微生物学实验指导MICROBIOLOGYEXPERIMENT微生物学实验指导微生物学实验.ppt

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1、微生物学实验指导MICROBIOLOGYEXPERIMENT微生物学实验指导微生物学实验 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望实验目的：实验目的：使学生能较熟练的掌握研究微生物的基本方法和使学生能较熟练的掌握研究微生物的基本方法和微生物操作的基本技能。为今后开展微生物学的研微生物操作的基本技能。为今后开展微生物学的研究工作和生产应用奠定良好的基础。究工作和生产应用奠定良好的基础。1训练学生掌握微生物学最基本的操作技能训练学生掌握微生物学最基本的操作技能2

2、使学生加深和巩固对微生物基本理论知识的理解使学生加深和巩固对微生物基本理论知识的理解3培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力4培养学生实事求是、严肃认真的科学态度培养学生实事求是、严肃认真的科学态度实验要求：实验要求：为了保证实验课的质量和提高实验效果，要求学生做到：为了保证实验课的质量和提高实验效果，要求学生做到：（一）每次实验课前必须对实验内容进行充分的（一）每次实验课前必须对实验内容进行充分的预习预习，明确试验目的、，明确试验目的、内容、原理及操作中注意的事项，以保证实验的进度和效果内容、原理及操作中注意的事项，以保证实验的进度和效果（二

3、）认真执行微生物学工作中的（二）认真执行微生物学工作中的无菌操作无菌操作规程，切实按照实验直到规程，切实按照实验直到所列的实验步骤，循序进行各项操作，以确保实验安全和获得预所列的实验步骤，循序进行各项操作，以确保实验安全和获得预期效果。期效果。（三）实验时注意科学的分配和运用时间，在规定时间内保质保量地（三）实验时注意科学的分配和运用时间，在规定时间内保质保量地完成各项实验内容。完成各项实验内容。（四）按规定时间检查实验结果时，必须按照（四）按规定时间检查实验结果时，必须按照实事求是实事求是地进行观察，地进行观察，记录下实验的现象与结果，并进行分析，得出结论。若遇有理论记录下实验的现象与结果，

4、并进行分析，得出结论。若遇有理论不符的结果时，应探究其原因，以培养科学思维能力。不符的结果时，应探究其原因，以培养科学思维能力。（五）（五）每次实验完成后，按作业要求写出实验报告。文字力求简明准每次实验完成后，按作业要求写出实验报告。文字力求简明准确，绘图力求真实，图标力求简洁明了。确，绘图力求真实，图标力求简洁明了。实验内容和安排：实验内容和安排：1微生物实验常用玻璃仪器洗涤及干热灭菌（微生物实验常用玻璃仪器洗涤及干热灭菌（3学时）学时）2培养基的制备和灭菌（培养基的制备和灭菌（4）3环境和人体微生物的检验及无菌操作技术（环境和人体微生物的检验及无菌操作技术（3）4微生物菌落的观察（微生物菌

5、落的观察（3）5显微镜的使用和细菌的运动性观察（显微镜的使用和细菌的运动性观察（3）6细菌的单染色和革兰氏染色（细菌的单染色和革兰氏染色（3）7微生物的显微镜计数与酵母菌的死活鉴别染色（微生物的显微镜计数与酵母菌的死活鉴别染色（3）8微生物细胞大小的测定（微生物细胞大小的测定（3）9水中大肠菌群数量的测定水中大肠菌群数量的测定（3）10牛奶酸败与乳酸饮料发酵（牛奶酸败与乳酸饮料发酵（4）考核方案考核方案1、评定成绩坚持公正、真实、科学的原则。、评定成绩坚持公正、真实、科学的原则。3、旷课达、旷课达1/3的或故意损环仪器者判为不及格。的或故意损环仪器者判为不及格。2、实验成绩：、实验成绩：实验报

