NY∕T 1248.6-2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第6部分：腐霉茎腐病(农业).pdf

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1、ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 1248.6一2016玉米抗病虫性鉴定技术规范第6部分:腐霉茎腐病Technical specification on evaluation of maize resistance to pests-Part 6:Pythium stalk rot 2016-10-26发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部发布目U1=1 NY/T 1248(玉米抗病虫性鉴定技术规范拟分为13个部分:第1部分:大斑病;第2部分:小斑病;一一第3部分:丝黑穗病;一一第4部分:矮花叶病;一一第5部分:玉米民一一第6部分:腐霉茎腐病;

2、一一第7部分:镰抱茎腐病;一一第8部分:镰抱穗腐病;一-第9部分:纹枯病;一一第10部分:弯抱叶斑病;一一第11部分:灰斑病;一一第12部分:瘤黑粉病;一一第13部分:粗缩病。本部分为NY/T1248的第6部分。本部分按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本部分由农业部种子管理局提出并归口。NY/T 1248.6-2016 本部分起草单位:中同农业科学院作物科学研究所、全国农业技术推广服务中心、河北省农林科学院植物保护研究所、四川省农业科学院植物保护研究所、吉林省农业科学院植物保护研究所。本部分主要起草人:王晓鸣、孙世贤、石洁、李晓、晋齐鸣。I 1 范围玉米抗病虫性鉴定技术规范第6部分

3、:腐霉茎腐病本部分规定了玉米抗腐霉茎腐病鉴定技术方法和抗性评价标准。NY/T 1248.6-2016 本部分适用于栽培玉米CZeamays L.)自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生玉米和玉米近缘种对腐霉茎腐病抗性的田间鉴定和评价。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1 土壤接种soil inoculation 将病原菌放置在植株根系附近土壤中的接种方法。2.2 腐霉茎腐病pythium stalk rot 由卵菌中的腐霉菌CPythiumspp.)侵染所引起的以玉米植株基部茎节茎髓组织分解为特征的玉米病害。该病害引起玉米植株茎节内部腐烂、叶片青灰色干枯、果穗下垂、籽粒灌浆不足

4、和根系变黑腐烂的症状。3 腐霉菌接种体制备3.1 病原菌分离以常规组织分离法从发病植株茎轩基部节位的发病茎髓组织中分离茎腐病致病腐霉菌。病原菌经形态学鉴定确认为腐霉菌CPythiumspp.)C参见附录A)后，进行纯化培养和致病性测定。3.2 致病种鉴定对用作抗病性鉴定接种体的病原菌应进行种的鉴定。鉴定采用形态学和分子鉴定的方法(参见附录A)，确定病原菌的种级地位。3.3 病原菌繁殖在接种前需要进行病原菌的繁殖。常用方法为将在培养基上培养的病原菌接种于经高压灭菌的玉米粒上扩大繁殖。培养7d10 d后，菌丝布满玉米粒，即可用于接种(参见附录A)。可采用不同地点来源的多个腐霉菌菌株分别繁殖后混合接

5、种。4 抗病性鉴定圃4.1 鉴定圃设置鉴定圃应具备良好的自然发病环境，能够进行灌溉。4.2 鉴定设计鉴定材料随机排列或顺序排列，在进行选育品种抗病性鉴定时，每30行鉴定材料设1组已知高抗、高感对照材料(参见附录B);在进行种质资源抗病性鉴定时，每50行鉴定材料设1组已知高抗、高感对照材料。1 NY/T 1248.6-2016 4.3 种植要求鉴定材料播种时间与大田生产播种时间相同或适当调整，以使植株发病期能够与适宜的气候条件(降雨与温度)相遇。鉴定小区行长5.00m，行距0.60m或0.65m，条播或穴播，每行留苗25株30株，低于25株时视为该品种/材料鉴定无效。鉴定种质资源时，每份鉴定材料

6、种植1行;鉴定选育品种时，每份材料种植2行。土壤肥力水平和耕作管理与大田生产相同。5 接种5.1 接种时期接种时期为玉米大喇叭5.2 接种方法采用土壤接种法。霉菌的玉米粒投入土的湿润，以使病原5.3 接种前后的腐霉菌为喜6.2 调查方法调查者以株。计数每份16.3 病情分级式中:X 发病株率，单位为Y 发病株数，单位为株;N一一调查总株数，单位为株。病情分级及相对应的植株发病株率描述见表1。表1玉米对腐霉茎腐病抗性鉴定的病情级别划分病情级别描述l 发病株二和o%.0%3 发病株率.1%10.0%3 发病株率10.1%30.0%7 发病株率30.1%40.0%9 发病株率40.1%100%2 分

