育种与作物育种因为不同种生物之间存在因为不同种生物之间存在着着生殖隔离生殖隔离，所以用传统，所以用传统的有性杂交方法是不可能的有性杂交方法是不可能做到这一点的。做到这一点的。于是，这些科学家试图用这两种植物的体于是，这些科学家试图用这两种植物的体细胞进行杂交，来实现这一美妙的设想。细胞进行杂交，来实现这一美妙的设想。这幅番茄这幅番茄这幅番茄这幅番茄马铃薯图利用传统马铃薯

6、图利用传统马铃薯图利用传统马铃薯图利用传统有性杂交方法能实现吗？为什有性杂交方法能实现吗？为什有性杂交方法能实现吗？为什有性杂交方法能实现吗？为什么？么？么？么？“Potamato”1 1你认为两个来自不同植物的体细胞完成融合，遇你认为两个来自不同植物的体细胞完成融合，遇到的第一个障碍是什么？到的第一个障碍是什么？2 2有没有一种温和的去壁方法呢？有没有一种温和的去壁方法呢？3 3为什么两个原生质体能发生融合，这与细胞膜的为什么两个原生质体能发生融合，这与细胞膜的什么特性有关？什么特性有关？4 4、把原生质体放在一起能自然融合吗？、把原生质体放在一起能自然融合吗？5 5如果两个来源不同的原生质

7、体发生了融合，下一如果两个来源不同的原生质体发生了融合，下一步该做何处理？步该做何处理？6 6如何将杂种细胞培育成杂种植株？如何将杂种细胞培育成杂种植株？请思考：请思考：杂交的两个细胞杂交的两个细胞用纤维素酶、果胶酶处用纤维素酶、果胶酶处理细胞壁理细胞壁原生质体、原生质体、经离心、振经离心、振动、电刺激动、电刺激用聚乙二醇用聚乙二醇（）（）诱导诱导融合后的原生质体融合后的原生质体再生细胞壁再生细胞壁杂种细胞杂种细胞脱分化脱分化细胞分裂细胞分裂愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株再分化再分化（植物体细胞（植物体细胞融合完成的标融合完成的标志）志）植植物物细细胞胞融融合合植物植物组织组织培养培养白菜白

8、菜甘蓝甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝“白菜甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝”同普通白菜相比，具有生同普通白菜相比，具有生同普通白菜相比，具有生同普通白菜相比，具有生长期短、耐热性强和易于贮藏等优点。长期短、耐热性强和易于贮藏等优点。长期短、耐热性强和易于贮藏等优点。长期短、耐热性强和易于贮藏等优点。植物体细胞杂交意义？p33细胞融合技术可以避免细胞融合技术可以避免受精过程，受精过程，在在亲缘关系亲缘关系较远的物种间实现基因较远的物种间实现基因转移，创造出自然界没转移，创造出自然界没有的新物种。有的新物种。未解决的问题未解决的问题：未能让杂种植物按照人们的需要未能让杂种植物按照人们的需要 表现出亲代的优良。表

9、现出亲代的优良。为什么为什么“番茄番茄马铃薯马铃薯”超级杂种植株没有如超级杂种植株没有如科学家所想像的那样，地上长番茄、地下结马科学家所想像的那样，地上长番茄、地下结马铃薯？铃薯？主要原因是：生物基因的表达不是孤立的，它主要原因是：生物基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的，所以马铃薯们之间是相互调控、相互影响的，所以马铃薯番茄杂交植株的细胞中虽然具备两个物种的番茄杂交植株的细胞中虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达受到相互干遗传物质，但这些遗传物质的表达受到相互干扰，不能再像马铃薯或番茄植株中的遗传物质扰，不能再像马铃薯或番茄植株中的遗传物质一样有序表达，杂交植株不

10、能地上长番茄、地一样有序表达，杂交植株不能地上长番茄、地下结马铃薯就是很自然的了。下结马铃薯就是很自然的了。1.1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？2.2.2.2.抗体是如何产生的？抗体是如何产生的？三三.动物细胞融合与动物细胞融合与单克隆抗体单克隆抗体读下面一段文字资料，思考以下问题：读下面一段文字资料，思考以下问题：长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清从动物血清中分离出所需抗体的方法中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得。用这种方法获得的抗体，不仅的抗体，不仅产量低产量