6、告成绩占实验报告成绩占70%。实验考勤占实验考勤占30。实验一实验一 微生物学实验常用仪器洗涤及微生物学实验常用仪器洗涤及干热灭菌干热灭菌 目的要求目的要求实验原理实验原理实验材料实验材料实验程序实验程序结果与思考题结果与思考题一、目一、目的的要要求求认识认识微生物实验所需要的各种微生物实验所需要的各种器皿器皿，了了解解常用工具和仪器的常用工具和仪器的名称、用途名称、用途。掌握掌握对玻璃器皿的对玻璃器皿的清洗、包扎方法与清洗、包扎方法与干干热灭菌的操作过程热灭菌的操作过程。二、实验原理二、实验原理微微生生物物学学实实验验要要求求较较高高的的无无菌菌状状态态，因因此此，实实验验所所用用的的器器皿

7、皿，大大多多数数要要进进行行消消毒毒、灭灭菌菌从从而而用用以以培培养养微微生生物物，所所以以对对其其质质量量、规规格格、洗洗涤涤和和包包扎扎方方法法均均有有一一定定要要求求。清清洁洁的的玻玻璃璃器器皿皿是是实实验验得得到到正正确确结结果果的的先先决决条条件件，包包扎扎方方法法要要能能保保证证防防止止污污染染杂杂菌菌。空的玻璃器皿一般用干热灭菌空的玻璃器皿一般用干热灭菌.干热灭菌的原理干热灭菌的原理干热灭菌是利用干热灭菌是利用高温高温使微生物细胞内的使微生物细胞内的蛋白质凝固变蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，

8、在菌体受热时，当环境和细胞内含身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则水量越大，则蛋白质凝固蛋白质凝固就越快，反之含水量越少，就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（度要高（160170），），时间要长（时间要长（12h），），但但干热灭菌温度干热灭菌温度不能超过不能超过180，否则，包器皿的纸或，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。三、实三、实验验器器材材玻璃仪器：玻璃仪器：每人每人:培养皿培养皿 4套；套；大试管大试管 4只。只。每组：三角瓶每组：三角

9、瓶 5只；只；烧杯（烧杯（500ml）1只；只；烧杯（烧杯（1000ml）1只；只；中试管中试管 7只；只；吸管（吸管（0.5ml 3支，支，5ml 2支）共支）共5支支 洗涤用品：洗涤用品：去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷等。去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷等。包扎用品：包扎用品：棉花、扎绳、包扎纸等。棉花、扎绳、包扎纸等。四、实验步骤四、实验步骤1、学习下列常用仪器的种类、规格和应用范围、学习下列常用仪器的种类、规格和应用范围：培养皿培养皿；试管试管；三角瓶三角瓶；烧杯；烧杯；吸管；吸管；量筒。量筒。2、学习、学习玻璃器皿的洗涤方法玻璃器皿的洗涤方法：3、学习、学习各种器皿的包扎：各种器皿的包扎：（一

10、）（一）仪器的认识、清洗与包扎仪器的认识、清洗与包扎仪器的认识、清洗与包扎仪器的认识、清洗与包扎由一底一盖组成一套，常用的培养皿皿由一底一盖组成一套，常用的培养皿皿底底直径直径90 mm90 mm，高，高15 mm15 mm，皿底皿盖均为皿底皿盖均为玻璃制成。玻璃制成。制成平板，可用于制成平板，可用于分离、纯化、鉴定菌分离、纯化、鉴定菌种、种、活菌计数以及测定抗生素、噬菌体活菌计数以及测定抗生素、噬菌体的效价等。的效价等。根据其大小和用途不同，有下列三种型号：根据其大小和用途不同，有下列三种型号：(1)大试管大试管(约约18mm180mm):可装倒平板用的培养基可装倒平板用的培养基;可作制备斜

11、面用（需要大量菌体时用）可作制备斜面用（需要大量菌体时用）装液体培养基用于微生物的振荡培养。装液体培养基用于微生物的振荡培养。(2)中试管中试管(1315)mm(100150)mm:装液体培养基培养细菌或做斜面用装液体培养基培养细菌或做斜面用,用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。(3)小试管小试管(1012)mm100mm:一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料的试验。的试验。三角瓶三角瓶:100mL、250mL、500mL和和1000mL用来用来装无菌水、培养基和振荡培养装无菌水、培养基和振

