第三节动物的克隆.pptx

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1、动物的细胞融合技术及其应用动物的细胞融合技术及其应用 世界卫生组织（世界卫生组织（WHO）预测）预测21世纪恶性肿瘤将成为人类世纪恶性肿瘤将成为人类“第一杀手第一杀手”。中国已成为世界第一癌症大国，年新中国已成为世界第一癌症大国，年新发病例约发病例约160万，死亡达万，死亡达130万，现癌症病万，现癌症病人人200多万，平均每死亡多万，平均每死亡5人中，就有一人人中，就有一人死于癌症。死于癌症。癌症不仅严重威胁我国人民的生命与癌症不仅严重威胁我国人民的生命与健康，而且给家庭、社会、国家造成了沉健康，而且给家庭、社会、国家造成了沉重的负担。重的负担。小资料：小资料：癌症的可怕之处：癌症的可怕之处

2、：无限增殖，易转移无限增殖，易转移癌症治疗常用手段：癌症治疗常用手段：手术手术中医中医化疗化疗放疗放疗小资料：小资料：缺点：缺点：无法根除，无法根除，“伤及无辜伤及无辜”生物导弹生物导弹由单克隆抗体与药物、酶或放射性同位素由单克隆抗体与药物、酶或放射性同位素配合，因带有单克隆抗体而能配合，因带有单克隆抗体而能自动导向自动导向，精确地瞄准和捕获精确地瞄准和捕获靶细胞（癌细胞），与靶细胞（癌细胞），与之结合，并由其携带的药物产生治疗作用。之结合，并由其携带的药物产生治疗作用。小资料：小资料：抗体抗体：免疫免疫中，由中，由 分分 泌，能泌，能特异性识别抗原并与之结合特异性识别抗原并与之结合的的Y型蛋

3、型蛋 白质。白质。体液体液效应效应B细胞（浆细胞）细胞（浆细胞）人们人们如何获得针对某种抗原的抗体如何获得针对某种抗原的抗体?传统方法：产量低，特异性差传统方法：产量低，特异性差（单克隆抗体）（单克隆抗体）单个单个B淋巴淋巴细胞细胞细细胞胞群群克隆克隆化学性质单化学性质单一一、特异性、特异性强的抗体强的抗体一个一个B B淋巴细胞只产生淋巴细胞只产生一种一种特异性抗体特异性抗体生生产产不同不同B B淋巴细胞产生淋巴细胞产生不同不同抗体抗体（单（单克隆）克隆）科勒科勒米尔斯坦米尔斯坦荣获荣获19841984年诺贝尔生理学或医学奖年诺贝尔生理学或医学奖涉及细胞工程技术：动物细胞融合、动物细胞培养涉及

4、细胞工程技术：动物细胞融合、动物细胞培养方案方案：让：让B淋巴细胞淋巴细胞与与骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合，融合，再进行细胞培养。再进行细胞培养。任务一：任务一：阅读课本阅读课本31页页,“细胞融合与细胞杂交细胞融合与细胞杂交”部分，部分，找出细胞融合、细胞杂交的概念，诱导动物细找出细胞融合、细胞杂交的概念，诱导动物细胞融合的方法，完成学案。胞融合的方法，完成学案。物理法：物理法：化学法：化学法：生物法生物法：灭活仙台病毒灭活仙台病毒聚乙二醇（聚乙二醇（PEG）电刺激等电刺激等植物原生质体融合、动物细胞融合的比较植物原生质体融合、动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物原生质体融合植物原生质体融合动

5、物细胞融合动物细胞融合原理原理诱导方法诱导方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性物理（电刺激物理（电刺激）化学化学（聚乙二醇）（聚乙二醇）物理（电刺激）物理（电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）灭灭活的病毒活的病毒任务二：任务二：选择下列材料，为制备针对肝癌细胞的单克隆选择下列材料，为制备针对肝癌细胞的单克隆抗体提供思路抗体提供思路艾滋病病毒、艾滋病病毒抗原、肝癌细胞、肝癌细胞抗原艾滋病病毒、艾滋病病毒抗原、肝癌细胞、肝癌细胞抗原小鼠、小鼠骨髓瘤细胞、兔子骨髓瘤细胞小鼠、小鼠骨髓瘤细胞、兔子骨髓瘤细胞细胞培养液细胞培养液（细胞分离和培养、抗体分离的具体方法不作要求）（

6、细胞分离和培养、抗体分离的具体方法不作要求）单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程注射肝癌注射肝癌细胞抗原细胞抗原效应效应B淋巴淋巴细胞细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞融合融合杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养继续继续培养培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外：培养液培养体外：培养液培养体内：注射体内：注射到小鼠腹腔到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体1 1、为什么、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞选用小鼠骨髓瘤细胞与与B B细胞融合？细胞融合？细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有

7、继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B B细胞分泌抗体细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体。单克隆抗体。2 2、诱导融合得到的都会是杂交、诱导融合得到的都会是杂交瘤细胞吗？瘤细胞吗？3 3、杂交瘤细胞都能合成需要的、杂交瘤细胞都能合成需要的抗体吗？抗体吗？、筛选、筛选4 4、为什么注射肝癌细胞抗原？、为什么注射肝癌细胞抗原？筛选、筛选、单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体的优点：单克隆抗体的优点：化学性质化学性质单一、特异性强、单一、特异性强、灵敏度高灵敏度高HIVHIV诊断试剂盒、早早孕试纸等，其本质都

8、是诊断试剂盒、早早孕试纸等，其本质都是单克隆抗体单克隆抗体 在癌症等人类疑难疾病的诊断和治疗在癌症等人类疑难疾病的诊断和治疗中，中，单克隆抗体单克隆抗体与药物、酶或放射性同位与药物、酶或放射性同位素配合，素配合，制成生物导弹制成生物导弹，精确地瞄准和捕，精确地瞄准和捕获靶细胞，发挥其他常规药物无法达到的获靶细胞，发挥其他常规药物无法达到的独特和卓越独特和卓越效能，正得到越来越广泛地应效能，正得到越来越广泛地应用。用。归纳小结归纳小结动物细胞融合概念：原理：诱导方法：应用：单克隆抗体的制备物理：化学：生物：例：例：人绒毛膜促性腺激素人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养是女性怀孕后胎盘

9、滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用单克隆抗体可用于早孕的诊断。于早孕的诊断。下图是抗下图是抗HCG单单克隆抗体制备流克隆抗体制备流程示意图，请分程示意图，请分析回答：析回答：(1)制备单克隆抗体过程中要用到制备单克隆抗体过程中要用到_和和_技术。技术。(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于相当于_，使小鼠产生分泌相应，使小鼠产生分泌相应_的淋巴细胞，此的淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的过程属于特异性免疫中的_免疫。免疫。动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合抗原抗原抗体抗体体液体液（3

10、）在细胞内）在细胞内DNA合成一般有两条途径，主途径是在合成一般有两条途径，主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而，而氨基喋呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌氨基喋呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。合成没有此辅助途径。利用利用DNA合成途径不同的特点配制的合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有培养基含有多种成分，其中添加的多种成分，其中添加的_成分具有筛选杂交瘤成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。细胞的作用。最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是_ _。（4）此过程生产的单克隆抗体可以与）此过程生产的单克隆抗体可以与_特异性结合，从而诊断早孕。特异性结合，从而诊断早孕。氨基蝶呤氨基蝶呤能无限增殖能无限增殖并分泌特异性抗体并分泌特异性抗体人绒毛膜促性腺人绒毛膜促性腺激素（或激素（或HCG）