液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因.doc

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1、液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因气相色谱峰拖尾、响应低甚至不出峰的主要原因 A)系统污染、惰性下降 系统惰性不好对活性组分峰形及响应的影响尤为明显。建议选用惰性优异的低流失色谱 柱和色谱耗件，如去活的衬管。如果系统已经被污染,应及时对进样口和检测器进行维护。恢复被污染色谱柱的方法主要有： 将进样口端截去0。51米，根据样品来源做进一步的判断，如果是半挥发污染物，还可以进一步考虑对色谱柱进行老化。污染严重时可截去更长或用溶剂彻底清洗色谱柱（必需是交联键合固定相） B）色谱柱安装不正确或系统其他部位存在死体积 毛细管柱在进样口和检测器的安装位置不当将影响峰形,请严格按照仪器的使用说明正 确安装

2、色谱柱。其他与毛细管柱相连接的部位也应注意降低死体积。 C）系统漏气 需定期检查系统气密性、更换进样口备件。使用非纯石墨密封圈时，注意安装后的几次温度升降之后追加一次拧紧。 D)方法条件不佳 对于低挥发性样品，需注意提高进样口和/或检测器、色谱柱、传输管线等处的温度，防止冷凝现象。 有些样品在某些检测器的响应确实不高（甚至没有响应），如果样品不出峰，又没有参考响应值,应加大进样量确认出峰位置，并利用标样考查样品的响应值。 E)其他可能导致峰拖尾的原因： 不分流模式下，分流放空阀开启过晚（通常应在0。51。0分钟之间） 手动进样速度过慢 检测器尾吹气流量不足 PLOT色谱柱样品过载 组分共流出

3、含磷化合物在NPD白色铷珠上易拖尾,建议使用黑色铷珠。可以提高传质速率，提高柱效，但柱温过高又会使组分间分离度减小。采用较低的柱温，减少固定相的用量和适当增加载气的流速，可在短时间内获得良好的分离效果; 2汽化温度应以能使试样迅速汽化而不产生分解为准，通常比柱温高2070，柱温应比试样中各组分的平均沸点低2030, 对于沸点范围较宽的试样，宜采用程序升温； 增加柱长会提高分离度，但分析时间增长,因此,一般在满足一定分离度的条件下尽可能用短柱子； 进样应在1秒以内完成，以减小峰变宽； 3点火 氢焰气相色谱仪,开机时需要点火,有时因各种原因致使熄火后,也需要点火。然而，我们经常会遇到点火不着的情况

4、。下面介绍两种点火技巧 3。1加大氢气流量法 先加大氢气流量,点着火后,再缓慢调回工作状况。此法通用。 3.2减少尾吹气流量法 先减少尾吹气流量,点着火后,再调回工作状况.此法适用于仍用氢气作载气,用空气作助燃气和尾吹气情况。 4气比的调节 氢焰气相色谱仪三气的流量比,有关资料均建议为:氮气氢气空气= 1110 .但由于转子流量计指示流量的不准确性,事实上谁会去苛求这个配比呢? 本人认为，为各气施以良好匹配、目的是既有高的检测器灵敏度又能有较好的分离效果,还不容易熄火. 4.1氮气流量的调节 在色谱柱条件确定后，样品组分分离效果的好坏，氮气的流量大小是决定因素.调节氮气流量时,要进样观察组分分

5、离情况,直至氮气流量尽可能大且样品组分有较好分离为止。 4.2氢气和空气流量的调节 氢气和空气流量的调节效果，可以用基流的大小来检验。先调节氢气流量,使之约等于氮气的流量,再调节空气流量.在调节空气流量时，要观察基流的改变情况.只要基流在增加，仍应相向调节，直至基流不再增加不止。最后,再将氢气流量上调少许. 5进样技术 在气相色谱分析中，一般是采用注射器或六通阀门进样.在考虑进样技术的时候，主要是以注射器进样为对象。 5。1进样量 进样量与气化温度、柱容量和仪器的线性响应范围等因素有关，也即进样量应控制在能瞬间气化,达到规定分离要求和线性响应的允许范围之内。填充柱冲洗法的瞬间进样量：液体样品或

