食品微生物学基础实验之一培养基的制备与无.ppt

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1、微生物学实验的目的及微生物学实验的目的及实验室的要求实验室的要求主讲：郑海涛主讲：郑海涛主讲：郑海涛主讲：郑海涛一、一、微生物学实验的目的微生物学实验的目的1、微生物学实验是微生物学的重要组成 部分，也是学习微生物学的一个重要环节2、通过实验操作，可以加深和巩固对课堂讲授内容的理解。3、训练学生掌握最基本的操作技能；了解微生物学的基本知识；培养学生观察、思考、分析解决实际问题的能力；实事求是、严肃认真的科学态度和勤俭节约、爱护公物的良好作风。二、微生物实验室的要求二、微生物实验室的要求 为了上好微生物学实验课，并保证安全，实验时要注意如下事项：1、为了保证实验室的整洁和实验的顺利进行，非必要的

2、物品和书包，不得带入室内，实验时不得高声谈话和随意走动2、每次实验前要对实验内容进行充分预习，了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，并作合理安排。3、实验中要认真观察，及时做好实验记录。对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。4、实验操作应严格按操作规程进行，万一遇有带菌物品洒漏、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐瞒。二、微生物实验室的要求二、微生物实验室的要求5、实验过程中，切勿使乙醚、丙酮、酒精等易燃药品接近火源，如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火器。6、凡实验用过的菌种以及带

3、有活菌的各种器皿，应先经高压灭菌后才能洗涤。制片上的活菌标本应先浸泡于3来苏儿溶液或5石炭酸溶液中，半小时以后再行洗刷。如系芽孢杆菌或有孢子的菌，则应适当延长浸泡时间。7、实验中需进行培养的材料，应注明组别、名称及处理方法，实验完毕，应将仪器、用具等洗净，放好，做好桌面及地面的清洁工作。实验一实验一常用培养基的制备、灭常用培养基的制备、灭菌与无菌检测技术菌与无菌检测技术一、实验目的1、通过本次实验证明实验室内有各种微生物的存在。2、了解配制培养基的一般程序，掌握配制、分装培养基的方法3、掌握高压蒸汽灭菌的原理及操作技术（一）环境中微生物的检测（一）环境中微生物的检测一、目的和要求一、目的和要求

4、 1 1、微生物在自然界广泛存在，在实验室内亦不例外。由于、微生物在自然界广泛存在，在实验室内亦不例外。由于其个体小，人们用肉眼看不到。只有通过微生物的大量繁其个体小，人们用肉眼看不到。只有通过微生物的大量繁殖形成微生物群体，即菌落，肉眼才能看到它们。殖形成微生物群体，即菌落，肉眼才能看到它们。2 2、通过本次实验证明实验室内有各种微生物的存在，对微、通过本次实验证明实验室内有各种微生物的存在，对微生物有初步的认识，并在今后的微生物学实验中注意无菌生物有初步的认识，并在今后的微生物学实验中注意无菌操作，防止杂菌污染，保证实验结果的可靠性。操作，防止杂菌污染，保证实验结果的可靠性。二、实验材料二

5、、实验材料 1、牛肉膏蛋白胨（营养琼脂）培养皿、牛肉膏蛋白胨（营养琼脂）培养皿、75%酒精棉球酒精棉球 2、37恒温箱、酒精灯、剪刀、火柴、镊子、灭菌棉球、恒温箱、酒精灯、剪刀、火柴、镊子、灭菌棉球、灭菌牙签、记号笔等灭菌牙签、记号笔等三、操作步骤 以以4 4人为一组，取人为一组，取5 5块灭菌的营养琼脂培养皿，一皿对照不要打开块灭菌的营养琼脂培养皿，一皿对照不要打开盖，其余每人盖，其余每人1 1皿，每组成员分别选择下列任何一种方法加以处理并皿，每组成员分别选择下列任何一种方法加以处理并在皿上写明班级、姓名、日期及处理方法。在皿上写明班级、姓名、日期及处理方法。(1)(1)打开培养皿盖，在空气

6、中暴露约打开培养皿盖，在空气中暴露约1010分钟，然后盖上皿盖。分钟，然后盖上皿盖。(2)(2)打开培养皿盖，用手指触摸培养基表面打开培养皿盖，用手指触摸培养基表面2 23 3个点，注意不要将培养个点，注意不要将培养基弄破，然后盖上皿盖。基弄破，然后盖上皿盖。(3)(3)取自己的头发约取自己的头发约5cm5cm长长3 35 5根打开皿盖用镊子放于培养基表面。然根打开皿盖用镊子放于培养基表面。然后盖上皿盖。后盖上皿盖。(4 4)用灭菌棉球在实验台用灭菌棉球在实验台(或凳子或凳子)上擦两下，打开皿盖，在培养基表面上擦两下，打开皿盖，在培养基表面轻轻涂抹，然后盖上皿盖。注意不要将培养基弄破。轻轻涂抹

