维生素A (2).ppt

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1、维生素维生素维生素维生素A A的分析的分析的分析的分析临床药学 第组讲解员：施文玲 胡家勇PPT制作：郭贤旋内容来源：武丰瑾 陈燕兰 贺智杰 马天著 陈天威学习要求学习要求1.掌握维生素A的化学结构、理化性质以及与分析方法间的关系，专属鉴别反应、主要的含量测定方法和原理。2.熟悉维生素A的有关物质、检查方法与原理。维生素A的来源、成分主要内容主要内容主要内容主要内容维生素A的结构与性质鉴别试验含量测定杂质检查维生素维生素A A的来源、成分的来源、成分不饱和脂肪醇主要来自鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油（通称鱼肝油）包括:VitA1（视黄醇）、VitA2（去氢 维生素A）和VitA3（去水维生素A

2、）等。生物活性：VitA1活性最高，VitA2是VitA1的30%-40%，VitA3是VitA1的0.4%。故通常所说的维生素A是指维生素A1。维生素维生素A A的来源、成分的来源、成分维生素生素A1视黄醇黄醇维生素生素A23-去去氢视黄醇黄醇维生素生素A3脱水脱水维生素生素A维生素A是指人工合成的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液。ChP2010收载结构:为具有一个共轭多烯醇侧链的环 己烯。天然维生素A主要是全反式维生素A。结构与性质R的不同则决定了维生素A的醇式或酯式状态。结构决定性质溶解性（脂溶性）不稳定性（多个不饱和键）紫外吸收特性（共轭多烯醇的侧链结构，最大吸收325-32

3、8nm）与三氯化锑呈色 维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇甲烷溶液中即显蓝色，渐变成红色。鉴别试验 方法：取维生素A油溶液1滴，加三氯甲烷10ml振摇使溶解；取出两滴，加三氯甲烷2ml与25%三氯化锑的三氯甲烷溶液0.5ml，即显蓝色，渐变成紫红色。（一）三氯化锑反应(ChP2010)机制：维生素A和氯化锑（）中存 在的亲电试剂氯化高锑（）作用形成不稳定的蓝色碳正离子。方法：取约相当于10IU的维生素A供试品，加无水乙醇-盐酸（100:1）溶液溶解，应在326nm的波长处有单一的吸收峰。将此溶液水浴加热30秒，迅速冷却，鉴别试验（二）紫外光谱法应在348、367和389nm的波长处有三个尖锐的吸

4、收峰，且在332nm的波长处有较低的吸收峰或拐点。分别取供试品与对照品（不同维生素A脂类）的环己烷溶液(5IU/l)各2l，点于薄层板上，立即展开，空气中挥干，喷以三氯化锑溶液，比较供试品和对照品所显蓝色斑点位置。鉴别试验（三）薄层色谱法 吸附剂：硅胶G 展开剂：环己烷-乙醇（80:20）检查酸值 取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚酞指示剂5滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至显粉红色，再加本品2.0g，振摇使溶解，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，酸值应不大于2.0（附录VIIH）过氧化值检查取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振摇使溶解，加碘化钾的饱

5、和溶液1ml，振摇1分钟，加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）不得过1.5ml。含量测定（一）紫外可见分光光度法（二）高效液相色谱法（三）三氯化锑比色法含量测定（一）紫外可见分光光度法 （三点校正法）对维生素A测定有影响的杂质有：（1）维生素A2和维生素A3（2）维生素A的氧化产物：环氧化物、维生素A醛、维生 素A酸（3）维生素A在光照条件下产生的无活性的聚合物：鲸醇（4）维生素A的异构体及其他为了得到准确的测定结果，消除非维生素A物质的无关吸收所引起的误差，而求得维

6、生素A的真实含量。因此需要采用“三点校正法”。含量测定三点校正法：是在三个波长处分别测定吸收度，根据校正公式计算吸收度A校正后，再计算含量，故本法称为“三点校正法”。“三点校正法”测定原理 1、杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大而吸收度变小。2、物质对光的吸收具有加和性。即样品各波长的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和。（三点校正法）波长的选择：（1）等波长差法：使（2）等吸收比法：使含量测定（直接测定法）测定方法：直接测定法和皂化法1.直接测定法：直接测定法适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定。1）方法：取维生素A醋酸酯适量，精密称定，加环己烷制成每1ml中含9

7、-15单位的溶液。然后在300、316、328、340和360nm五个波长处分别测定吸光度，确定最大吸收波长（应为328nm）。2）计算：A.求 ：由A=CL公式，求得 =A/(CL)B.求效价：C.求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量：含量测定（直接测定法）3 3）换算因子：每单位）换算因子：每单位 数值所相当的效价。数值所相当的效价。4）A值的选择：含量测定（皂化法）供试品未明纯度时，就会出现含量测定方法的选择，直接法比皂化法简单易操作，但只要干扰过多时，直接法却并不适用。2.皂化法：适用于维生素A醇的测定。1）方法：精密称取一定量供试品，加氢氧化钾乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再经乙醚提

8、取、洗涤、滤过、浓缩等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素A为9-15单位的溶液，在300、310、325、334nm波长处测定吸收度，并确定最大吸收波长（应为325nm）2）计算：A.求 ：由A=CL公式，求得 =A/(CL)B.求效价：C.求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量：含量测定（皂化法）3）A值的选择：一、当最大吸收波长不在323-327nm之间或A300/A325的比值大于0.73时，应采用色谱法将未皂化部分纯化后再进行测定。（供试品杂质含量过高）二、当最大吸收波长在323-327nm之间，且A300/A325的比值小于或等于0.73，对A值进行判别后便可代入公式计

9、算含量测定（三点校正法）总结：1.纯度高的就用直接法2.杂质高的就用皂化法3.未知纯度高低就要判断（1）先看吸光度比值的差值范围（2）选择吸光度A328与A328（校正）（3）将选择出的A值带入对应公式 直接法皂化法（二）高效液相色谱法适用于维生素A醋酸酯原料及其制剂中维生素A的含量测定。填充剂：硅胶流动相：正己烷异丙醇（997:3）检测波长：325nm加入碘试液0.2ml目的：将对照品中部分维生素A醋酸酯转化成其顺式异构体，进行分离度考察。含量测定（二）高效液相色谱法含量测定测定法：精密称取供试品适量（约相当于15mg维生素A醋酸酯），置100ml量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，精密量取5

10、ml，置50ml量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密量取维生素A对照品适量（约相当于15mg维生素A醋酸酯），同法制成对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，含量应符合规定。（三）三氯化锑比色法原理：维生素A与三氯化锑的无水三氯甲烷溶液作用，产生不稳定的蓝色，在618620nm的波长处有最大吸收，符合Beer定律三氯化锑比色专属性差，且易水解产生SbOCl使溶液浑浊，影响比色蓝色不稳定，要求操作迅蓝色不稳定，要求操作迅速，一般在加入三氯化锑速，一般在加入三氯化锑后应后应在在510s内测定内测定含量测定Q&A time!1、三点校正紫外分光光度法测定维生素A 醋酸酯含量时，采用的溶剂是 A.甲醇 B 丙酮 C 乙醚 D 正己烷 E 三氯甲烷 D3Q&A time!2、维生素A采用的鉴别方法是 A 硫色素反应 B 三氯化锑反应 C 与硝酸银反应 D 水解后重氮化偶合反应 E 麦芽粉反应 BQ&A time!3、维生素A的含量测定方法有 A 汞量法 B 三点校正紫外分光光度法 C 高效液相色谱法 D 双相滴定法 E 三氯化锑比色法 BCEThank you for your listening！临药 第组 出品