消毒剂效力及有效期验证方案(9页).doc

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1、-消毒剂效力及有效期验证方案TEST METHOD VALIDATION PROTOCOL分析方法验证方案方案编号(版本号:):Protocol No. (Version:) :(V: )TMP-07-077分析方法名称TEST METHOD:QUALIFICATION OF DISINFECTANT EFFECTIVENESS AND STABILITY 消毒剂效力及有效期确认方案 PROTOCOL APPROVAL PAGE方案批准页PROTOCOL PREPARATION 方案准备WYETH PHARMACEUTICAL CO., LTD. 惠氏制药有限公司SIGNATURE 签名DAT

2、E 日期 QC Microbial Analyst QC Microbial AnalystPROTOCOL REVIEW 方案复核QC Senior AnalystQC ManagerQAValidation OfficerPROTOCOL APPROVAL 方案批准 Senior QO Manager PROTOCOL REVISION HISTORY PAGE方案修订历史记录页REVISION NUMBER修订次数VERSION版本号REVISION CONTENT修订内容01Original原稿1.目的PURPOSE52.范围SCOPE53.引言INTRODUCTION54.参考资料R

3、EFENRENCE65.验证方法TEST METHOD65.1.所用仪器和物料65.2.测试工作菌种65.3.实验程序66.接受标准86.1.消毒效力接受标准：86.2.中和效力控制及其接受标准：81. 目的PURPOSE验证惠氏苏州工厂目前使用的几种消毒剂Process LpHse: 酸性、Process Vesphene se:碱性、Ethanol 酒精溶液、快活溶液，在不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面等不同材质上的消毒效力，同时验证消毒剂的使用有效期。2. 范围SCOPE本验证需要验证的消毒剂有：Process LpHse: (酸性)、Process Vesphene se:(碱

4、性)、Ethanol 酒精溶液、快活溶液FORWARD disinfectant四种。表1：各消毒剂使用时涉及的材质消毒剂类型适用对象所涉及的材质Process LpHse: 酸性酚类消毒剂（广谱、中效）生产设备/器具/车间地面、墙壁、天花板不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面Process Vesphene se:碱性酚类消毒剂（广谱、中效）车间设备/器具/操作间地漏不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面Ethanol 酒精溶液醇类消毒剂（中效）生产设备/器具/微生物实验室不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面快活溶液季铵盐类消毒剂（低效）车间地面、墙壁、天花板/非控制区域、车间公用

5、区不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面3. 引言INTRODUCTION本验证的原理是，在某种材质表面接种0.1ml (104-105CFU)的菌种，室温下自然风干后，将消毒剂直接喷在材质表面，等消毒剂作用一段时间后，检验没有被杀灭的细菌数；根据细菌被杀灭的数量，来判断消毒剂的杀菌效果。实际消毒操作时，消毒剂喷到要消毒物体表面后，再通过人为的涂擦等操作使消毒剂与物体表面充分接触，同时，此操作也会机械去除掉一部分微生物。在该验证中，消毒剂是喷到材质表面，这种方法要比实际消毒时的效果差，因此验证的结果更能体现实际的消毒效果。4. 参考资料REFENRENCEDisinfectant Effec

6、tiveness Study（812-Analytical Report-0807-1.0）SOPTS-35(V5)5. 验证方法TEST METHOD5.1. 所用仪器和物料 所用培养皿、移液管、容器均在121度下灭菌30分钟后使用 无菌一次性培养皿，移液管。 生物安全柜(BHC-1300A/B3生物安全柜)工作窗口吸入风速为 灭菌锅 培养箱（25度和32度各一个）5.2. 测试工作菌种 大肠埃希菌（ CMCC(B)44102）菌种斜面 金黄色葡萄球菌 （CMCC(B)26003）菌种斜面 白色念珠菌（ CMCC98001）菌种斜面 环境菌种科氏葡萄球菌斜面（六、九、十月环境检测沉降菌平板上