12、荡培养微生物等微生物等.烧杯烧杯:50mL、100mL、250mL、500mL和和1000mL用来用来配制培养基与各种溶液配制培养基与各种溶液等。等。玻璃吸管玻璃吸管:0.2mL、0.5mL、1mL、5mL、10mL玻璃器皿的洗涤方法玻璃器皿的洗涤方法:1、新、新玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤在在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。2、旧、旧玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤（1）试管、培养皿、三角瓶）试管、培养皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗装有固体培养基：装有固体培养基：刮掉，洗涤刮掉，洗涤带病原菌培养物的

13、器皿带病原菌培养物的器皿：先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再洗涤洗涤（2）玻璃吸管）玻璃吸管：吸管尖端对着水流，反复冲洗吸管尖端对着水流，反复冲洗吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即投立即投入盛有自来水的容器中浸泡，实验后集中冲洗。入盛有自来水的容器中浸泡，实验后集中冲洗。塞有棉花的吸管：塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出，然后冲洗用水将棉花冲出，然后冲洗吸过含有微生物培养物的吸管：吸过含有微生物培养物的吸管：2%来苏尔或来苏尔或0.25%新洁尔灭新洁尔灭消毒液中浸泡消毒液中浸泡24小时然后洗小时然后洗吸管内壁有

14、油垢：吸管内壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时，再冲洗洗涤液中浸泡数小时，再冲洗洗涤后，若内壁的水均匀分布成一洗涤后，若内壁的水均匀分布成一薄层薄层，表示完全洗净，若还，表示完全洗净，若还挂有水珠，则需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水冲洗。挂有水珠，则需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水冲洗。洗净后的试管倒置于试管筐内，三角瓶倒置于洗涤架上，培养皿洗净后的试管倒置于试管筐内，三角瓶倒置于洗涤架上，培养皿的皿底和皿盖分开，依次压着皿边排列倒扣在桌上的皿底和皿盖分开，依次压着皿边排列倒扣在桌上,晾干晾干.培养皿的包扎：培养皿的包扎：牛皮纸或旧报纸包紧，一般以牛皮纸或旧报纸包紧，一般以58套套培养皿包成

15、培养皿包成1包包吸管的包扎：吸管的包扎：1在上端约在上端约0.5cm处，塞入一小段处，塞入一小段1.5cm长的棉花（勿用长的棉花（勿用脱脂棉），目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入管内，或不慎脱脂棉），目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入管内，或不慎将菌液吸出管外。将菌液吸出管外。245cm宽的长纸条宽的长纸条.试管和三角瓶等的包扎试管和三角瓶等的包扎1装入待灭菌物品装入待灭菌物品 将包好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。将包好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。注意注意物品不要摆得太挤，以免妨碍空气流通；不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装物品不要摆得太挤，以免妨碍空

16、气流通；不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。纸烤焦起火。2升温升温 接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，让温度逐渐上升。当接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，让温度逐渐上升。当温度升至温度升至100时，关闭排气孔。时，关闭排气孔。调节温度控制器旋钮，直至箱内温度达到所需要温度调节温度控制器旋钮，直至箱内温度达到所需要温度（160170）位置。）位置。3恒温恒温 当温度升到所需温度时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度当温度升到所需温度时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度2h。注意不可再拨动调节旋钮和通气孔注意不可再拨动调节旋钮和通气孔。4降温降温 切断电源、自然降温。切断电源、自然降温。5开箱取物开箱取物 待电烘箱内温度降到待电烘箱内温度降到60以下后，打开箱门以下后，打开箱门，取出灭菌物品。，取出灭菌物品。同时，将温同时，将温度调节旋钮调到零点，并打开通气孔。度调节旋钮调到零点，并打开通气孔。程序程序（干热灭菌）（干热灭菌）结果与思考题结果与思考题1、简述玻璃器皿洗涤的基本要求。、简述玻璃器皿洗涤的基本要求。2、简述干热灭菌的操作步骤。、简述干热灭菌的操作步骤。