7、根系，将长满腐土，并保持土壤足的水分。度不低于即为发病(1)NY/T 1248.6-2016 7 抗性评价7.1 鉴定有效性判别当设置的高感对照材料发病株率超过40%时，该批次鉴定视为有效。7.2 抗性评价标准依据鉴定材料发病程度(病情级别)确定其抗性水平，划分标准见表2。表2玉米对腐霉茎腐病抗性的评价标准，并依此结果对抗性评价3 NY/T 1248.6-2016 附录A(资料性附录)玉米腐霉茎腐病病原菌A.1 学名和形态描述肿囊腐霉，学名:Pythium inflatum Matthews 瓜果腐霉，学名:Pythium a phanidermatum CEdson)Fitzpatrick

8、异名:Rheosporngwmahanidermatum Edson Nematos户orgluma户haidermatumC Edson)Fi tzp.Pythium butleri Subramanian 禾生腐霉，学名:Pythium graminicola Subramaniam 异名:Pythium graminicola Subramaniam var.stagi Hhnk 棘腐霉，学名:P ythium acanthicum Drechs1er 报道还有其他一些腐霉种也能够引起玉米的腐霉茎腐病。腐霉菌寄主范围广泛，以土壤为主要栖息地，并可以以卵子包子的方式在土壤中存活多年。腐霉菌

9、菌丝无色、一般元分隔，但老菌丝中可见分隔;菌丝较粗，宽度为4m8m;游动抱子囊形态在不同种间有差异，球状、手指状、棒状、不规则状等，大小不等;游动于包子肾形，具有双尾鞭，游动一段时间后变为球状休眠于包子;藏卵器球状，顶生或间生，表面光滑或有微刺等纹饰;雄器与藏卵器同丝或异丝，一个藏卵器上着生一个或多个雄器;卵抱子满器或非满器。腐霉菌在人工培养基上生长迅速，菌落为圆形。A.2 腐霉菌的培养和保存水琼、脂培养基CWateragar medium,WA):琼脂18g20 g，水1000mL。此培养基适用于腐霉菌的分离，培养温度为2 50C。马铃薯葡萄糖琼脂培养基CPotatodextrose aga

10、r medium,PDA):马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18 g20 g，水1000 mL。此培养基用于腐霉菌的培养和保存，培养温度为250C280C，保存温度为100C 150C。皮氏培养液CPetriss01 ution):此培养液用于诱导腐霉菌游动抱子囊的产生，培养温度为室温。A.3 腐霉菌的扩大培养采用玉米粒培养基进行扩大培养。玉米粒浸泡12h，然后煮30min40 min，装人三角瓶或耐高温高压的聚丙烯塑料袋中于1210C下灭菌1h，冷却后将在PDA上培养的病原菌接人三角瓶或塑料袋中，250C280C下培养。A.4 腐霉茵的分子鉴定对腐霉菌脱氧核糖核酸CDeoxyribonuc

11、leicacid,DNA)中的内转录间隔区CInterna1 Transcribed Spacer,lTS)区段进行扩增，上游引物为lTS4(5-TCC TCC GCT T A T TG A T A T GC-3)，下游引物为DC6(5-GAG GGA CTT TTG GGT AAT CA-3)，扩增片段大小约为1300bp。对扩增片段进行序列测定，然后与已知腐霉菌的种lTS序列比对，确定分离物的种。4 NY/T 1248.6-2016 附录B(资料性附录)玉米腐霉茎腐病抗性鉴定对照材料B.1 抗病对照自交系齐319，对腐霉茎腐病表现稳定的高抗CHighlyresistant,HR)，选自美国

12、玉米杂交种P78599。B.2 感病对照自交系掖478，对腐霉茎腐病表现稳定的高感CHighlysusceptible,HS)，选自玉米自交系U8112和沈5003的组配后代。D NY/T 1248.6-2016 参考文献 lJCharlotte E,1943.A Pythium slalk rol of cornJ.Journal of Agricultural Research.66(1):21-40 2J蔡武雄，段中汉，杜金池，1991.玉米茎腐病抗病品种之筛选方法J.rl:J华农业研究，40(1):45-51 3JShekhar M.,Kumar S.2012.lnoculaln me

13、thods and diseasc rali吨scalesfor maizc discascsR.Directorale of Maize Research(lndian Council of Agricultural Rescarch).Pusa Campus,Ncw Delhi 4Szke C.Arends T.13nis P.el al,2009.Fusarium slalk rOI:a biotic Slress faclOr decisive for maize stalk slrcngthM.VIIl.Alps-Adria Scientific Workshop.Neum.Bosnia-Hcrzegovina 6