7、，然后盖上皿盖。注意不要将培养基弄破。(5 5)将接种的培养皿放入培养箱适温培养将接种的培养皿放入培养箱适温培养24-4824-48小时小时。四、结果观察 1、同组成员共同观察并记录结果，并与对照皿进行比较。2、描述你处理的培养皿中长出的菌落，如形状、颜色、大小、边缘等特征五、思考题1、本组内不同处理的培养皿上的菌落是否相同，从本实验中得到了什么启示？2、在今后的实验操作中要注意的问题是什么？（二）培养基的制备与灭菌（二）培养基的制备与灭菌1 1、培培养养基基：人人工工配配制制、适适合合微微生生物物生生长长繁繁殖殖或或产产生生代谢产物的混合基质。代谢产物的混合基质。2 2、营营养养要要素素：碳

8、碳源源、氮氮源源、能能源源、生生长长因因子子、无无机机盐和水盐和水3 3、要要 求求：应应具具备备6 6大大营营养养要要素素；物物质质比比例例合合适适；必须灭菌。必须灭菌。一一、实验原理、实验原理一、实验原理4 4、培养基的凝固剂：、培养基的凝固剂：琼脂：融化温度琼脂：融化温度96,96,凝固温度凝固温度40-45.40-45.常用浓度：常用浓度：1.5-2.0%1.5-2.0%无营养价值，不易分解，耐压灭菌无营养价值，不易分解，耐压灭菌 明胶：融化温度明胶：融化温度2525，凝固温度，凝固温度2020。常用浓度：常用浓度：5-12%5-12%作氮源，易分解，不耐压。作氮源，易分解，不耐压。5

9、 5、灭灭菌菌：用用高高压压蒸蒸气气对对培培养养基基进进行行灭灭菌菌时时必必须须根根据据培培养养基基的的种种类类、容容器器的的大大小小及及数数量量采采用用不不同同的的温温度度及及时时间间。一一般般少少量量分分装装的的基基础础培培养养基基通通常常为为12115min12115min灭灭菌菌。如如盛盛装装培培养养基基的的容容器器较较大大，则则应应适适当当增增加加其其灭灭菌菌的的温温度度和和时时间间。含含糖糖培培养养基基，一一般般采采用用115201152030min30min灭灭菌菌，以以免免糖糖类类因因高高热热而而分分解解。由由于于高高压压蒸蒸气气灭灭菌菌是是通通过过提提高高蒸蒸气气压压力力而而

10、使使其其升升高高温温度度以以杀杀死死微生物，所以加压前应尽量排净锅内的空气微生物，所以加压前应尽量排净锅内的空气。消毒与灭菌消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和 孢子。方法：一、物理的方法：加热、过滤、辐射二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。培养基的分类1、物理状态分（1）固体培养基（2）半固体培养基 （3）液体培养基(4）脱水培养基（干燥培养基）2、营养成分分（1）天然培养基（2）合成培养基 （3）半合成培养基3、不同功能分（1）选择性培养基 （2）鉴别培养基 1%-2%琼脂0.5%琼脂不加

11、琼脂营养琼脂高氏一号PDA乳酸菌培养基MRSEMB二、实验材料及仪器(一)药品 牛肉膏，蛋白胨，葡萄糖，可溶性淀粉，NaCl，KNO3，K2HPO4，MgSO4，FeSO4，琼脂等。(二)试剂 40KOH，l0HCl。(三)其它 电子天平，电炉，硫酸纸，牛皮纸，线绳，棉花，纱布，石棉网、精密pH试纸，标签，烧杯，量简，玻棒，三角瓶，滴管，灭菌锅等。三、方法步骤 1、培养基的种类很多，配制方法也不完全相同，但其基本程序和要求是大体相同的。一般培养基的配制程序如下 一般培养基的配制程序如下 计算 称量 溶解定溶调节PH值 加琼脂并溶解 过滤 分装 灭菌 包扎 加塞 摆斜面 无菌检查。四、实验内容

12、1、每4人一组分别制备一种培养基200ml。灌装7支试管后，装入三角瓶。（1）牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。（1-6组）（2）马铃薯葡萄糖琼脂培养基。（7-12组）（3）高氏1号培养基。（13-16组）2、分装试管和三角瓶，灭菌后摆斜面。试管高度的1/3左右不高于三角瓶高度的1/2分 装漏 斗乳胶管玻璃管弹簧夹铁架台分装试管 灭菌后，固体培养基如需制成斜面，应趁热将试管上部垫于灭菌后，固体培养基如需制成斜面，应趁热将试管上部垫于一根玻棒或木条上，使培养基斜面长度为试管长度的一根玻棒或木条上，使培养基斜面长度为试管长度的1 12 2摆斜面摆斜面五、实验报告 简述你所制备培养基的制备程序。六、思考题 (1)在你制备的培养基中，何为碳源?何为氮源?(2)配制合成培养基加入微量元素时，最好用什么方法加入?天然培养基为什么不需另加微量元素？(3)做过本次实验后，你有什么体会?你认为在配制培养基的各步操作中应注意些什么问题?微生物实验室常用仪器设备显微镜电子天平超净工作台立式灭菌锅霉菌和生化培养箱恒温培养箱谢谢 谢谢20201 10 0年年0303月月