湖南省长沙市长郡中学高中生物专题二课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与记数课件新人教版选修1.ppt

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1、稀释涂布平板法稀释涂布平板法注意：注意：移液管需要经过灭菌。操作时，移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰试管口和移液管离火焰12cm处处.涂布平板的所有操作都应在火焰附近涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第菌操作要求，想一想，第2步应如何进步应如何进行无菌操作？行无菌操作？问题讨论问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第菌操作要求，想一想，第2步应如何进行步应如何进行无菌操作？无菌操

2、作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。在酒精灯火焰周围等等。问题讨论问题讨论微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养菌种的保存菌种的保存1.临时保藏临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后置养基，菌落长成后置于于4冰箱保存。冰箱保存。2.长期保存长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法微生物的实验室培养微生物的实验室培养.DAT四、实验操作成果

3、评价四、实验操作成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中如果未接种的培养基在恒温箱中保温保温12 d后无菌落生长，说明培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新基的制备是成功的，否则需要重新制备。制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明如果培养基上出现了其他菌落，则

4、说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h与与24 h后的大肠杆菌菌落的后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。好的科学态度与习惯。两个主要目的：两个主要目的：(1)从土壤中分离出能够分解尿从土壤中分离出能够分解尿素的

5、细菌；素的细菌；(2)统计每克土壤样品中究竟含统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。有多少这样的细菌。在微生物学中，将允许特定种在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。其他种类微生物生长的培养基。选择培养基选择培养基背景知识背景知识测定微生物数量的方法：测定微生物数量的方法：1直接计数法：直接计数法：最常用最常用显微镜直接计数法显微镜直接计数法。测定微生物数量的方法：测定微生物数量的方法：背景知识背景知识1直接计数法：直接计数法：最常用最常用显微镜直接计数法显微镜直接计数法。先将待测样品制成悬液，然后取一先将待测样品

6、制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。算出单位体积内的微生物总数。测定微生物数量的方法：测定微生物数量的方法：背景知识背景知识优点：优点：设备简单、能观察微生物的形设备简单、能观察微生物的形态特征。态特征。优点：优点：设备简单、能观察微生物的形设备简单、能观察微生物的形态特征。态特征。缺点：缺点：难以计数微小量多的细菌。难以计数微小量多的细菌。一般用于纯培养悬浮液中各一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。种单细胞菌体的计数。2间接计数法：间接计数

7、法：最常用最常用稀释平板计数法稀释平板计数法。（二）统计菌落数目（二）统计菌落数目（二）统计菌落数目（二）统计菌落数目统计菌落数目的理论依据：统计菌落数目的理论依据：当样品的稀释度足够高当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在数在30300的平板进行计数。

8、的平板进行计数。每克样品中的菌株数每克样品中的菌株数=(CV)MC：某一稀释度下平板上生长的平均：某一稀释度下平板上生长的平均 菌落数菌落数V：涂布平板时所用的稀释液的体积：涂布平板时所用的稀释液的体积 (ml)M：稀释倍数：稀释倍数统计的菌落往往统计的菌落往往比活菌的实际数目低。比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此结果一般用菌落只是一个菌落。因此结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。数而不是活菌数来表示。注意：注意：两位同学用稀释涂布平板法测定两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数

9、。在对应稀释倍同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为数为106的培养基中，得到以下两种统计的培养基中，得到以下两种统计结果。结果。1.第一位同学在该浓度下涂布了一个第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为平板，统计的菌落数为230。2.第二位同学在该深度下涂布了三个第二位同学在该深度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为平板，统计的菌落数分别为21、212和和256，该同学以这三个平板菌落数的平均值，该同学以这三个平板菌落数的平均值163作为统计结果。作为统计结果。实例实例1你认为哪位同学的结果更接近你认为哪位同学的结果更接近真实值？这两位同学的实验需要改真实值？这两位同学的实验需要

10、改进吗？如果需要，如何改进？进吗？如果需要，如何改进？?你认为哪位同学的结果更接近你认为哪位同学的结果更接近真实值？这两位同学的实验需要改真实值？这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？进吗？如果需要，如何改进？第一位同学只涂布了一个平板，没有第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了了3个平板，但是，其中个平板，但是，其中1个平板的计数结个平板的计数结果与另果与另2个相差太远，说明在操作过程中可个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简

11、单地将能出现了错误，因此，不能简单地将3个平个平板的计数值用来求平均值。板的计数值用来求平均值。?因此，这两位同学的实验需要改进，因此，这两位同学的实验需要改进，在设计实验时，一定要涂布至少在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。实验。说明设置重复组的重要性。说明设置重复组的重要性。在做本课题的实验时，在做本课题的

12、实验时，A同学从对应同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌个菌落。但是，其它同学在同样的稀释度下只落。但是，其它同学在同样的稀释度下只选择出大约选择出大约50个菌落。个菌落。其他同学认为其他同学认为A同学的结果有问题。同学的结果有问题。他们分析可能是他们分析可能是A同学的培养基被杂菌污同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生长。养基上生长。实例实例2但是，但是，A同学确信自己的实验操作准同学确信自己的实验操作准确无误，与

13、其他同学的结果之所以不相同，确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。但是，是因为自己所选用的土壤样品不同。但是，A同学在设计实验的时候并没有设置对照，同学在设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿不出令同学们信服的证据。因而此时也拿不出令同学们信服的证据。你能通过设置对照，帮助你能通过设置对照，帮助A同学排除同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？上述两个可能影响实验结果的因素吗？一是由于土样不同，二是由于培养一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。基污染或操作失误。究竟是哪个原因，究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。可以通过实验来证明。一种方案：一种

14、方案：可以由其他同学用与可以由其他同学用与A同同学一样的土样进行实验，如果结果与学一样的土样进行实验，如果结果与A同同学一致，则证明学一致，则证明A无误；如果结果不同，无误；如果结果不同，则证明则证明A同学存在操作失误或培养基的配同学存在操作失误或培养基的配制有问题。制有问题。另一种方案：另一种方案：将将A同学配制的培养基在不加土样的同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结果要通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，有说服力，对照的设置是必不可少的。对照的设置是必不可少的。实验设计实验设计土壤中分解尿素的细菌的分离与记数土壤中分解尿素的细菌的分离与记数微生物的实验室培养.DAT