超敏肌钙蛋白和肌钙蛋白对比.doc

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1、 190 100测试l 本试剂盒适用的分析仪主要用途该免疫测定法适用于人血浆和血清肌钙蛋白T体外定量测定。超敏Elecsys TnT hs STAT测定可作为急性冠状动脉综合症坏死的辅助诊断，如急性心肌梗死。同时也是急性冠状动脉综合症病人的危险分层和慢性肾功能衰竭病人的心肌危险性的指标。另外，还可用于选择对cTnT增高更有效的治疗和干预方法。Elecsys和cobase免疫分析仪均采用了电化学发光免疫法。临床应用肌钙蛋白T（TnT）是调节横纹肌收缩的一种物质。尽管TnT 的功能在所有横纹肌都一样，但心肌产生的TnT （cTnT，分子质量39.7kD）与骨骼肌TnT 并不同。 由于组织特异性高，

2、心肌肌钙蛋白T（cTnT）是心肌损伤的特异性和高敏感性的标志物1。心肌肌钙蛋白T 在心肌梗死后约3-4小时释放并持续2周左右2，3。相比ST段抬高型心肌梗死（STEMI），心肌肌钙蛋白对非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）的诊断更有价值。根据心肌梗死的新定义，当血中心肌肌钙蛋白的水平高于参考值（正常人群）的第99百分位点值，并有心肌缺血的表现（症状、ECG的改变或影像学结果）时，则可诊断为心肌梗死。这就要求肌钙蛋白的检测方法在99百分位点的不精密性（变异系数）小于等于10%4。心肌肌钙蛋白T（cTnT）是能预测急性冠状动脉综合症短期、中期甚至长期结局的一种独立的预后诊断标志物。另外，多中心实

3、验研究（4个中心实验室，共7000例患者）表明，心肌肌钙蛋白T 也可用于评估患者的溶栓疗法（GPb/a抑制剂，低分子量肝素）10，11，12，13，14成功与否。在非ST段抬高型急性冠状动脉综合症诊断和治疗的新治疗导则中，心肌肌钙蛋白是诊断心肌损伤的主要标志物15，16。临床症状稳定的患者血中也可测得低浓度的肌钙蛋白T，例如缺血或非缺血心力衰竭17，18，19，20，心肌病21，肾功能衰竭22，23，24，25，26，27，28，脓毒症29和糖尿病30。肌钙蛋白增高的水平与冠状动脉疾病的严重程度和不良预后有关（不依赖促钠肽（BNP或NT-proBNP）17，18，31，32。低浓度的肌钙蛋白T

4、是心血管事件（包括初发和再发的心房颤动）的独立预测指标33。血中cTnT 浓度增高也可见于其他疾病，如心肌炎34，心脏挫伤35，肺栓塞36和药物引起的心脏毒作用37。不同情况下，其他诊断指标如肌红蛋白、CK-MB、NT-proBNP、PLGF和CRP可与肌钙蛋白T结合对疾病进行诊断和预后的判断31，38，39。Elecsys TnT hs STAT超敏检测法采用了两个针对人cTnT的特异性单克隆抗体40，41。这两个抗体由228个氨基酸组成，可识别位于心肌肌钙蛋白T中心的两个抗原表位(氨基酸位125131和136147)。超敏Elecsys TnT STAT定标品（Elecsys TnT hs

5、 STAT CalSet）含有人心肌肌钙蛋白T的重组体（rec.hcTnT）。该重组体是从以人cTnT异质体3基因为媒介的E.coliBL21的细胞培养中分离的。发酵后，用超声使细胞破裂，离子交换层析纯化rec.hcTnT 。经SDS PAGE,Western印迹法，免疫活性和蛋白含量的测定对其进行分析42。检测原理夹心法，总检测时间：9分钟l 第一次孵育：50l标本、抗cTnT的生物素化特异性单克隆抗体和钌（Ru）a标记的cTnT特异性单克隆抗体一起孵育，形成抗原抗体夹心复合物。l 第二次孵育：添加包被链霉素的磁珠微粒进行孵育，通过生物素和链霉素的相互作用，复合体与磁珠结合。l 将反应液吸入