11、低，而且抗体的，而且抗体的特异性差，特异性差，纯度低，反应不够灵敏纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在。人们发现，在动物动物发生免疫反应的过程中，体内的发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞可以细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体产生多达百万种以上的特异性抗体，但是，但是每每个个B B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须。要想获得大量的单一抗体，必须用单个用单个B B细胞进行无性繁殖，即克隆细胞进行无性繁殖，即克隆。1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念2、怎样才能获得单克

12、隆抗体？、怎样才能获得单克隆抗体？提示提示1 1：仅用细胞培养技术可行吗？：仅用细胞培养技术可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B细胞产生抗体的能力细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？用单个用单个B B细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。就叫做单克隆抗体。（一）（一）单克隆抗体单克隆抗体概念概念1 1、

13、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？单克隆抗体单克隆抗体问题讨论问题讨论提示：提示：1.1.什么样的细胞可以产生抗体？什么样的细胞可以产生抗体？2.2.什么样的细胞可以无限增殖？什么样的细胞可以无限增殖？2 2、瘤细胞和癌细胞有何区别？、瘤细胞和癌细胞有何区别？共同点：两者都有无限增殖的能力共同点：两者都有无限增殖的能力不同点：瘤细胞不能转移不同点：瘤细胞不能转移 设计方案：设计方案：一个一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖杂种细胞杂种细胞单克隆抗体单克隆抗体实验目的实验目的:制

14、备单克隆抗体制备单克隆抗体.实验原理：实验原理：B B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。体又能无限增殖。实验材料：小白鼠实验材料：小白鼠实验器材：培养皿、针筒等等。实验器材：培养皿、针筒等等。实验过程：如下页实验过程：如下页根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的勒设计的 实验方案实验方案:B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合（只考虑两两融合）（只考虑两两融合）培养液中细胞

15、有几培养液中细胞有几种类型？融合细胞种类型？融合细胞几种类型？几种类型？骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-B-B淋巴细胞淋巴细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞多种多种杂交细胞杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞检验阳性细胞单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养（二）、单克隆抗体的制备过程（二）、单克隆抗体的制备过程第第第第1 1 1 1次筛选目的：得到杂次筛

16、选目的：得到杂次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。第第第第2 2 2 2次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细生所需抗体的杂交瘤细生所需抗体的杂交瘤细生所需抗体的杂交瘤细胞。胞。胞。胞。该细胞继承该细胞继承双亲细胞双亲细胞的遗传特性，既能的遗传特性，既能产生专产生专一抗体一抗体又能又能无限增殖无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高腹腔注射法腹腔注射法免

17、疫小鼠免疫小鼠培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白选择培养基上培养选择培养基上培养专一抗体专一抗体检验阳性检验阳性专一抗体专一抗体检验阳性检验阳性注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养单克隆抗体单克隆抗体克隆杂交细胞克隆杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞专一抗体，检验阳性细胞多种杂交细胞多种杂交细胞杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？本过程利用的那些技术？本过程利用的那些技术？动物细胞融合技术动物细胞融合技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术是否注射抗原是否注射抗原（只考虑

18、两两融合）培养（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几液中细胞有几种类型？几种融合细胞？种融合细胞？两次筛选的目的两次筛选的目的分别是什么？分别是什么？（二）（二）、单克隆抗体制备过程、单克隆抗体制备过程与传统制备的抗体相与传统制备的抗体相比具有什么特点？比具有什么特点？诊断疾病诊断疾病（识别作用，（识别作用，如同位素标记单克隆抗如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）管畸形等）（三）（三）单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，也可运主要用于癌症治

19、疗，也可运载药物，如载药物，如“生物导弹生物导弹”）（导向作用，导向作用，作为载体，作为载体，生物导弹生物导弹=单克隆抗体单克隆抗体+药物，药物，治疗肿瘤）治疗肿瘤）（位置准确、疗效高、副作用小）（位置准确、疗效高、副作用小）（位置准确、疗效高、副作用小）（位置准确、疗效高、副作用小）诊断乳腺癌单克隆抗体诊断乳腺癌单克隆抗体小结小结两个过程两个过程动物细胞动物细胞融合融合过程过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程“一二三一二三”二次筛选二次筛选筛选杂交瘤细胞筛选杂交瘤细胞、能能产生产生所需所需抗体的杂交瘤细胞抗体的杂交瘤细胞一个新细胞一个新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞三个优势三个优势产量大、特异性产

