兽医微生物学实验.ppt

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1、兽医微生物学实验 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望实验一 显微镜的构造和使用及细菌形态结构的观察进入实验室的注意事项1。穿工作服2。书本等物品放入抽屉3。树立无菌观念4。不能抽烟、吃零食5。爱护公物，注意节约一、目的要求1。了解显微镜的简单构造和原理2。学习掌握油镜的使用技术3。观察细菌的基本形态二、普通光学显微镜的简单原理1。支持部分：镜臂、镜台、镜筒、粗细调节器2。放大部分：接目镜、接物镜3。照明部分：反光镜、聚光器、滤光镜三、几种显微镜的简单原

2、理 1。暗视野 2。相差 3。荧光 4。电子四、油镜的识别及使用原理五、使用完毕显微镜及标本片的处理作 业1。普通显微镜与油镜使用上有何区别？2。绘出你所观察到的细菌形态3。你最喜欢哪个细菌，为什么？枯草杆菌，革兰氏染色，G+枯草杆菌，芽胞简易染色金黄色葡萄球菌，革兰氏染色，G+大肠杆菌，革兰氏染色,G-破伤风梭菌，芽胞染色实验二实验二 细菌的抹片制备及染色细菌的抹片制备及染色一、目的要求1。掌握细菌抹片的制备方法2。掌握几种常用的染色方法和技术及无菌操作技术3。巩固显微镜的使用，了解细菌的染色特性、形态二、材料大肠杆菌：斜面，肉汤金黄色葡萄球菌：斜面，肉汤枯草杆菌：斜面三、制片及染色步骤取干

3、净玻片-抹片-干燥-固定-染色-干燥镜检四、常用的几种染色方法（一）革兰氏染色法1。草酸铵结晶紫染色1-2，水洗2。革兰氏碘液媒染1-2，水洗3。95%酒精脱色约30-1，水洗4。沙黄水溶液复染10 -30 ，水洗5。吸干，镜检（二）姬姆萨染色法1。甲醇固定3，时间长短均可2。姬姆萨液足量30 或数小时至24h，水洗3。吸干镜检（三）瑞氏染色法抹片干燥无需固定，直接滴加染色1-3，再加等量中性蒸馏水，轻轻混匀，续染15，水洗，吸干镜检（四）美兰染色法1。固定好抹片加上足量染液2-3 2。吸干镜检作业1。说说你的实验结果2。根据实验体会，你认为制备染色标本时应注意哪些事项？3。作革兰氏染色涂片为

4、什么不能过于浓厚？其染色成败关键一步是什么？实验三 培养基的制备一、目的要求1。掌握基础培养基制备的原则和要求2。掌握一般培养基的制备过程及pH测定二、实验材料（略）三、制作的一般要求 须含有细菌生长所需的营养物质盛器需无菌，且不含抑菌生长的物质pH应符合细菌生长的要求，一般在7.27.6要过滤，应为透明或半透明状，以便观察细菌生长变化制好后需高压灭菌四、步骤称取 溶解调pH 过滤分 灭菌菌检普通肉汤的制备 蛋白胨 10g，牛肉膏 5g，NaCl 5g K2HPO4 1g，蒸馏水 1000ml 分别称取以上物品，置铝锅内加热溶解。取5ml肉汤于试管内用0.1mol/L NaOH校pH至7.4-

5、7.6，根据其用量计算所配培养基需用的1mol/L NaOH用量，用滤纸过滤，分装至短试管所需1N NaOH的量 培养基量 校正时所需0.1mol/L NaOH量 5 10普通琼脂培养基的制备 取已配好的肉汤500 mL于铝锅内，加入琼脂10g，加热溶解，用纱布、棉花过滤、分装灭菌：将分装好的培养基扎口后置高压灭菌锅内121（15磅）20-30分钟菌检：抽取样品，置37 24h作 业制作培养基时应注意哪几点？为什么肉汤培养基在高压灭菌前pH要略调高一些？为什么校正pH时，调校少量培养基用0.1 mol/L NaOH，而调校大量培养基时用1 mol/L NaOH？说说你们组的产量和品质实验四 细