6、测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度。l 仪器自动通过2点校正的定标曲线计算得到检测结果，试剂条码提供标准曲线（5点校正）。a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)三联吡啶钌试剂工作溶液M包被链霉素的磁珠微粒（透明瓶盖），每瓶12ml；包被链霉素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。R1 生物素化的抗cTnT单克隆抗体（灰盖），每瓶14ml；生物素化的抗cTnT抗体（鼠）浓度2.5mg/L，磷酸缓冲液100mmo

7、l/L，pH 6.0；防腐剂；抑制剂。R2 Ru(bpy)32+标记的抗cTnT单克隆抗体（黑盖），每瓶，14ml，钌标记的抗cTnT单抗（鼠）浓度2.5mg/L，磷酸缓冲液100mmol/l，pH 6.0；防腐剂。警告和注意事项仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。所有废弃物必需按照当地法规进行处置。专业人员可要求获得安全数据报告。避免试剂和样本（样本、定标液和质控品）产生气泡。试剂处理试剂盒（M,R1和R2）为即用型，不能分开使用。试剂相关信息可以通过试剂条形码阅读获取。储存及稳定性存放于28。请垂直摆放Elecsys TnT hs STAT试剂盒，确保仪器

8、的自动搅拌器能够完全混匀磁珠微粒。稳定性：未开封试剂，28有效期内均可使用开封试剂，2812周放置分析仪4周样本的采集和准备仅以下罗列的样本类型通过实验符合检测要求。血清样本须用标准试管或有分离胶的真空管收集。肝素锂、肝素钠、K2-EDTA、K3-EDTA和枸橼酸抗凝的血浆都适用。标准：斜率0.8-1.2，相关系数0.95。稳定性：2-8可保存24小时；-20可保存12个月。只可冷冻一次。选择合适的试管进行不同类型样本的采集，并非所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会影响检测结果。如果使用原始管进行检测（样本前处理系统）时，应遵循生产商所提供的指导。有沉

9、淀的样本检测前必须先作离心处理。避免使用热灭活的样本。添加叠氮化合物的样本和质控品均不能使用。检测前，样本、定标液及质控品须室温平衡(20-25)。由于蒸发因素的影响，样本、定标液及质控品在分析仪上的检测必须2小时内完成。提供的物品参阅“试剂工作溶液”章节。需要的物品（未提供）l 货号，TnT hs STAT CalSet 规格4 x1 mll 货号，PreciControl Troponin，规格2 x2 ml，分别为PreciControl Troponin 1和2 l 货号，Diluent MultiAssay，规格216 ml 样本稀释液。l 实验室基础设备l Elecsys 2010

10、 /cobas e 411分析仪Elecsys 2010和cobas e 411分析仪所需材料：l 货号, ProCell, 6 x 380 mL ,系统缓冲液l 货号, CleanCell, 6 x 380 mL,测量池洗液 l 货号, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液l 货号, SysClean 适配器 l 货号, Elecsys 2010分析杯, 60x 60反应管l 货号, Elecsys 2010 分析吸头, 30 x 120移液管吸头l 货号, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系统清洗液 检测要达到最佳检测性能，请遵照本说明

11、书中有关分析仪的相关说明指导，并参照分析仪操作手册。使用前，分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动读取，在特殊情况下，分析仪无法自动读取条码信息时，请输入条码标签上的15位数字序列。Elecsys2010和cobas e 411分析仪：将冷藏试剂室温平衡至20C左右，放置分析仪的试剂盘（20C）内。避免泡沫产生。分析仪系统能自动调节试剂温度和各试剂盒瓶盖开、关。定标溯源性: Elecsys TnT hs STAT 检测法（货号）可溯源至Elecsys TnT STAT检测法（货号,第四代），而Elecsys TnT hs STAT检测又可溯源至Enzymun-T