20、量大、特异性强、强、灵敏度高灵敏度高(理化性质单一理化性质单一)的优势的优势单克隆抗体单克隆抗体2 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？杂交或融合过程有什么影响？3 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？方法有哪些？离心、振动、电激等物理方法；离心、振动、电激等物理方法；PEGPEG等化学方法等化学方法问题讨论问题讨论动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。须去除细胞壁和再生出细胞壁。、植物体细胞杂交最终得到的是完

21、整的植物个体，、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能，只能得到杂交细胞不能，只能得到杂交细胞4 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？有其他方法吗？能能 ，还可以利用灭活的病毒（生物还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导方法）进行诱导问题讨论问题讨论、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？原理是否相同？相同，都是细胞膜的流动性相同，都是细胞膜的流动性问题讨论问题讨论7 7、动物细胞融合有什么意义？、动物细胞融

22、合有什么意义？6 6、为什么要用、为什么要用灭活灭活的病毒？的病毒？病毒一般对生物体是有伤害的。病毒一般对生物体是有伤害的。仙台病毒仙台病毒物理或物理或物理或物理或化学方法化学方法化学方法化学方法丧失感染活性丧失感染活性保留融合活性保留融合活性突破了有性杂交方法的局限，突破了有性杂交方法的局限，使远源杂交成为可能。使远源杂交成为可能。有有何何同同？不不同同？动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较细细胞工程胞工程植物体植物体细细胞胞杂杂交交动动物物细细胞融合胞融合实质实质内容内容改改变遗传变遗传物物质质、产产生新的性状

23、，生新的性状，获获得得细细胞胞产产品品(使后代具有双使后代具有双亲亲的的特性特性)理理论论基基础础细细胞膜的流胞膜的流动动性性;植物植物细细胞全能性胞全能性细细胞膜的流胞膜的流动动性性;细细胞增殖胞增殖诱导诱导手段手段物理法：离心、振物理法：离心、振动动、电电激激化学法：聚乙二醇化学法：聚乙二醇物理法：离心、振物理法：离心、振动动、电电激激化学法：聚乙二醇化学法：聚乙二醇生物法：生物法：灭灭活的病毒活的病毒诱导过诱导过程程去去细细胞壁胞壁(纤维纤维素素酶酶、果胶、果胶酶酶)原生原生质质体融合体融合(获获得得杂杂种原生种原生质质体体)植物植物细细胞培养胞培养(获获得植株得植株)获获得分离的得分离

24、的单单个个动动物物细细胞胞(胰蛋白胰蛋白酶酶处处理理)诱导诱导融合融合动动物物细细胞培养胞培养(细细胞胞产产品品)应应用用获获得白菜得白菜甘甘蓝蓝等等杂杂种植物种植物主要用于主要用于单单克隆抗体的制克隆抗体的制备备(杂杂交瘤交瘤细细胞胞)1.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案抗体实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案

25、的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50B骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群A体外培养体外培养注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔C体外培养体外培养不能，未对小鼠免疫处理不能，未对小鼠免疫处

26、理2.人人CD20单克隆抗体是治疗一些恶性肿瘤的特效药物，目前主要是通过培养单克隆抗体是治疗一些恶性肿瘤的特效药物，目前主要是通过培养哺乳动物细胞的方式生产。我国科学家已哺乳动物细胞的方式生产。我国科学家已 培育出世界上第一头转入了培育出世界上第一头转入了CD20抗体基因的转基因牛，可以从它产抗体基因的转基因牛，可以从它产 的牛奶中直接提取的牛奶中直接提取CD20抗体。这项技术抗体。这项技术成熟后，有望使这一特效药成熟后，有望使这一特效药 的生产成本降至现在的的生产成本降至现在的1/10。请回答：。请回答：(1)单克隆抗体的制备过程需先将单克隆抗体的制备过程需先将_和和 _融合，这一过程的诱导

27、方法与植物体细胞杂融合，这一过程的诱导方法与植物体细胞杂交不同的是交不同的是_。(2)动物细胞培养需要在含动物细胞培养需要在含_混合气体的培混合气体的培养箱中进行，培养液中通常需加入养箱中进行，培养液中通常需加入_等一些天等一些天然成分。然成分。(3)转基因技术的核心是转基因技术的核心是_。该过程。该过程用到的工具酶有用到的工具酶有 _和和_。经过免疫的经过免疫的B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞用灭活的病毒诱导用灭活的病毒诱导95%O2加加5%CO2血清、血浆血清、血浆基因表达载体的构建基因表达载体的构建限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶(限制酶限制酶)DNA连接酶连接酶3.野生马铃薯品种

