2.3分解纤维素的微生物的分离的拓展.ppt

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1、5、实验测定链霉素对、实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用种细菌的抗生素效应，用3种细种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线（条等长的平行线（3条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于37条条件下恒温培养件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是下叙述，不正确的是A链霉素能阻止结核菌的生长链霉素能阻止结核菌的生长B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效D链霉素可以用

2、于治疗伤寒病人链霉素可以用于治疗伤寒病人D D(三三)、实验设计、实验设计土壤土壤取样取样选择选择培养培养梯度梯度稀释稀释将样品涂将样品涂布到布到鉴别鉴别培养基培养基挑选挑选菌落菌落什么什么样的样的环境环境取样取样?培养的目的培养的目的?选择培养基的选择培养基的特点特点?挑选什挑选什么样的么样的菌落菌落?鉴别培养基鉴别培养基的特点的特点?如何鉴别如何鉴别?根据根据：微生物：微生物对生存环境的对生存环境的要求，到相应要求，到相应环境中去找；环境中去找；目的：目的：增加纤维素增加纤维素分解菌的浓度，分解菌的浓度，以以确保能够从样品中确保能够从样品中分离到所需要的微分离到所需要的微生物；生物；刚果红

3、染色法刚果红染色法微生物培养基的氨基酸氮源，由酪蛋白微生物培养基的氨基酸氮源，由酪蛋白水解得到，常见商品名称为水解酪素或水解得到，常见商品名称为水解酪素或酶解酪素。酪蛋白水解后富含酶解酪素。酪蛋白水解后富含2121种氨基种氨基酸，氨基酸种类齐全。因此常用于制备酸，氨基酸种类齐全。因此常用于制备培养基。培养基。4.4.酪素酪素 酵母膏实际上是膏状的酵母抽提物，酵酵母膏实际上是膏状的酵母抽提物，酵母抽提物是国家行业标准的规定名称。母抽提物是国家行业标准的规定名称。酵母抽提物以酵母为原料，采用自溶法酵母抽提物以酵母为原料，采用自溶法或加酶水解法工艺，经分离、脱色（或精制或加酶水解法工艺，经分离、脱色

4、（或精制浓缩、喷雾干燥）而成的，含氨基酸、肽、浓缩、喷雾干燥）而成的，含氨基酸、肽、多肽及酵母细胞水溶性成分的产品。包含粉多肽及酵母细胞水溶性成分的产品。包含粉状、与膏状的产品。状、与膏状的产品。酵母膏可以有食品调味与生物发酵培养酵母膏可以有食品调味与生物发酵培养基两大类用途。在生物发酵行业应用还有一基两大类用途。在生物发酵行业应用还有一种习惯叫法是酵母浸膏。种习惯叫法是酵母浸膏。3 3、酵母膏酵母膏问题三问题三：“资料三资料三”中的两种方法各有哪些优点和不足，中的两种方法各有哪些优点和不足，你打算选哪一种？你打算选哪一种？刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经有超过刚果红在筛选纤维素分解菌上的

5、应用已经有超过20年的历史，在本课题中我们给出了两种方法。方法一是年的历史，在本课题中我们给出了两种方法。方法一是传统的方法，传统的方法，缺点是操作繁琐缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用上是纤维素分解菌的作用。方法二的。方法二的优点是操作简便，优点是操作简便，不存在菌落混杂问题不存在菌落混杂问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳

6、性反应物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的的透明圈较为模糊透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。方法二的另因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。方法二的另一缺点是：一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力有些微生物具有降解色素的能力，它们在长，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。维素分解菌不易区分。2筛选过筛选过程中用到的两种培养基程中用到的两种培养基(1)名名称称：纤纤维维素素分分解解菌

7、菌的的选选择择培培养养基基；纤纤维维素分解菌的素分解菌的鉴别鉴别培养基。培养基。(2)区区别别纤纤维维素素分分解解菌菌的的选选择择培培养养基基为为液液体体培培养养基基，利利用用液液体体培培养养基基能能使使营营养养成成分分充充分分消消耗耗，以以增增加加纤纤维维素分解菌的素分解菌的浓浓度。度。纤纤维维素素分分解解菌菌的的鉴鉴别别培培养养基基为为固固体体培培养养基基，因因为为要在培养基上形成我要在培养基上形成我们们肉眼可肉眼可见见的菌落。的菌落。在上述在上述选择选择培养基中能以培养基中能以纤维纤维素作素作为为碳源和能碳源和能源的微生物可以正常生源的微生物可以正常生长长，而其他，而其他绝绝大多数微生大

8、多数微生物不能正常生物不能正常生长长；而在上述；而在上述鉴别鉴别培养基中，培养基中，绝绝大大多数微生物都可以正常生多数微生物都可以正常生长长。2与分解尿素与分解尿素细细菌的流程区菌的流程区别别(1)分分离离分分解解尿尿素素的的细细菌菌的的取取样样流流程程图图是是将将土土样样制制成成的的菌菌悬悬液液直直接接涂涂布布在在以以尿尿素素为为惟惟一一氮氮源源的的选选择择培养基上，直接分离得到菌落。培养基上，直接分离得到菌落。(2)分离分解分离分解纤维纤维素的微生物的素的微生物的实验实验流程通流程通过选择过选择培养基，使培养基，使纤维纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在涂布在

9、选择选择培养基上。其他步培养基上。其他步骤骤基本相同。基本相同。方法一：方法一：方法二：方法二：步步骤骤培养基经涂布培养培养基经涂布培养先先长出菌长出菌落落再再覆盖覆盖1mg/mL的的CR溶溶液液(1015min后后)倒去倒去CR溶液溶液加入加入1mol/L的的NaCl溶溶液液15min后倒掉后倒掉NaCl溶液溶液出现透明圈出现透明圈配置配置10mg/mL的的CR溶液溶液灭菌灭菌按照按照1mLCR溶液溶液/200mL培养培养基的比例基的比例混匀混匀倒平板倒平板接种后接种后培养培养出现透明圈出现透明圈优优点点显示出的颜色基本上是纤显示出的颜色基本上是纤维素分解菌的作用维素分解菌的作用操作简便，不存在菌落的混杂问操作简便，不存在菌落的混杂问题题缺缺点点操作繁琐，加入刚果红会操作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂使菌落之间发生混杂由于产生淀粉酶的微生物也形由于产生淀粉酶的微生物也形成透明圈，所以可能产生假阳性成透明圈，所以可能产生假阳性反应。反应。有些微生物具有降解色素的能有些微生物具有降解色素的能力，他们在培养过程中也会形成力，他们在培养过程中也会形成明显的透明圈，与纤维素的分解明显的透明圈，与纤维素的分解菌不易区分。菌不易区分。两种刚果红染色法的比较两种刚果红染色法的比较：