华南师范大学实验报告范本.doc

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1、华 南 师 范 大 学 实 验 报 告学生姓名 庄立栋 学 号 20072401052 专 业 理综2班 年级、班级 2007级 课程名称 生物化学实验 实验项目 维生素C的定量测定(2,6二氯酚靛酚滴定法) 实验类型 验证 设计 综合 实验时间 2008 年 11 月 3 日实验指导老师 陈文利/徐杰 实验评分 一、实验目的：学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。二、 实验原理： 维生素C具有很强的还原性。它可分为还原型和脱氢型。还原型抗坏血酸能还原染料2，6二氯酚靛酚,本身则氧化为脱氢型。氧化性2，6二氯酚靛酚在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，还原后变为无色。因此，当用此染料

2、滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，测滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色转变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸成正比。从滴定时2，6二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。 三、 材料试剂与器具：1、 材料：椰菜花；2、 试剂：标准抗坏血酸溶液、2%草酸溶液、1%草酸溶液、0.01%2，6二氯酚靛酚溶液；3、 仪器：锥形瓶（50ml）、移液管（1ml、10ml）、容量

3、瓶（100ml）、微量滴定管；四、 操作步骤：（一）、提取：称取2.1g椰菜花，剪碎后放入研钵中，加入适量2%草酸，研磨成浆状，研磨后将浆状液转移到100ml容量瓶，再用适量的2%草酸洗涤研钵，再将洗液转入100ml容量瓶，重复此操作23次，然后用2%草酸定容至刻度，充分混匀后过滤，弃去最初几个ml滤液。 （二）、滴定：1、标定2，6二氯酚靛酚溶液： 取标准维生素C溶液1ml和9ml1%草酸一起加入50ml锥形瓶中，同时量取10ml草酸加入另一个50ml锥形瓶中做空白对照，用已标定的2，6二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色出现，15s不褪色。记录所用的ml数，计算每ml2，6二氯酚靛酚溶液所用氧化维生

4、素C的mg数（用K表示）。2、样品的测定：取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml，用已标定的2，6二氯酚靛酚溶液滴定至终点，15s不褪色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2分钟，空白滴定方法同前，记录两次所得的结果，求平均值V1，。 （三）、结果计算： 根据实验数据计算出每100ml样品的维生素C含量： （V1-V2）KV100 维生素C含量（mg/100g样品）= V3W 式中：V1为滴定样品所耗用的染料的体积（ml）； V2为滴定空白对照所耗用的染料的体积（ml）； V为样品提取液的总体积（ml）； V3为样品测定时所用的滤液的体积（ml）； K为1mL染料氧化维生素C的量（mg）；。

5、 W为称取样品的重量（g）。五、结果与分析：（一）、数据与计算： 1、标定2，6二氯酚靛酚溶液： 滴定准维生素C溶液所耗费的2，6二氯酚靛酚溶液体积为： 滴定次数第一次滴定第二次滴定平均值标准液所耗用的染料的体积（ml）2.923.002.96空白对照所耗费的2，6二氯酚靛酚溶液体积为：0.28ml所以，每ml2，6二氯酚靛酚溶液所用氧化维生素C的mg数K = 0.1 * 1 / (2.96 0.28) = 0.037mg2、样品的测定：滴定次数第一次滴定第二次滴定平均值滴定样品所耗用的染料的体积V1（ml）1.000.960.98空白对照所耗费的2，6二氯酚靛酚溶液体积V2为：0.24ml3

6、、每100ml样品的维生素C含量：（V1-V2）KV100 维生素C含量（mg/100g样品）= V3W （0.98 0.24）0.037 100 100 = 10 2.1 = 13.0mg/100g（二）、数据及结果的分析： 在这次实验结束后，我将自己的实验数据与其他同学的实验数据进行比较，发现滴定样品所耗用的染料的体积量比其他同学的数据小很多（大约是其他同学的数据的一半），这说明我们的提取液的维生素C含量要比其他同学的少。但材料是相同的，即各个小组的同学的材料取自于同一个椰菜花。我们开始认为椰菜花的不同部位（比如菜花或茎）的维生素C含量会有不同，但通过我们对相关资料的查阅，发现椰菜花的不同

7、部位的维生素C含量差别不大。所以，我们从实验过程和操作方面去分析，认为在实验过程中有两处操作可能导致了提取液中维生素C被氧化或遇光分解，致使提取液中维生素C含量降低：首先，是我们在研磨椰菜花是所用时间过长：其次，我们在滴定时由于锥形瓶中试剂由无色转为粉红色的过程较难判断，导致滴定时间过长（远不止2min）。我认为这些操作的不足可以通过以下方法予以改良。在研磨时注意时间的控制，尽量缩短研磨的时间。过滤后的滤液应遮光。在滴定过程中，可分2次滴定，第一次为粗测，即大概知道滴定一定量的样品液需要2，6二氯酚靛酚溶液多少体积。第二次滴定为精确测量，在第一次滴定已有数据的基础上，可在开始时适当加快滴定速度

8、，到接近滴定终点时，放慢速度滴定，可取的较好的实验结果。实验中还需注意一些问题： (1) 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。(2) 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1mL或多于4mL，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释倍数。 (3) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。 (4) 2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而1%草酸无此作用。 (5) 干扰滴定因素有：若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，或加1mL氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。Fe2可还原二氯酚靛酚。对含有大量Fe2的样品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此时Fe2不会很快与染料起作用。样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于15秒内不消退为终点。六、参考文献：张龙翔，高级生物化学实验选编，高等教育出版社，1988张龙翔，张庭芳，李令缓主编.生物实验方法和技术.（第二版）高等教育出版社，1997苏拨贤，生物化学制备技术，科学出版社，1986