12、est Troponin T(CARDIAC T)检测法。每套Elecsys TnT hs STAT试剂的条码标签上均含有其批特异的定标信息。使用Elecsys TnT hs STAT CalSet定标液可调整预设置的定标曲线。定标频率：新批号试剂必须进行定标（新试剂盒在分析仪上放置不能超过24小时）。以下情况建议重新进行定标：Elecsys 2010 和cobas e 411分析仪:l 使用同一批号试剂，1月后（28天）l 7天后（同一试剂盒在分析仪上使用）l 根据需要：如失控。质控可使用Elecsys PreciControl Troponin 1和2进行质量控制。其他合适的质控品也适用。

13、各浓度质控至少每24小时内检测一次，每次更换试剂盒或定标后也须进行质控。每个实验室可根据各自的情况设定合适的控制限和质控周期。质控值必须处于规定的控制限内。各实验室必须建立应对失控的相应纠正措施。请遵循政府法规和当地行业导则进行质量控制计算仪器会自动计算每个样本中的分析物浓度，单位：pg/mL，ng/mL或g/L。干扰因素检测结果不受黄疸（胆红素428mol/L或25 mg/dL）, 溶血（血红蛋白0.016mmol/L或 0.1g/dL,样本中有明显溶血时可能会干扰。当样本血红蛋白浓度0.1 g/dL 时，会导致结果假性降低），脂血(脂肪乳剂 1500mg/dL)和生物素82nmol/L或2

14、0ng/mL的影响。标准：当肌钙蛋白T的浓度 5mg/天），须在末次生物素治疗8小时后采集样本。检测结果不受类风湿因子（1500 IU/ml）影响。检测不受hook效应影响（肌钙蛋白浓度达100,000 ng/L或pg/mL）对52种常用药物进行体外检测未发现会影响检测结果。少数病例中，高滴度的分析物抗体（如HAMA），链霉素抗体或钌抗体会影响检测结果。适宜性的实验设计可将影响程度降到最低。作为诊断指标，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。检测范围3-10000ng/L（通过最低检出限和厂商定标曲线的最高值确定）。低于检出限的值报告10000 ng/l(pg/mL) 。

15、(1:10稀释结果可报告至ng/L)。稀释高于检测范围的标本可用Elecsys Diluent MultiAssay稀释。建议1:10稀释（Elecsys 2010 和cobas e 411分析仪可以自动稀释，也可以手工稀释）。稀释的标本cTnT浓度必须1000 ng/l(pg/mL)。如用手工稀释，结果应乘稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。期望值Elecsys Troponin T hs STAT参考范围建立的数据来源于546例健康自愿者，上限（第99百分位点）为14 ng/l(pg/mL)，95%的可信区间为12.4-24.9 ng/l(pg/mL)。在CV10%（LoQ）

16、时，最低浓度为13 ng/l(pg/mL)。根据1970年WHO对急性心肌梗死的定义标准43，肌钙蛋白T的判断值为0.1g/L或100ng/L(pg/mL)( 由前代Elecsys Troponin T 检测法ROC曲线分析结果所决定)44,45。由于cTnT的释放动力学，最初检测结果第99百分位点（在症状产生的前几个小时）的病例并不能排除心肌梗死的可能。如仍有心肌梗死的可能，须在适当的时间内（初次检测后6-12小时）重新检测。详细的病史和症状的准确描述很重要。要做仔细的体格检查并注意可能出现的疾病，如心脏挫伤、急性或慢性心力衰竭、主动脉夹层、主动脉瓣疾病、肥厚性心肌病、心动过速、心动过缓、心

