制药工程实验实验.ppt

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1、2009级生物技术制药工程实验可可见分光光度法测定大见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量山楂丸中总黄酮的含量实验实验一一一、目的要求一、目的要求1、掌握用分光光度法测定药物中总黄酮含量。2、掌握可见分光光度计的使用方法。二、基本原理二、基本原理 大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成，主要功能为开胃消食，其中山楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维生素。黄酮类化合物具有邻二酚羟基，或3，5位羟基结构，可与铝盐、铅盐、镁盐等金属盐类试剂反应，生成有色配合物，可用可见分光光度法测定其含量。本实验利用黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中，与Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物（max=510nm），从而用可见分光

2、光度法（比色法）测定大山楂丸中总黄酮的含量。三、仪器与试药三、仪器与试药1、可见分光光度计、分析天平、回流提取器。2、乙醇（A.R）、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。3、芦丁（中国药品生物制品检定所）。4、大山楂丸（市售品）。四、操作步骤四、操作步骤1、标准液的配制：、标准液的配制：精密称取芦丁对照品20mg，置100ml容量瓶中，加95%乙醇50ml使溶解，然后加50%乙醇稀释至刻度，即得0.2mg/ml的对照品溶液。2、标准曲线的制备、标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于10ml容量瓶中，各加50%乙醇

3、溶液使成5ml，精密加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加入10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，再放置6分钟，加入1%氢氧化钠溶液4ml，分别用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。以第一瓶作空白，用可见分光光度计在510nm处测其吸收度，作A-C标准曲线（或计算其回归方程）。3、样品液的制备：、样品液的制备：精密称取干燥的大山楂丸9.0g，置回流提取器中，用95%乙醇125ml回流提取1.5小时，提取两次，合并两次滤液，减压浓缩至150ml即得。4、含量测定：、含量测定：精密量取提取液1ml，按上述标准曲线制备方法进行测定，并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。5、芦丁的定性反应：、芦丁的定性反应：取上述提取溶液2ml，加少许镁粉，再加5滴浓盐酸，注意观察颜色变化。五、注意事项五、注意事项1、实验证明，提取时间为1.5小时，提取两次，基本能提尽样品中黄酮。2、实验证明，样品显色后，在30分钟内测定总黄酮含量，无明显改变，超过30分钟，含量有所改变。六、思考题六、思考题1、比色法操作的注意事项是什么？2、总黄酮与单体黄酮的测定方法有何不同？