7、连续检出科氏葡萄球菌，特选此菌为环境菌种）需验证的消毒剂应质量合格并在有效期即将结束时开始验证试验，实验所用的仪器设备均在校正合格期限内。5.3. 实验程序5.3.1. 消毒剂的配置：消毒剂按照相关的程序进行稀释，配置好的消毒剂溶液储存在实际操作时使用的喷壶中，在有效期内（7天）每天模拟日常使用方法使用，第8天开始验证试验。消毒剂配置方法及消毒反应时间见表2.5.3.2. 材质的准备：所需的材质均是在实际操作中消毒剂所消毒的表面材质，准备的材质需为无菌材质，在实验过程中，每个实验组需3块同种材质同时进行。消毒剂稀释比例反应时间菌种Process LpHse: 酸性1:256(v/v)3,5,1

8、0minutes大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌Process Vesphene se:碱性1:128(v/v)3,5,10minutes大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌Ethanol 酒精溶液75%2,3,5minutes大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌快活溶液1:10(v/v)3,5,10minutes大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌5.3.3. 菌悬液的制备：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌的营养琼脂斜面培养物，接种至营养琼脂斜面上，在35 37培养20 22小时。再接种上述菌种的新鲜培养物至营养肉汤培

9、养基中，在35 37培养18 24小时，上述营养肉汤培养物用0.9%无菌生理盐水溶液逐级10倍稀释，制成每0.1 ml含菌落数104-105CFU的菌悬液。5.3.4. 实验操作：准备3块待测表面材质于生物安全柜内，分别吸取0.1 ml(104-105CFU)接种于3块待测表面材质上，让其在生物安全柜中自然风干后待测，将配置好的的消毒装入喷壶中，均匀地喷洒在材质的表面后立即开始计时，按表2等计时多少时间？结束后，迅速把该材质放入100ml的D/E 中和液中，充分振荡1min后经0.45微米的滤膜过滤，用100ml/次的D/E 中和液冲洗3次，取滤膜放在D/E中和琼脂平板上培养。培养条件：大肠埃

10、希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及 环境菌种科氏葡萄球菌在30-35，至少3天，重复以上实验操作3次，完成验证实验。5.3.5. 阴性控制实验： -micron的滤膜后，取滤膜放在D/E中和琼脂平板上培养，培养条件：细菌30-35，至少3天，5.3.6. 阳性控制实验：准备3块无菌的待测表面材质于生物安全柜内，分别吸取0.1 ml(10-100CFU)阳性菌接种于3块待测表面材质上，让其在生物安全柜中自然风干后，将每种带菌的材质放入100ml无菌的缓冲溶液中，充分振荡1min，经0.45微米的滤膜过滤，用100ml/次的D/E 中和液冲洗3次，取滤膜放置于D/E中和琼脂平板上培养。培养条件：大

11、肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌在30-35，至少3天。6. 接受标准6.1. 消毒效力接受标准：计算Log Reduction，评价该种消毒剂对该菌种的杀灭效果，Log Reduction=Log(Average#of Organisms in Control Plates)-Log(Average# of Organisms in Test Plates)接受标准：Log Reduction36.2. 中和效力控制及其接受标准：吸5ml已配制好的消毒剂，经0.45微米的滤膜过滤后，用100ml/次中和液冲洗3次，加入1ml菌悬液（10-100cfu）置滤膜上，用100ml/次中和液冲洗1次，取滤膜放在D/E中和琼脂平板上培养，计数。每种菌重复做3份样品。分别取上述菌悬液1ml（10-100cfu）置100*10mm的无菌平皿，浇入约20ml（45）TSA培养，计数。每种菌重复做3份样品。培养条件：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和环境菌种科氏葡萄球菌30-35，至少3天。根据结果计算回收率：Percent Recovery=接受标准：Percent Recovery70% -第 9 页