6、菌分离培养及移植一、目的1.掌握细菌分离培养的基本要领和常用方法2.使被检材料适当稀释，以求获得独立单在菌落二、需氧分离培养法1.平板分离培养法2.芽胞需氧分离培养法3.化学药品分离培养法4.实验动物分离培养法三、实验内容1.平板划线2.肉汤培养3.斜面移植4.接种完毕标明细菌、日期、姓名，置37培养24h四、作业1.何谓纯培养？分离培养的目的何在？2.在挑取固体培养物上的细菌作平板划线时，为什么每次都要将接种环上剩余的细菌烧掉？3.为什么要把培养皿倒置培养？实验五 药敏试验一、目的要求学会药敏试验的操作方法及观察抑菌圈的范围二、试验材料菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌药敏纸片：卡那霉素，阿米卡

7、星，红霉素，复方新诺明，呋喃妥因，庆大霉素，链霉素镊子、酒精灯等三、操作步骤1.每人取平板接种细菌，致密划线2.以无菌镊子将各种药敏纸片分别是贴于培养基表面3.倒置，37培养24h，观察结果四、结果判定 根据药敏纸片周围有无抑菌圈及其大小，来判断该菌对各种药物的敏感程度，分为：高度敏感、中度敏感、低度敏感、不敏感五、作业1.什么叫细菌对抗菌药物的敏感度？了解它有何实际意义？2.写出你所做的药敏试验结果。实验六 细菌的生化试验一、目的要求1。了解细菌生化试验在细菌学诊断上的重要意义2。掌握几种生化试验的方法二、实验材料大肠杆菌产气杆菌变形杆菌兔沙门氏菌三、实验内容及操作1。糖或醇发酵试验2。靛基

8、质（吲哚）试验3。甲基红（MR）试验4。VP二氏试验5。枸椽酸盐利用试验6。硫化氢试验7。尿素试验8。细菌运动力试验作业1。生化反应记录表2。解说你所做的生化反应各种原理3。以上生化反应试验哪几个是分解糖？哪几个是分解蛋白质？1.靛基质实验（蛋胨水）取出试管 乙醚1ml，振荡静置，待分层后沿管壁加入对二甲基氨基苯甲醛45滴 阳性者在分界处出现玫瑰吲哚2.葡胨水一分为二2。1 甲基红试验取出试管甲基红35滴，摇匀红色为阳性，黄色为阴性，橙色为可疑2。2 VP试验取出试管VP甲液0.6ml，再加VP乙液0.2ml，充分混匀静置，15分钟后看结果，红色为阳性，不变为阴性实验七 病毒鸡胚培养（一）一、

9、目的要求掌握鸡胚接种技术和收获病毒方法二、实验材料9-10日龄鸡胚新城疫病毒灭菌注射器棉球（酒精、碘酊）三、内容及操作1。绒毛尿囊腔接种选9-10日龄鸡胚，先观察鸡胚发育情况划出气室，离气室边缘5mm处作一记号消毒打孔：记号处和顶端各打一孔吸取病料，由注射孔刺入3-5mm，注射0.1-0.2ml病料拨出针头，石蜡封闭两孔（先下后上）蛋壳注明日期，学号以及病毒名称置37培养，24h内死亡或血管不清者弃去以后每日照蛋2次，死胚置4 保存，96h不死者将其冻死6h冷冻后可收获尿囊液检查实验八 病毒鸡胚培养（二）收获尿囊液气室消毒 击破气室、卵壳并弃去 无菌小镊撕支壳膜再撕去绒尿膜和羊膜 无菌吸管吸取

10、尿囊液置无菌瓶中 待检测HA及HI试验掌握HA和HI的基本操作技术，了解其实用价值血球凝集试验（HA）孔号123456789101112病毒稀释度1：21：41：81：16 1：32 1：64 1：128 1：256 1：5121：1024 1：2048红细胞对照生理盐水（l）505050505050505050505050病毒（l）5050505050505050505050-1%鸡红细胞（l）50505050505050505050505037 1530min判定结果#+-弃去血球凝集抑制试验（HI）孔号123456789101112病毒稀释度1：21：41：81：16 1：32 1：64 1：128 1：256 1：5121：1024病毒对照血清对照生理盐水（l）50505050505050505050-新城疫抗体(l)50505050505050505050-504单位病毒(l)5050505050505050505050-37 1530min1%鸡红细胞(l)50505050505050505050505037 1530min判定结果-+#-弃去作业常用鸡胚接种方法有哪些？HA和HI试验中，哪个是特异的抗原抗体反应？