17、尖气胀综合症、心肌损伤溶解症、肺栓塞、严重的肺动脉高压、急性神经性疾病、浸润行疾病、药物毒性损伤、呼吸衰竭、脓毒症、烧伤等16。实验室检测要包含心肌损伤的标志物，肌钙蛋白更好。如果肌钙蛋白或心肌酶浓度增高，则说明细胞将会发生不可逆性损伤，且这些患者一定有心肌梗死（已达成共识）。6-12小时后应再次检测肌钙蛋白浓度。16，46检测结果增高47，48，49，50，51，52，53目前发表的文献显示肌钙蛋白T上升见于心肌梗塞，不稳定心绞痛，心肌损伤，心移植患者。在横纹肌溶解及多肌炎患者中也可见上升。每个实验室均应调查预期值与自身病人群的可转换性，如有可能应建立自身的参考范围。特殊的性能指标试剂在分析

18、仪上的性能试验数据如下。由于具体情况不同，各实验室所得出的数据可能会稍有差异。精密度应用Elecsys试剂盒、样本和质控品验证重复性，按照CLSI的EP5-A2操作：每天4次，共21天 (n=84)。分析灵敏度（最低检出限）空白限（LoB），检测限（LoD），定量限（LoQ）LoB3ng/L(pg/mL)LoD5ng/L(pg/mL)LoQ13ng/L(pg/mL)空白限和检出限是依照CLSI的EP17-A要求确定的，定量限由功能灵敏度检测所确定。空白限是60个样本以上检测结果的第95百分位点值，是指低于检出零浓度分析物概率为95%时的浓度值。检出限是建立在低浓度样本的空白限和标准差的基础上，

19、是指所能检测出的最低分析物浓度（高于空白限概率为95%时的浓度值）。定量限（功能灵敏度）是指在批间变异系数10%（每次10个独立样本，每天一次）时能重复测定的最低分析物浓度。由低浓度肌钙蛋白样本决定。方法学比较使用临床标本比较Elecsys TnT hs STAT检测 (Elecsys 2010,y)和Elecsys TnT STAT ，货号 （Elecsys 2010,x),相关性数据(ng/l(pg/mL)如下：标本数n=155Passing/Bablok54 线性回归y = 1.05x+0.028 y = 1.0x+0.038T= 0.867 r = 0.997样品比较的浓度范围约为13

20、-7000 ng/l(pg/mL)分析特异性Elecsys TnT hs STAT检测在TnT浓度约为18 ng/L（pg/mL）和38 ng/L（pg/mL）时不会出现明显的交叉反应，当浓度为500 ng/mL则会出现交叉反应。骨骼肌肌钙蛋白T0.003%,心肌肌钙蛋白I0.2%,骨骼肌肌钙蛋白I 0.003%,人肌钙蛋白C0.001%。诊断敏感性和特异性来自德国、印度和瑞士的临床中心和两间美国临床中心参加了急诊室胸痛患者预后诊断的研究。507例符合以下标准的患者界入敏感性和特异性的计算：胸痛大于20分钟，12导联心电图评估，年龄大于20岁，未怀孕，入院前3周未发生心肌梗死并至少抽血两次。根

21、据以下条件患者被诊断为急性心肌梗死：1.WHO标准44 ,包括ECG改变，ACS的特征性症状和心肌肌钙蛋白的增高，和2.ESC/ACCF/AHA/WHF的标准。WHO定义的AMI的敏感性和特异性的计算：使用前代试剂ROC分析最佳判断值为0.1mg/L(ng/mL)或100ng/L，以此ROC分析计算超敏Elecsys TnT 敏感性和特异性最佳判断值为0.1mg/L (ng/mL)或100ng/L）。根据入院的不同时间段计算Elecsys TnT hs STAT检测法的敏感性和特异性所得结果如下表：根据ESC/ACCF/AHA/WHF标准计算敏感性和特异性：根据高于标准第99百分位点或10%C

22、V的肌钙蛋白值和胸痛或ECG改变诊断AMI。第99百分位点为14 ng/L（pg/mL）时，计算高敏TnT峰值的敏感性和特异性：根据入院的不同时间段计算:参考文献1.European patent and US patent by Roche Diagnostics GmbH. Specific antibodies to Troponin T, their production and use in a reagent for the determination of myocardial necrosis.2. Katus HA, Remppis A, Looser S, et al. E

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