比尔定律学习.pptx

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1、吸光度:absorbance 为透光度倒数的对数，用A表示：即 A=lg1/T=lgI0/ItA值越大，表明物质对光的吸收越大。透光度：transmittance 为透过光的强度It与入射光强度I0之比，用T表示：即 T=It/I0T值越大，表示物质对光吸收的越小。第1页/共33页一、一、Lamber-BeerLamber-Beer定律：吸收光谱法基本定定律：吸收光谱法基本定律律描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系假设一束平行单色光通过一个吸光物体 第2页/共33页续前取物体中一极薄层第3页/共33页续前讨论：1Lamber-Beer定律的适用条件（前提）入射光为单色光 溶液是

2、稀溶液2该定律适用于固体、液体和气体样品3在同一波长下，各组分吸光度具有加和性 应用：多组分测定第4页/共33页二、吸光系数二、吸光系数1吸光系数的物理意义：单位浓度、单位厚度的吸光度在指定条件(单色光、溶剂、温度）下E是物质的特征常数，表明物质对某一特定波长光的吸收能力。可作为定性、定量的依据。由于浓度单位不同它有两种表示方法。第5页/共33页续前2吸光系数两种表示法：1）摩尔吸光系数摩尔吸光系数(EM)。：在一定下，C=1mol/L，L=1cm时的吸光度 2）百分含量吸光系数百分含量吸光系数/比吸光系数比吸光系数：在一定下，C=1g/100ml，L=1cm时的吸光度 3）两者关系第6页/共

3、33页氯霉素的水溶液在278 nm处有吸收峰，设用纯品配制100ml含2.00mg 的溶液以1cm 比色池于278nm处测得透光率T=24.3%求：其百分吸光系数及其摩尔吸光系数？（Mr=323.15）第7页/共33页三、偏离Beer定律的因素依据Beer定律，A与C关系应为 经过原点的直线偏离Beer定律的主要因素表现为 以下两个方面（一）光学因素（二）化学因素 第8页/共33页（一）光学因素 1非单色光的影响：Beer定律应用的重要前提入射光为单色光 照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的

4、狭缝宽度 这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度第9页/共33页续前第10页/共33页续前讨论：入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状 结论：选择较纯单色光（，单色性）选max作为测定波长（E，S且成线性）第11页/共33页续前2杂散光的影响：杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度 范围内，与所选波长相距较远杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值3反射光和散色光的影响：反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光 直接对T产生影响散射和反射使T，A，吸收光谱变形注：一般可用空白对比校正消除4非平行光的影响：使光程，A，吸收光谱变形第12页/共33页（

5、二）化学因素Beer定律适用的另一个前提：稀溶液浓度过高会使C与A关系偏离定律第13页/共33页四、透光率的测量误差T要使测定的相对误差c/c最小，求导取极小值，得出：lgT=-0.4343=A即当A=0.4343时，吸光度测量误差最小影响测定结果的相对误差两个因素：T和T T影响因素：仪器噪音 1）暗噪音 2）讯号噪音第14页/共33页续前1）暗噪音与检测器和放大电路不确切性有关 与光讯号无关第15页/共33页续前2）讯号噪音与光讯号有关表明测量误差较小的范围一直可延至较高吸光度区，对测定有利 第16页/共33页续前五、吸光度测量的条件选择：1）测量波长的选择：2）吸光度读数范围的选择：3）

6、参比溶液(空白溶液)的选择：选选A=0.20.7A=0.20.7注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光的散射和 界面反射等因素对透光率的干扰第17页/共33页.第三节 紫外分光光度计一、主要部件的性能与作用基本结构:光源单色器吸收池检测器信号显示系统样品第18页/共33页1光源：2单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 棱镜对不同波长的光折射率不同色散元件 分出光波长不等距 光栅衍射和干涉 分出光波长等距钨灯或卤钨灯可见光源 3501000nm氢灯或氘灯紫外光源 1504000nm第19页/共33页第20页/共33页续前3吸收池：玻璃能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英不能吸收紫外光，适用于紫

7、外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）4检测器：将光信号转变为电信号的装置5记录装置：讯号处理和显示系统光电池光电管光电倍增管二极管阵列检测器第21页/共33页二、类型：1单光束分光光度计：特点：使用时来回拉动吸收池 移动误差比色池配对国 产 722、751型、XG-125型、英 国SP500型 和 伯 克 曼DU-8型等。第22页/共33页续前2双光束分光光度计：特点：不用拉动吸收池，可以减小移动误差可以自动扫描吸收光谱国产710型、730型、740型、日立UV-340型第23页/共33页第24页/共33页国产WFZ800-5型、岛津UV-260型、UV-265型等。3双波长分

8、光光度计第25页/共33页续前3双波长分光光度计 特点：利用吸光度差值定量消除干扰和吸收池不匹配引起的误差第26页/共33页三、分光光度计的校正和检验1.波长校正2.吸光度校正3.杂散光的检验4.稳定性的检验第27页/共33页习题下化合物中，可用紫外可见分光光度法直接测定含量的是（）A 乙醇 B 正庚烷 C 环己烷 D 苯甲醛 E 甲烷光量子的能量正比于辐射的（）A 频率 B 波长 C 波数 D 传播速度 E 周期下面五种化合物中，跃迁所需能量最大者是（）A 1，4戊二烯 B 1，3丁二烯 C 1，3环己二烯 D 1，3，5己三烯第28页/共33页l某溶液符合朗伯比尔定律，稀释之后，其紫外可见

9、光谱的吸收峰将（）。A.向短波方向移动 B.不移动，但峰高值增大 C.向长波方向移动 D.不移动，但峰高值减小 E.峰的位置和峰高值都不变l某溶液符合Lambert-Beer 定律，若只改变入射光波长则（）发生改变。A.吸光度 B.百分吸光系数 C.吸收峰高度 D.吸收峰位置l某有色溶液符合朗伯-比尔定律，当浓度为C时测得透光率为16若其它条件不变，浓度稀释至1/2 C时，透光率为（）。A 8 B 16 C 32 D 40 E 80第29页/共33页1、朗伯比尔定律的适用条件是 和 ；2、吸光系数与 有关。3、至 nm是紫外一可见波长，其吸收光谱属于 光谱。4、一般测量吸光度A的值在 范围，吸光度与透射率的关系是 紫外分光光度法中，偏离比耳定律的主要原因有 和 。第30页/共33页安络血的分子量为236，将其配成0.4962mg/100ml浓度，在max=355nm处于1cm 吸收池中测得其A=0.557,求安络血的 百分吸光系数和摩尔吸光系数？第31页/共33页l紫外可见分光光度法中，跃迁是发生在含有杂原子的不饱和化合物中，其吸收峰随溶剂极性增加而向 移动，即产生 。（）吸光系数是物质的特征常数，故同一物质在任一波长下吸光系数相同。（）吸光物质分子具有各种类型的电子跃迁，均能在在紫外可见吸收光谱中反映出来。第32页/共33页感谢您的观看。第33页/共33页