28、的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗野生马铃薯品种的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗寒能力，但块茎不能食用。俄、德、芬兰专家共同做实验研究，寒能力，但块茎不能食用。俄、德、芬兰专家共同做实验研究，用野生马铃薯与马铃薯的体细胞进行杂交，培育出了生活能力强用野生马铃薯与马铃薯的体细胞进行杂交，培育出了生活能力强的杂交系马铃薯。据图分析回答问题：的杂交系马铃薯。据图分析回答问题：(1)过程植物细胞原生质体的分离需经过酶解，其中过程植物细胞原生质体的分离需经过酶解，其中“酶解酶解”所用的酶应该包括所用的酶应该包括_。(2)过程可用聚乙二醇过程可用聚乙二醇(PEG)，其目的是，其目的是_。纤维素酶

29、、果胶酶纤维素酶、果胶酶诱导原生质体融合诱导原生质体融合(3)请用文字和箭头表示出请用文字和箭头表示出技术过程的实验流程：技术过程的实验流程：_。由此过程可以看出植物细胞有形成完整个体的可能性，这是由此过程可以看出植物细胞有形成完整个体的可能性，这是_的表现。的表现。(4)在培养基上培养一段时间后，原生质体会再生出细胞壁。可在培养基上培养一段时间后，原生质体会再生出细胞壁。可以取样，通过以取样，通过_实验来鉴别细胞实验来鉴别细胞壁是否已经再生。壁是否已经再生。(5)请说明运用植物体细胞杂交法的最大好处：请说明运用植物体细胞杂交法的最大好处：_。融合细胞融合细胞 愈伤组织愈伤组织 幼苗幼苗植物细

30、胞具有全能性植物细胞具有全能性植物细胞的质壁分离与复原植物细胞的质壁分离与复原可以克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍可以克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍4下图为细胞融合的简略过程，请据图回答：下图为细胞融合的简略过程，请据图回答：(1)若若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用是植物细胞，在细胞融合之前已用_处理，除去处理，除去_；A、B到细胞到细胞C的过程中，常用的物理方法是的过程中，常用的物理方法是_。融。融合完成的标志是合完成的标志是_.(2)若若A、B是植物细胞，则形成的是植物细胞，则形成的D细胞还要应用细胞还要应用_技术把技术把D培养培养成植株。成植株。(3)若若A、B是动物细胞，一般取

31、自是动物细胞，一般取自_,然后然后用用_使其分散开来，使其分散开来，A、B到到C的过程中，常用的不同于植物细胞的的过程中，常用的不同于植物细胞的手段是手段是_，所形成的，所形成的D称为称为_(4)若该过程是制备单克隆抗体，若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠为小鼠B淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前，淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了小鼠已被注射了_，注射后小鼠身体产生了相应的，注射后小鼠身体产生了相应的_，生成了，生成了_。图中。图中B为为_。(5)若该过程仍是制备单克隆抗体，在若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到到C的过程中，所形成的的过程中，所形成的C有有_种，用来培养的种，

32、用来培养的D的细胞应该是的细胞应该是_。从中选择出它的方法是。从中选择出它的方法是_培养，获得培养，获得D后，常用的培养方法是后，常用的培养方法是_和和_。纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶细胞壁细胞壁电刺激、振动、离心电刺激、振动、离心 产生细胞壁产生细胞壁植物组织培养植物组织培养动物胚胎或幼龄动物的器官或组织动物胚胎或幼龄动物的器官或组织胰蛋白酶胰蛋白酶灭活的病毒诱导灭活的病毒诱导杂种细胞杂种细胞效应效应B细胞细胞 抗原抗原抗体和记忆细胞抗体和记忆细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞3杂交瘤细胞杂交瘤细胞用特定的选择培养基用特定的选择培养基培养基中培养培养基中培养 小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖(1)AB

33、(2)CD5.（09山东）人类在预防与诊疗传染性疾病中，经常使用疫苗和山东）人类在预防与诊疗传染性疾病中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病病原体为抗体。已知某传染性疾病病原体为RNA病毒，该病毒表面病毒，该病毒表面A蛋蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：请回答：请回答：（1）过程）过程代表的是代表的是_。（2）过程）过程构建构建A基因表过载体时，必须使用基因表过载体时，必须使用_和和 _两种工具酶。两种工具酶。（3）过程）过程采用的实验技术是采用的实验技术是_，获得的，获得的X是是_。（4）对健康人进行该传染病免疫预防时

