细胞融合和单克隆抗体.pptx

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1、会计学1细胞融合和单克隆抗体细胞融合和单克隆抗体5 5、细胞融合技术最大的优点是什么？、细胞融合技术最大的优点是什么？6、动物细胞融合技术的应用1 1、什么叫动物细胞融合？、什么叫动物细胞融合？2 2、促进细胞融合的、促进细胞融合的方法方法有哪些有哪些?3 3、动物细胞融合的过程？、动物细胞融合的过程？4 4、植物体细胞杂交与动物细胞融合有哪些、植物体细胞杂交与动物细胞融合有哪些异同异同？一、动物细胞融合（一、动物细胞融合（细胞杂交细胞杂交）第1页/共30页1 1、动物细胞融合概念：、动物细胞融合概念：2 2、促进细胞融合的、促进细胞融合的方法：方法：物理法物理法化学法化学法生物法生物法离心、

2、振动、电激离心、振动、电激 (效率高、伤害小、效率高、伤害小、易操作易操作)聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）灭活的病毒灭活的病毒（灭活的仙台病毒）（灭活的仙台病毒）一、动物细胞融合（一、动物细胞融合（细胞杂交细胞杂交）指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。第2页/共30页灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞原理：细胞膜的流动性第3页/共30页 细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合 受精作用第4页/共30页4、植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目比较项目比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂

3、交动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合原原原原 理理理理融合前处理融合前处理融合前处理融合前处理诱诱诱诱 导导导导 方方方方 法法法法用用用用 途途途途细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞的全能性植物细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性用纤维素酶、用纤维素酶、果胶酶去壁果胶酶去壁用胰蛋白酶用胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散物理、化学方法物理、化学方法物理、化学、物理、化学、生物方法生物方法获得完整植株获得完整植株主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体第5页/共30页n n利用杂交瘤技术，制备单克隆利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。抗体。5 5、细胞融合技术最大的优点：、细胞

4、融合技术最大的优点：6、动物细胞融合技术的应用：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。第6页/共30页 回回 顾顾（1 1）、抗体的化学本质？）、抗体的化学本质？（2 2）、抗体由什么细胞产生？）、抗体由什么细胞产生？（3 3）、抗体的作用特点？）、抗体的作用特点？（4 4）、抗体的分布？）、抗体的分布？思思 考：如何获取某种特定抗体？考：如何获取某种特定抗体？二：动物细胞融合的成功应用二：动物细胞融合的成功应用 单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备第8页/共30页1 1、抗体的传统生产方法、抗体的传统生产方法再从动物血清中分离抗体再从动物血清中分离抗体该法制备抗体的特点：该法制备

5、抗体的特点：输入浆细胞动物体内 某抗体 某抗原 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。第9页/共30页2.什么叫单克隆抗体 用单个B细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。怎样才能获得单克隆抗体？提示1：仅用细胞培养技术可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？第10页/共30页一个一个B B淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖杂交瘤细胞既

6、能分泌一种特异性抗体既能分泌一种特异性抗体又能无限增殖又能无限增殖19751975年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想：年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想：米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984 年获诺贝尔奖。第11页/共30页3 3、单克隆抗体的制备过程（、单克隆抗体的制备过程（自学与思考）自学与思考）1 1）在从小鼠体内取）在从小鼠体内取B B淋巴细胞前应对小鼠作淋巴细胞前应对小鼠作何种处理何种处理？为什么要这样处理？为什么要这样处理？2 2）从小鼠）从小鼠何处何处获取获取B B淋巴细胞？淋巴细胞？3 3）如只考虑两两融合，可能出现哪些）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞融合类型细胞

7、？4 4）是否所有杂交瘤细胞）是否所有杂交瘤细胞都能都能产生某一特定抗体？产生某一特定抗体？5 5）由特定的）由特定的B B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交 瘤细胞具有什么瘤细胞具有什么特点特点？6 6）最后可以通过）最后可以通过哪些途径哪些途径大量获取抗体？大量获取抗体？第12页/共30页杂交杂交细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫的小鼠的小鼠提取杂交瘤杂交瘤细胞细胞第一次筛选第一次筛选用特定的选择性培养基体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体 1.动物

8、特异性免疫2.注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,-Bn）3.细胞融合:三种融合方式4.第一次筛选：只有杂交瘤细胞存活。同种细胞的融合在此培养基上不能存活，但杂交瘤细胞也是一个系列,。5.第二次筛选：每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。第二次筛选第二次筛选能产生能产生特定特定抗体、培养条件抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞多孔培养板上6.选择所需要的杂交瘤克隆细胞群第13页/共30页1)、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2)、为什么选用小鼠骨髓

9、瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。3)、骨髓瘤细胞是癌细胞吗?第15页/共30页4)、整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的

10、含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。第16页/共30页5.5.5.5.单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用4.4.单克隆抗体的优点：单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，可大量制备。n n1 1）作为诊断试剂作为诊断试剂作为诊断试剂作为诊断试剂：n n在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等位等位等位等,与常规抗体相比与常规抗体相比与常规抗体相比与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快具有准确、高效、简易、快具有准确、高效

11、、简易、快具有准确、高效、简易、快速特点速特点速特点速特点.n n2 2）用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物：n n主要用于癌症治疗。主要用于癌症治疗。主要用于癌症治疗。主要用于癌症治疗。n n生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素放射性同位素放射性同位素放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞

12、位置，原位杀死癌细胞。）确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）第17页/共30页一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞灭活病毒杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势第19页/共30页1在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同巩固练巩固练习：习：第20页/共30页2.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋

13、巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A BC D C第21页/共30页3.3.下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，不正确的是不正确的是不正确的是不正确的是 （）A AB B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台仙台仙台仙台 病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导 B B融合后形成的杂交

14、瘤细胞既能无限增殖，又能产生融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体 C C体外培养时，一个体外培养时，一个体外培养时，一个体外培养时，一个B B淋巴细胞可以产生一种抗体，淋巴细胞可以产生一种抗体，淋巴细胞可以产生一种抗体，淋巴细胞可以产生一种抗体，但不能无限增殖但不能无限增殖但不能无限增殖但不能无限增殖 D D单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏高，单克隆抗体与常规抗体相

15、比，特异性强，灵敏高，优越性明显优越性明显优越性明显优越性明显B B第22页/共30页4.4.19751975年，英国剑桥大学分子生年，英国剑桥大学分子生物学实验室的科勒和米尔斯坦，物学实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠的淋巴细胞（脾细胞）和把小鼠的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨髓瘤细胞融合起来，成小鼠的骨髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细胞，实现在体外大量为杂交瘤细胞，实现在体外大量生产抗体的目的。实验过程如图生产抗体的目的。实验过程如图所示。所示。(1)(1)淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能“融合融合”在一起，说明细胞膜在一起，

16、说明细胞膜 。(2)(2)单克隆抗体的准确定义应为单克隆抗体的准确定义应为 ()()A A一类特殊抗体一类特殊抗体 B B无性繁殖系无性繁殖系 C C单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体 D D单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体(3)(3)杂交瘤细胞繁殖进行的是杂交瘤细胞繁殖进行的是_分裂，其遗传性状分裂，其遗传性状_。(4)(4)单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原(病原体或癌变细胞等病原体或癌变细胞等)并并与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为“生物导弹生物导弹”这是利用了这是利用了 _ _ 。具有一定的流动性具有一定的流动性C C有丝有丝不变不变抗体能与抗原发生特异性结合的特点抗体能与抗原发生特异性结合的特点第23页/共30页第29页/共30页