液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因.pdf

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1、液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因气相色谱峰拖尾、响应低甚至不出峰的主要原因A)系统污染、惰性下降系统惰性不好对活性组分峰形及响应的影响尤为明显。建议选用惰性优异的低流失色谱柱和色谱耗件，如去活的衬管。如果系统已经被污染,应及时对进样口和检测器进行维护。恢复被污染色谱柱的方法主要有：将进样口端截去 0。51米，根据样品来源做进一步的判断，如果是半挥发污染物，还可以进一步考虑对色谱柱进行老化。污染严重时可截去更长或用溶剂彻底清洗色谱柱（必需是交联键合固定相）B）色谱柱安装不正确或系统其他部位存在死体积毛细管柱在进样口和检测器的安装位置不当将影响峰形,请严格按照仪器的使用说明正确安装色谱柱。其他

2、与毛细管柱相连接的部位也应注意降低死体积。C）系统漏气需定期检查系统气密性、更换进样口备件。使用非纯石墨密封圈时，注意安装后的几次温度升降之后追加一次拧紧。D)方法条件不佳对于低挥发性样品，需注意提高进样口和/或检测器、色谱柱、传输管线等处的温度，防止冷凝现象。有些样品在某些检测器的响应确实不高（甚至没有响应），如果样品不出峰，又没有参考响应值,应加大进样量确认出峰位置，并利用标样考查样品的响应值。E)其他可能导致峰拖尾的原因：不分流模式下，分流放空阀开启过晚（通常应在 0。51。0分钟之间）手动进样速度过慢检测器尾吹气流量不足PLOT色谱柱样品过载组分共流出含磷化合物在 NPD白色铷珠上易拖

3、尾,建议使用黑色铷珠。可以提高传质速率，提高柱效，但柱温过高又会使组分间分离度减小。采用较低的柱温，减少固定相的用量和适当增加载气的流速，可在短时间内获得良好的分离效果;2 汽化温度应以能使试样迅速汽化而不产生分解为准，通常比柱温高2070，柱温应比试样中各组分的平均沸点低 2030,对于沸点范围较宽的试样，宜采用程序升温；增加柱长会提高分离度，但分析时间增长,因此,一般在满足一定分离度的条件下尽可能用短柱子；进样应在 1 秒以内完成，以减小峰变宽；3 点火氢焰气相色谱仪,开机时需要点火,有时因各种原因致使熄火后,也需要点火。然而，我们经常会遇到点火不着的情况。下面介绍两种点火技巧3。1 加大

4、氢气流量法先加大氢气流量,点着火后,再缓慢调回工作状况。此法通用。3.2 减少尾吹气流量法先减少尾吹气流量,点着火后,再调回工作状况.此法适用于仍用氢气作载气,用空气作助燃气和尾吹气情况。4 气比的调节氢焰气相色谱仪三气的流量比,有关资料均建议为:氮气氢气空气=1110.但由于转子流量计指示流量的不准确性,事实上谁会去苛求这个配比呢?本人认为，为各气施以良好匹配、目的是既有高的检测器灵敏度又能有较好的分离效果,还不容易熄火.4.1 氮气流量的调节在色谱柱条件确定后，样品组分分离效果的好坏，氮气的流量大小是决定因素.调节氮气流量时,要进样观察组分分离情况,直至氮气流量尽可能大且样品组分有较好分离

5、为止。4.2 氢气和空气流量的调节氢气和空气流量的调节效果，可以用基流的大小来检验。先调节氢气流量,使之约等于氮气的流量,再调节空气流量.在调节空气流量时，要观察基流的改变情况.只要基流在增加，仍应相向调节，直至基流不再增加不止。最后,再将氢气流量上调少许.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因5 进样技术在气相色谱分析中，一般是采用注射器或六通阀门进样.在考虑进样技术的时候，主要是以注射器进样为对象。5。1 进样量进样量与气化温度、柱容量和仪器的线性响应范围等因素有关，也即进样量应控制在能瞬间气化,达到规定分离要求和线性响应的允许范围之内。填充柱冲洗法的瞬间进样量：液体样品或固体样品溶液一般为

6、 0.0110l，气体样品一般为 01110ml，在定量分析中，应注意进样量读数准确。(1）排除注射器里所有的空气用微量注射器抽取液体样品进,只要重复地把液体抽入注射器又迅速把其排回样品瓶,就可做到这一点。还有一种更好的方法，可以排除注射器里所有的空气。那就是用计划注射量的约2 倍的样品置换注射器 35次，每次取到样品后,垂直拿起注射器，针尖朝上。任何依然留在注射器里的空气都应当跑到针管顶部。推进注射器塞子，空气就会被排掉。（2)保证进样量的准确用经置换过的注射器取约计划进样量 2 倍左右的样品，垂直拿起注射器，针尖朝上,让针穿过一层纱布,这样可用纱布吸收从针尖排出的液体。推进注射器塞子，直到