34、，可选用图中基因工程生）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的产的 _ 所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，从疑所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行似患者体内分离病毒，与已知病毒进行_比较；比较；或用图中的或用图中的_进行特异性结合检测。进行特异性结合检测。逆转录逆转录限制酶(限制性内切酶）DNA连接酶细胞融合杂交瘤细胞 A蛋白 核酸（基因）序列抗A蛋白的单克隆抗体6.(09年宁夏年宁夏)回答下列有关动物细胞培养的问题：回答下列有关动物细胞培养的问题：（1）动物细胞培养过程中。当贴壁细胞分裂生长到细胞表面）动物细胞培养过程中。当贴

35、壁细胞分裂生长到细胞表面_时，时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞_。此时，瓶壁上形成的。此时，瓶壁上形成的细胞层数是细胞层数是_。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是可用的酶是_。（2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现_现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成发生改变而变成_细胞，该种细胞的黏着性细胞，该种细胞的黏着性_，细

36、胞膜表面蛋白质，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量（糖蛋白）的量_。（3）现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活）现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是细胞不染色，原因是_（4）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到_期期的细胞用显微镜进行观察。的细胞用显微镜进行观察。（5）在细胞培养过程中，通常在）在细胞培养过程中，通常在_条件下保存细胞。因为条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中在这种条件下，细胞中_的活性降低，细胞的活性降低，细胞_的速率降低。的

37、速率降低。（6）给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为）给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作机体把移植的皮肤组织当作_进行攻击。进行攻击。相互接触相互接触单层（一层）单层（一层）接触抑制接触抑制胰蛋白酶胰蛋白酶衰老甚至死亡衰老甚至死亡不死性不死性降低降低减少减少 由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色进入活细胞内，故活细胞不能着色中中冷冻（超低温、液氮）冷冻（超低温、液氮）新陈代谢新陈代谢酶酶抗原抗原7.（10福建卷）福建卷）红细胞生成素红细

38、胞生成素(EPO)是体内促进是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，目前临来源极为有限，目前临床上使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技床上使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素术生产的重组人红细胞生成素(rhEPO)，其简要，其简要生产流程如右图。请回答：生产流程如右图。请回答：(1)图中图中所指的是所指的是_技术。技术。(2)图中图中所指的物质是所指的物质是_，所指的物质是所指的物质是_。(3)培养重组培养重组CHO细胞时，为便于清除代谢产物，细胞时，为便

39、于清除代谢产物，防止细胞产物积累对细胞自身造成危害，应定期防止细胞产物积累对细胞自身造成危害，应定期更换更换_。(4)检测检测rhEPO的体外活性需用抗的体外活性需用抗rhEPO的单克的单克隆抗体。分泌该单克隆抗体的隆抗体。分泌该单克隆抗体的_细胞，可细胞，可由由rhEPO免疫过的小鼠免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成。细胞融合而成。PCR PCR mRNAmRNArhEPOrhEPO培养液培养液杂交瘤杂交瘤第一节动物细胞培养第一节动物细胞培养 知识能力化知识能力化1为了使用于培养的动物组织细胞分散开以便配制成一定浓度为了使用于培养的动物组织细胞分散开以便配制成

40、一定浓度的细胞悬浮液，选取来的动物组织应选用下列哪种物质处理的细胞悬浮液，选取来的动物组织应选用下列哪种物质处理A.胃蛋白酶胃蛋白酶 B.胰蛋白酶胰蛋白酶 C.盐酸盐酸 D.胰脂肪酶胰脂肪酶2下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是 （）A培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等清等B原代培养的细胞一般传至原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞代左右便会出现生长停滞C动物细胞培养一般能够传到动物细胞培养一般能够传到4050代，但其遗传物质发生代，但其遗传物质发生了改变了改变

41、D动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞3动物细胞培养的细胞来自于动物细胞培养的细胞来自于（）A任何个体的细胞任何个体的细胞 B只能取自幼龄动物的组织细胞只能取自幼龄动物的组织细胞C只能只能取自动物胚胎细胞取自动物胚胎细胞 D胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞BCD4动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是（）A.动物细胞培养动物细胞培养 B.动物细胞融合动物细胞融合 C.单克隆杭体单克隆杭体 D.胚胎、核移植胚胎、核移植5在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件

