双向免疫扩散(精品).ppt

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1、双向免疫扩散试验双向免疫扩散试验2009.11.3l指指可溶性抗原可溶性抗原与相应抗体在与相应抗体在琼脂琼脂介质中相互扩散，介质中相互扩散，彼此相遇，在比例适当处形成彼此相遇，在比例适当处形成沉淀线沉淀线。l根据沉淀线的有无、形状和位置对抗原或抗体进根据沉淀线的有无、形状和位置对抗原或抗体进行行定性定性分析，也可用于抗体的分析，也可用于抗体的半定量半定量检测检测l本次实验利用此原理进行本次实验利用此原理进行抗体效价抗体效价的测定。的测定。实验原理实验原理2009.11.32009.11.3抗体：抗抗体：抗IgGIgG 抗原：抗原：IgGIgG巴比妥缓冲液巴比妥缓冲液1.51.5琼脂（巴比妥缓冲

2、液配制）琼脂（巴比妥缓冲液配制）载玻片、打孔器、微量进样器载玻片、打孔器、微量进样器3737水浴箱水浴箱主要的试剂和器材主要的试剂和器材2009.11.3l制板制板 用移液管吸取用移液管吸取4-4.5ml4-4.5ml的琼脂，将其放到的琼脂，将其放到水平放置的载玻片上，待冷凝。水平放置的载玻片上，待冷凝。l打孔打孔 打梅花孔，各孔间的距离为打梅花孔，各孔间的距离为0.7-0.8cm0.7-0.8cm。实验步骤实验步骤12009.11.3l倍比稀释抗体倍比稀释抗体 （见下表）（见下表）l加样加样 用微量进样器在各孔加样品用微量进样器在各孔加样品10ul10ul，中央孔中央孔加抗原，周围加抗原，周

3、围6 6孔分别加不同稀释度的抗体孔分别加不同稀释度的抗体l将玻片放在湿盒中将玻片放在湿盒中，37 18-24h37 18-24h123456生理盐水生理盐水2525252525抗抗IgGIgG5025252525252009.11.3l在抗原和抗体孔之间会看到白色的沉淀线。在抗原和抗体孔之间会看到白色的沉淀线。实验结果实验结果2009.11.3l将出现白色沉淀线的最高血清稀释度作为该抗体将出现白色沉淀线的最高血清稀释度作为该抗体的效价。的效价。例：该血清中抗例：该血清中抗IgGIgG抗体的效价为抗体的效价为1 1：4 4。实验结论实验结论画出实验结果图并判断效价画出实验结果图并判断效价2009.11.3l玻片要清洁，边缘无破损。玻片要清洁，边缘无破损。l浇制琼脂板时要均匀、无气泡。浇制琼脂板时要均匀、无气泡。l孔要打得圆整光滑，边缘不要破裂。孔要打得圆整光滑，边缘不要破裂。l加样时应尽量避免气泡或加到孔外，以保证结果加样时应尽量避免气泡或加到孔外，以保证结果的准确性。的准确性。l注意微量进样器每加一个样品之后，就得清洗。注意微量进样器每加一个样品之后，就得清洗。注意事项注意事项2009.11.3