7、读出所需要的数值.用纱布擦干针尖。至此准确的液体体积已经测得,需要再抽若于空气到注射器里。如果不慎推动柱塞,空气可以保护液体使之不被排走。5.2 进样方法双手拿注射器。用一只手(通常是左手)反针插入垫片,注射大体积样品(即气体样品）或输入压力极高时，要防止从气相色谱仪来的压力把柱塞弹出(用右手的大拇指)。让针尖穿过垫片尽可能深的进入进样口,压下柱塞停留 12 秒钟，然后尽可能快而稳地抽出针尖（继续压住柱塞)。5。3 进样时间进样时间长短对柱效率影响很大。若进样时间过长，遇使色谱区域加宽而降低柱效率.因此,对于冲洗法色谱而言,进样时间越短越好,一般必须小于 1 秒钟。液相色谱中峰出现拖尾或出现双

8、峰的原因液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因A、峰拖尾1、筛板阻塞（a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱）2、色谱柱塌陷（填充色谱柱）3、干扰峰(a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱）4、流动相 PH 选择错误（调整 PH 值.对于碱性化合物,低 PH 值更有利于得到对称峰)5、样品与填料表面的溶化点发生反应（a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、换柱子)B、峰前延1、柱温低（升高柱温）2、样品溶剂选择不恰当（使用流动相作为样品溶剂)3、样品过载（降低样品含量）4、色谱柱损坏（见 A1、A2）C、峰分叉1、保护柱或分析柱污染图（取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护

9、柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱.）2、样品溶剂不溶于流动相(改变样品溶剂.如果可能采取流动相作为样品溶剂。）D、峰变形1、样品过载(减少样品载量）E、早出的峰变形1、样品溶剂选择不恰当（a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂）F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰1、柱外效应(a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池)液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因G、K增加时,脱尾更严重1、二级保留效应，反相模式（a、加入三乙胺(或碱性样品）b、加入乙酸(或酸性

10、样品）c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品）d、更换一支柱子）2、二级保留效应，正相模式（a、加入三乙胺(或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品)c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法）3、二级保留效应,离子对（加入三乙胺（或碱性样品）H、酸性或碱性化合物的峰拖尾1、缓冲不合适(a、使用浓度 50100mM 的缓冲液 b、使用 Pka 等于流动相 PH 值的缓冲液）I、额外的峰1、样品中有其他组份(正常)2、前一次进样的洗脱峰(a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速)3、空位或鬼峰（a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积）J、保留时间波动1、温控不当(调好柱

11、温）2、流动相组分变化(防止变化(蒸发、反应等）)3、色谱柱没有平衡(在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱）K、保留时间不断变化1、流速变化（重新设定流速)2、泵中有气泡(从泵中除去气泡)3、流动相选择不恰当(a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相)L、基线漂移1、柱温波动,即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。(控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图)2、流动相不均匀，流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移.（使用 HPLC 级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用

12、中使用氦气。）3、流通池被污染或有气体（用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用 1M 的硝酸。（不要用盐酸）)4、检测器出口阻塞，高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线(取出阻塞物或更换管子.参考检测器手册更换流通池窗）5、流动相配比不当或流速变化（更改配比或流速，定期检查流动相组成及流速）6、柱平衡慢,特别是流动相发生变化时（用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用 10-20 倍体积的新流动相对柱子进行冲洗)7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成（检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC 级的溶剂）8、样品中有强保留的物质（高 K值)以馒头峰样被洗脱出，从而表现

13、出一个逐步升高的基线。(使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子）9、使用循环溶剂,但检测器未调整（重新设定基线.当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相）10、检测器没有设定在最大吸收波长处。（将波长调整至最大吸收波长处）采用反相色谱法分离弱酸(3pKa7)或弱碱(7pKa8)样品时，通过调节流动相的 pH 值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留,并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH 值越小，组分的 k 值越大，当 pH 值远远小于弱酸的 pKa 值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用 50mmol/L 磷酸盐缓冲液和 1醋酸溶液;分析弱碱样品时,通常在流动相中加入少量弱碱，常用 50mmol/L 磷酸盐缓冲液和 30mmol/L 三乙胺溶液。注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互作用，减轻或消除峰拖尾现象.所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。