6、固体样品溶液一般为0.0110l ，气体样品一般为01110ml ，在定量分析中，应注意进样量读数准确。 (1） 排除注射器里所有的空气 用微量注射器抽取液体样品进,只要重复地把液体抽入注射器又迅速把其排回样品瓶,就可做到这一点。 还有一种更好的方法，可以排除注射器里所有的空气。那就是用计划注射量的约2 倍的样品置换注射器35 次，每次取到样品后,垂直拿起注射器，针尖朝上。任何依然留在注射器里的空气都应当跑到针管顶部。推进注射器塞子，空气就会被排掉。 （2) 保证进样量的准确 用经置换过的注射器取约计划进样量2 倍左右的样品，垂直拿起注射器，针尖朝上,让针穿过一层纱布,这样可用纱布吸收从针尖排

7、出的液体。推进注射器塞子，直到读出所需要的数值.用纱布擦干针尖。至此准确的液体体积已经测得,需要再抽若于空气到注射器里。如果不慎推动柱塞,空气可以保护液体使之不被排走。 5.2进样方法 双手拿注射器。用一只手(通常是左手) 反针插入垫片,注射大体积样品(即气体样品） 或输入压力极高时，要防止从气相色谱仪来的压力把柱塞弹出(用右手的大拇指) 。 让针尖穿过垫片尽可能深的进入进样口,压下柱塞停留12 秒钟，然后尽可能快而稳地抽出针尖（继续压住柱塞) 。 5。3进样时间 进样时间长短对柱效率影响很大。若进样时间过长，遇使色谱区域加宽而降低柱效率.因此,对于冲洗法色谱而言,进样时间越短越好,一般必须小

8、于1 秒钟。 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因A、 峰拖尾1、筛板阻塞（a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱）2、色谱柱塌陷（填充色谱柱）3、干扰峰(a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱）4、流动相PH选择错误 （调整PH值.对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰)5、样品与填料表面的溶化点发生反应（a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、换柱子)B、 峰前延1、柱温低（升高柱温） 2、样品溶剂选择不恰当 （使用流动相作为样品溶剂)3、样品过载 （降低样品含量） 4、色谱柱损坏 （见A1、A2）C、 峰分叉1、保护柱或分析柱污染图 （取下保护柱再进行分析。如果必

9、要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱.）2、样品溶剂不溶于流动相 (改变样品溶剂.如果可能采取流动相作为样品溶剂。）D、 峰变形1、样品过载 (减少样品载量）E、 早出的峰变形1、样品溶剂选择不恰当 （a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂）F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰1、柱外效应(a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池)G、 K增加时,脱尾更严重1、二级保留效应，反相模式（a、加入三乙胺(或碱性样品）b、加入乙酸(或酸性样品）c、

10、加入盐或缓冲剂(或离子化样品）d、更换一支柱子）2、二级保留效应，正相模式（a、加入三乙胺(或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品)c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法）3、二级保留效应,离子对 （加入三乙胺（或碱性样品）H、 酸性或碱性化合物的峰拖尾1、缓冲不合适 (a、使用浓度50100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液）I、 额外的峰1、样品中有其他组份 (正常)2、前一次进样的洗脱峰 (a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速)3、空位或鬼峰 （a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积）J、 保留时间波动1、温控不当 (调好柱温）

11、 2、流动相组分变化 (防止变化(蒸发、反应等）)3、色谱柱没有平衡 (在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱）K、 保留时间不断变化1、流速变化 （重新设定流速) 2、泵中有气泡 (从泵中除去气泡)3、流动相选择不恰当 (a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相)L、 基线漂移1、柱温波动,即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。 (控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图)2、流动相不均匀，流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移.（使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进

12、行脱气，使用中使用氦气。）3、流通池被污染或有气体 （用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1M的硝酸。（不要用盐酸）)4、检测器出口阻塞，高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线 (取出阻塞物或更换管子.参考检测器手册更换流通池窗）5、流动相配比不当或流速变化 （更改配比或流速，定期检查流动相组成及流速）6、柱平衡慢,特别是流动相发生变化时 （用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗)7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 （检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂）8、样品中有强保留的物质（高K值)以馒头峰样被洗脱出

13、，从而表现出一个逐步升高的基线。(使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子）9、使用循环溶剂,但检测器未调整（重新设定基线.当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相）10、检测器没有设定在最大吸收波长处。（将波长调整至最大吸收波长处） 采用反相色谱法分离弱酸(3pKa7)或弱碱(7pKa8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留,并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1醋酸溶液;分析弱碱样品时,通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。 注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互作用，减轻或消除峰拖尾现象.所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。