42、下无限在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称之为制地传代下去，这种传代细胞称之为:A原代培养原代培养 B传代培养传代培养 C细胞株细胞株 D细胞系细胞系6卫生部卫生部2005年年4月月6日发布了苏丹红危险性报告评日发布了苏丹红危险性报告评估，报道中提到苏丹红一号是一种人工色素估，报道中提到苏丹红一号是一种人工色素(工业染料工业染料)，它在人体内代谢生成相应的胺类。科研人员欲采用一，它在人体内代谢生成相应的胺类。科研人员欲采用一定的技术手段探究苏丹红是否对人体有危害，你认为采定的技术手段探究苏丹红是否对人体有危害，你认为采取下列哪种技术手段最合适：取下列哪种技

43、术手段最合适：A动物细胞融合动物细胞融合 B动物细胞培养动物细胞培养 C胚胎移植胚胎移植 D核移植核移植ADB7下列有关动物细胞培养的叙述，不正确的是下列有关动物细胞培养的叙述，不正确的是A.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织组织B.将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞单个细胞C.在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液制成悬浮液D.动物细胞培养只能传动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞就会代左右，所培养的细胞

44、就会衰老死亡衰老死亡8用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞的组织细胞（）A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B具有更强的全能性具有更强的全能性C.取材十分方便取材十分方便 D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强DD第第二二节节植物组织植物组织培养培养 知识能力化知识能力化1 1用高度分化的植物细胞、组织和器官进行组织培养可以形成用高度分化的植物细胞、组织和器官进行组织培养可以形成愈伤组织，下列叙述错误的是（愈伤组织，下列叙述错误的是（）A.A.

45、该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的B.B.该愈伤组织的细胞没有全能性该愈伤组织的细胞没有全能性C.C.该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成D.D.该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状结构该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状结构2.2.要将胡萝卜韧皮部细胞培养成完整植株，不需要（要将胡萝卜韧皮部细胞培养成完整植株，不需要（）A A具有完整细胞核的细胞具有完整细胞核的细胞 B B离体状态离体状态C C导入外源基因导入外源基因 D D一定的营养物质和激素一定的营养物质和激素3.3.甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种

46、退化。目前生产上采用甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过种的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的（程不涉及细胞的（）A A有丝分裂有丝分裂 B B分化分化 C C减数分裂减数分裂 D D全能性全能性BCC4.4.下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是（下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是（）A A培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗

47、透压B B培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化C C离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织D D同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同因相同5.5.将基因型为将基因型为AaBbAaBb的水稻的水稻(具有具有2424条染色体条染色体)的叶肉细胞通过无菌的叶肉细胞通过无菌操作接入含有全部营养成分的培养基的试管中，在一定条件下形操作接入含有全部营养成分的培养基的试管中，在一定条件下形成试管幼苗

48、，其过程如下图所示：成试管幼苗，其过程如下图所示：(1)(1)图中的图中的11叫叫_，图中的，图中的22_。(2)(2)在在33过程最重要的两种植物激素是过程最重要的两种植物激素是_、_。(3)(3)如果如果44是无病毒植株，则水稻的细胞应选用是无病毒植株，则水稻的细胞应选用_或或 _细胞。其培养成的植株的基因型为细胞。其培养成的植株的基因型为_。D脱分化脱分化再分化再分化生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素根尖根尖茎尖茎尖AaBbAaBb(4)(4)如果某种细胞选用的是水稻花粉细胞，则如果某种细胞选用的是水稻花粉细胞，则44称为称为_。基因型可能是。基因型可能是_。植株。植株特点为特点为_，需用

49、，需用_处理，处理，使其恢复正常体细胞染色体数才可育，其基因型为使其恢复正常体细胞染色体数才可育，其基因型为_。(5)(5)如果此过程是为了生产水稻的人工种子，则人工种皮如果此过程是为了生产水稻的人工种子，则人工种皮包裹的是包裹的是 _。单倍体植物单倍体植物ABAB、AbAb、aBaB、abab（矮小瘦弱）（矮小瘦弱）高度不育高度不育秋水仙素秋水仙素AABBAABB、AAbbAAbb、aaBBaaBB、aabbaabb3 3 胚状体胚状体单：一个杂交瘤细胞克隆：该细胞增殖分化为相同的细胞群抗体：该细胞群产生的抗体。特点：特异性强 灵敏度高单克隆抗体制备单克隆抗体制备应用了哪些技术手段杂交瘤技术的基本原理杂交瘤技术的基本原理主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电激）荡、电激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性用途用途诱导方法诱导方法步骤步骤融合的原理融合的原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较