消毒剂效力及有效期验证方案.doc

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1、 TOC o 1-2 h z TEST METHOD VALIDATION PROTOCOL分析方法验证方案方案编号(版本号:):Protocol No. (Version:) :(V: )TMP-07-077分析方法名称TEST METHOD:QUALIFICATION OF DISINFECTANT EFFECTIVENESS AND STABILITY 消毒剂效力及有效期确认方案 PROTOCOL APPROVAL PAGE方案批准页PROTOCOL PREPARATION 方案准备WYETH PHARMACEUTICAL CO., LTD. 惠氏制药SIGNATURE 签名DATE 日

2、期 QC Microbial Analyst QC Microbial AnalystPROTOCOL REVIEW 方案复核QC Senior AnalystQC ManagerQAValidation OfficerPROTOCOL APPROVAL 方案批准 Senior QO Manager PROTOCOL REVISION HISTORY PAGE方案修订历史记录页REVISION NUMBER修订次数VERSION版本号REVISION CONTENT修订内容01Original原稿1.目的PURPOSE52.范围SCOPE53.引言INTRODUCTION54.参考资料REFE

3、NRENCE65.验证方法TEST METHOD65.1.所用仪器和物料65.2.测试工作菌种65.3.实验程序66.承受标准86.1.消毒效力承受标准：86.2.中和效力控制及其承受标准：81. 目的PURPOSE验证惠氏苏州工厂目前使用的几种消毒剂Process LpHse: 酸性、Process Vesphene se:碱性、Ethanol 酒精溶液、快活溶液，在不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面等不同材质上的消毒效力，同时验证消毒剂的使用有效期。2. 范围SCOPE本验证需要验证的消毒剂有：Process LpHse: (酸性)、Process Vesphene se:(碱性)、

4、Ethanol 酒精溶液、快活溶液FORWARD disinfectant四种。表1：各消毒剂使用时涉及的材质消毒剂类型适用对象所涉及的材质Process LpHse: 酸性酚类消毒剂广谱、中效生产设备/器具/车间地面、墙壁、天花板不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面Process Vesphene se:碱性酚类消毒剂广谱、中效车间设备/器具/操作间地漏不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面Ethanol 酒精溶液醇类消毒剂中效生产设备/器具/微生物实验室不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面快活溶液季铵盐类消毒剂低效车间地面、墙壁、天花板/非控制区域、车间公用区不锈钢、橡胶、瓷砖、

5、玻璃、塑料门帘、墙面3. 引言INTRODUCTION本验证的原理是，在某种材质外表接种0.1ml (104-105CFU)的菌种，室温下自然风干后，将消毒剂直接喷在材质外表，等消毒剂作用一段时间后，检验没有被杀灭的细菌数；根据细菌被杀灭的数量，来判断消毒剂的杀菌效果。实际消毒操作时，消毒剂喷到要消毒物体外表后，再通过人为的涂擦等操作使消毒剂与物体外表充分接触，同时，此操作也会机械去除掉一局部微生物。在该验证中，消毒剂是喷到材质外表，这种方法要比实际消毒时的效果差，因此验证的结果更能表达实际的消毒效果。4. 参考资料REFENRENCEDisinfectant Effectiveness St

6、udy812-Analytical Report-0807-1.0SOPTS-35(V5)5. 验证方法TEST METHOD5.1. 所用仪器与物料 所用培养皿、移液管、容器均在121度下灭菌30分钟后使用 无菌一次性培养皿，移液管。 生物平安柜(BHC-1300A/B3生物平安柜)工作窗口吸入风速为 灭菌锅 培养箱25度与32度各一个5.2. 测试工作菌种 大肠埃希菌 CMCC(B)44102菌种斜面 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003菌种斜面 白色念珠菌 CMCC98001菌种斜面 环境菌种科氏葡萄球菌斜面六、九、十月环境检测沉降菌平板上连续检出科氏葡萄球菌，特选此菌为环境菌种需验

7、证的消毒剂应质量合格并在有效期即将完毕时开场验证试验，实验所用的仪器设备均在校正合格期限内。5.3. 实验程序5.3.1. 消毒剂的配置：消毒剂按照相关的程序进展稀释，配置好的消毒剂溶液储存在实际操作时使用的喷壶中，在有效期内7天每天模拟日常使用方法使用，第8天开场验证试验。消毒剂配置方法及消毒反响时间见表2.5.3.2. 材质的准备：所需的材质均是在实际操作中消毒剂所消毒的外表材质，准备的材质需为无菌材质，在实验过程中，每个实验组需3块同种材质同时进展。消毒剂稀释比例反响时间菌种Process LpHse: 酸性1:256(v/v)3,5,10minutes大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌

8、科氏葡萄球菌Process Vesphene se:碱性1:128(v/v)3,5,10minutes大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌Ethanol 酒精溶液75%2,3,5minutes大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌快活溶液1:10(v/v)3,5,10minutes大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌5.3.3. 菌悬液的制备：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌的营养琼脂斜面培养物，接种至营养琼脂斜面上，在35 37培养20 22小时。再接种上述菌种的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，在35 37培养18 24小时，上述营养肉

9、汤培养物用0.9%无菌生理盐水溶液逐级10倍稀释，制成每0.1 ml含菌落数104-105CFU的菌悬液。5.3.4. 实验操作：准备3块待测外表材质于生物平安柜内，分别吸取0.1 ml(104-105CFU)接种于3块待测外表材质上，让其在生物平安柜中自然风干后待测，将配置好的的消毒装入喷壶中，均匀地喷洒在材质的外表后立即开场计时，按表2等计时多少时间？完毕后，迅速把该材质放入100ml的D/E 中与液中，充分振荡1min后经0.45微米的滤膜过滤，用100ml/次的D/E 中与液冲洗3次，取滤膜放在D/E中与琼脂平板上培养。培养条件：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及 环境菌种科氏葡

10、萄球菌在30-35，至少3天，重复以上实验操作3次，完成验证实验。5.3.5. 阴性控制实验： -micron的滤膜后，取滤膜放在D/E中与琼脂平板上培养，培养条件：细菌30-35，至少3天，5.3.6. 阳性控制实验：准备3块无菌的待测外表材质于生物平安柜内，分别吸取0.1 ml(10-100CFU)阳性菌接种于3块待测外表材质上，让其在生物平安柜中自然风干后，将每种带菌的材质放入100ml无菌的缓冲溶液中，充分振荡1min，经0.45微米的滤膜过滤，用100ml/次的D/E 中与液冲洗3次，取滤膜放置于D/E中与琼脂平板上培养。培养条件：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏

11、葡萄球菌在30-35，至少3天。6. 承受标准6.1. 消毒效力承受标准：计算Log Reduction，评价该种消毒剂对该菌种的杀灭效果，Log Reduction=Log(Average#of Organisms in Control Plates)-Log(Average# of Organisms in Test Plates)承受标准：Log Reduction36.2. 中与效力控制及其承受标准：吸5ml已配制好的消毒剂，经0.45微米的滤膜过滤后，用100ml/次中与液冲洗3次，参加1ml菌悬液10-100cfu置滤膜上，用100ml/次中与液冲洗1次，取滤膜放在D/E中与琼脂平板上培养，计数。每种菌重复做3份样品。分别取上述菌悬液1ml10-100cfu置100*10mm的无菌平皿，浇入约20ml45TSA培养，计数。每种菌重复做3份样品。培养条件：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌与环境菌种科氏葡萄球菌30-35，至少3天。根据结果计算回收率：Percent Recovery=承受标准：Percent Recovery70% 第 9 页