脲酶活性的测定.pdf

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1、-大豆制品中脲酶活性的测定大豆制品中脲酶活性的测定定性法：定性法：酚红法酚红法一、原理：酚红指示剂在 pH 6.4-8.2 时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶在 pH=7.0，T=30时可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断脲酶活性的大小。二、仪器和试剂：粉碎机：粉碎时不产生强烈发热；分析天平；25ml 纳式比色管；恒温水浴锅；0.1%酚红指示剂：0.1g 苯酚红溶于 100ml 95%乙醇溶液；结晶尿素；三、方法：将试样粉碎，准确称取 0.050.001g 试样于 25ml 纳式比色管，加入 0.2g 结晶尿素及 5 滴酚红指示剂，加入 25ml 蒸馏水，摇

2、动 10s，立即置于 300.5水浴锅中，开始计时，观察溶液颜色变化，5min后，取出比色管，摇匀，观察溶液颜色。空白试验：不加尿素，其他同上。品质判定：如果溶液为明显的粉红色，则认为该大豆制品脲酶活性超标，为不合格产品。-优质资料-0-1min 变红，活性非常强（1.0）；1-2min 变红，活性大概 0.5-1.0；2-5min 变红，活性大概 0.3-0.5。四、注意事项：1.粉碎样品时，不应产生大量热，否则会影响结果判定；2.称量样品时，一定要将样品混合均匀，否则会造成试验误差；3.试样和空白试验同时操作，过程要迅速，防止时间影响。尿尿素素-酚红法酚红法一、原理：酚红指示剂在 pH 6

3、.4-8.2 时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红样品占所有样品的比例来判断脲酶活性的大小。二、仪器和试剂：表面皿；0.2N 氢氧化钠溶液：称取 0.8g 氢氧化钠溶于 100ml 蒸馏水；1.0N 硫酸溶液：移取 7.0ml 浓硫酸溶于 500ml 蒸馏水；尿素-酚红试剂：用 500ml 烧杯将 0.8g 酚红溶于 20ml 0.2N 氢氧化钠溶液，用蒸馏水稀释至约300ml，加入 60g 尿素，并溶解之，转移至 2L 容量瓶，冲洗烧杯数次,加蒸馏水至约 1.5L，加入 9.4ml 1.0N硫酸溶液，用蒸馏水定容至2L；此时溶液应具有明亮

4、的琥珀色；（过段时间溶液会变为深橘红色，可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶液再次变为琥珀色）-优质资料-三、方法：将一满匙样品放入表面皿中，摊平，将以调好的尿素-酚红试剂滴入表面皿中的样品上，直至完全浸湿，停留 5min，观察样品的颜色反应。如果红斑面积多于 20%，则认为该样品脲酶活性超标，为不合格产品。四、注意事项：1.对于样品较粗、具有大块状的样品，最好将其稍微粉碎，亦不可太细，否则不容易观察；2.样品一定要铺平，容易观察；3.溶液保质期为 3 个月，最好 1 个月内用完；4.此方法容易受颗粒度影响。定量法：定量法：滴定法滴定法一、原理：在 300.5下精确保温 30min，尿素酶催化尿素水

5、解产生氨的反应，用过量盐酸中和所产生的氨，再用 KOH 标准溶液回滴，以每克大豆制品每分钟分解尿素所释放的氨态氮的含量来表示脲酶活性的大小。二、仪器和试剂：粉碎机：粉碎时不应产生大量热；分析天平；25ml 纳式比色管；-优质资料-恒温水浴锅；碱式滴定管；尿素-磷酸盐缓冲液：溶液3.403g 磷酸二氢钾于约 100ml 新蒸馏水，溶解 4.335g 磷酸氢二钾于约 100ml 新蒸馏水，然后将；两种溶液合并配成 1L，其pH 应为 7.0。再将30g 尿素溶解于此缓冲溶液中，有效期一个月（现配现用）；盐酸溶液：0.1mol/L；氢氧化钾溶液：0.1mol/L；混合指示剂；三、方法：样品粉碎，并且

6、全部过 200um 样品筛。（粉碎时不可产热）称取 0.2g（准确至 0.0002g）样品于纳式比色管中，加10ml 尿素缓冲液，立即盖好剧烈振摇后，马上置于300.5水浴锅内，准确计时 30min10s（要求每个试样加入尿素缓冲液的时间间隔保持一致）。停止反应时再以相同的时间间隔加入 10ml 盐酸（0.1mol/L），振摇后迅速冷却至 20，将比色管内容物全部转入锥形瓶中，用20ml 蒸馏水冲洗数次，加 8-10 滴混合指示剂，以 KOH 标准溶液滴定至蓝绿色。另取纳式比色管作空白，称0.2g 样品，加入10ml 盐酸，振摇后加 10ml 尿素缓冲液，立即盖好剧烈振摇，马上置于 300.5

7、水浴锅，计时保持 30min10s，停止反应时将其迅速冷却至 20将比色管内容物全部转入锥形瓶中，用 20ml 蒸馏水冲洗数次，加 8-10 滴混合指示剂，以 KOH 标准溶液滴定至蓝绿色。-优质资料-四、计算：X=CKOH*（V0-V）14/（m30）；X：单位 mg/（gmin），以氨态氮计；CKOH：氢氧化钾浓度；V0：空白消耗氢氧化钾溶液的体积，ml；V：样品消耗氢氧化钾的体积，ml；14：氮的摩尔质量，g/mol；m：样品质量，g；30：反应时间，min；五、注意事项：1.粉碎样品时，不应产生大量热，否则会使结果偏低；2.称量样品时，一定要将样品混合均匀，否则会造成试验误差；3.各样品加缓冲液和盐酸的时间间隔要一致；4.准确计时 30min10s，否则试验作废；5.尿素-磷酸盐缓冲液现配现用；6.平行样或者重复样在 X0.2 时，不大于平均值的 20%，X0.2时，不大于平均值的 10%。结果以算术平均值表示。-优质资料